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牛邊蟲病微量補(bǔ)體檢測檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-14 03:58:54 更新時(shí)間：2025-05-13 03:58:54

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

牛邊蟲病微量補(bǔ)體檢測概述

牛邊蟲?。ˋnaplasmosis）是由邊緣無漿體（Anaplasma marginale）引起的一種蜱傳性血液原蟲病，可導(dǎo)致貧血、發(fā)熱、流產(chǎn)甚至死亡，對(duì)養(yǎng)牛業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。微量補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（Micro-Complement Fixation Test, CFT）是一種經(jīng)典的血清學(xué)檢測方法，通過檢測動(dòng)物血清中特異性抗體與抗原結(jié)合后消耗補(bǔ)體的能力，判斷是否存在牛邊蟲感染。該方法具有操作簡便、成本低、適合批量樣本檢測的特點(diǎn)，尤其適用于基層實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)場篩查。

檢測項(xiàng)目

牛邊蟲病微量補(bǔ)體檢測的主要項(xiàng)目包括：
1. 牛血清中抗邊緣無漿體抗體檢測
2. 補(bǔ)體效價(jià)測定（用于標(biāo)準(zhǔn)化試驗(yàn)體系）
3. 抗原與抗體特異性反應(yīng)的補(bǔ)體消耗率分析
4. 樣本的陰/陽性判定及效價(jià)梯度檢測
5. 檢測范圍涵蓋急性感染期IgM抗體和恢復(fù)期IgG抗體

檢測儀器

檢測過程中需使用以下核心儀器設(shè)備：
1. 酶標(biāo)儀（用于光密度值測定）
2. 微量振蕩器（保證反應(yīng)體系均勻混合）
3. 高速低溫離心機(jī)（血清樣本處理）
4. 恒溫水浴箱（維持37℃反應(yīng)溫度）
5. 微量移液器（精確加樣）
6. 96孔U型微量反應(yīng)板（補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)載體）

檢測方法

標(biāo)準(zhǔn)檢測流程分為四個(gè)階段：
1. 樣本預(yù)處理：采集牛靜脈血分離血清，56℃滅活30分鐘消除非特異性反應(yīng)
2. 補(bǔ)體系統(tǒng)制備：采用豚鼠補(bǔ)體，通過溶血素滴定確定補(bǔ)體效價(jià)
3. 抗原-抗體反應(yīng)：將標(biāo)準(zhǔn)抗原與待檢血清按比例混合，加入定量補(bǔ)體，37℃孵育18小時(shí)
4. 結(jié)果判定：加入溶血指示系統(tǒng)（綿羊紅細(xì)胞+溶血素），觀察溶血程度，通過OD值計(jì)算補(bǔ)體消耗率，效價(jià)≥1:8判為陽性

檢測標(biāo)準(zhǔn)

本檢測遵循以下技術(shù)規(guī)范：
1. OIE《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)》（2023版）第3.4.2章
2. GB/T 18648-2020《動(dòng)物疫病診斷技術(shù)規(guī)程牛邊蟲病》
3. NY/T 562-2015《動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測規(guī)范》
4. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：陰陽性對(duì)照符合率≥95%，批內(nèi)變異系數(shù)≤15%
5. 結(jié)果判讀采用"50%溶血抑制法"，陽性判定臨界值為OD490nm≤0.3

需要注意的是，微量補(bǔ)體檢測法可能出現(xiàn)假陽性（與其他立克次體交叉反應(yīng)）或假陰性（早期感染抗體未達(dá)閾值），建議結(jié)合PCR檢測或血涂片鏡檢進(jìn)行綜合診斷。最新研究顯示，采用基因工程重組抗原（如MSP5蛋白）可顯著提高檢測特異性（可達(dá)92%以上）。