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非洲馬瘟診斷檢測

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發(fā)布時間：2025-05-14 03:52:07 更新時間：2025-05-13 03:52:08

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

非洲馬瘟診斷檢測概述

非洲馬瘟（African Horse Sickness, AHS）是由非洲馬瘟病毒（AHSV）引起的一種急性或亞急性傳染病，主要通過庫蠓等吸血昆蟲傳播，主要感染馬、騾、驢等馬科動物。該病具有高發(fā)病率和高死亡率的特點，被世界動物衛(wèi)生組織（WOAH）列為必須通報的動物疫病。由于非洲馬瘟的暴發(fā)可能對畜牧業(yè)、賽馬業(yè)及國際貿(mào)易造成重大經(jīng)濟損失，快速、準(zhǔn)確的實驗室診斷對疫情監(jiān)測、防控和溯源至關(guān)重要。

主要檢測項目

非洲馬瘟的診斷檢測主要包括以下幾類項目：
1. 病毒分離與鑒定：通過接種敏感細胞（如Vero細胞）或?qū)嶒瀯游锓蛛x病毒，結(jié)合電子顯微鏡觀察病毒形態(tài)。
2. 核酸檢測：針對AHSV的基因組（如VP7基因）進行RT-PCR、實時熒光定量PCR或全基因組測序。
3. 血清學(xué)檢測：檢測動物血清中的特異性抗體，包括ELISA、補體結(jié)合試驗（CFT）和病毒中和試驗（VNT）。
4. 病理學(xué)檢測：對病死動物的心肺組織進行病理切片觀察，發(fā)現(xiàn)特征性病變（如肺水腫、心肌出血）。

常用檢測儀器

非洲馬瘟實驗室診斷需依賴以下核心設(shè)備：
- 分子生物學(xué)儀器：PCR儀、實時熒光定量PCR儀、凝膠成像系統(tǒng)
- 血清學(xué)檢測設(shè)備：酶標(biāo)儀（ELISA Reader）、微量移液器、生物安全柜
- 病毒培養(yǎng)設(shè)備：細胞培養(yǎng)箱、超速離心機、電子顯微鏡
- 樣本處理儀器：組織勻漿機、低溫冷凍離心機、核酸提取儀

檢測方法詳解

1. 病毒分離法：
將疑似樣本（血液、脾臟）接種于Vero細胞，觀察細胞病變效應(yīng)（CPE），通過免疫熒光或電鏡確認(rèn)病毒存在，是診斷的"金標(biāo)準(zhǔn)"，但耗時較長（5-7天）。
2. RT-PCR檢測：
采用針對AHSV VP7基因的特異性引物，通過逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增病毒RNA，可在4-6小時內(nèi)獲得結(jié)果，靈敏度和特異性均超過95%。
3. 競爭ELISA法：
使用重組VP7蛋白包被板，檢測血清中的IgG抗體，適用于大規(guī)模篩查，符合OIE推薦標(biāo)準(zhǔn)，檢測周期約3小時。
4. 實時熒光定量PCR：
可定量檢測病毒載量，區(qū)分不同血清型（AHSV有9個血清型），對早期感染和隱性攜帶者具有更高敏感性。

檢測標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范

非洲馬瘟檢測需遵循以下國際和國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)：
- WOAH《陸生動物診斷試驗手冊》：規(guī)定病毒分離、RT-PCR和ELISA的標(biāo)準(zhǔn)操作流程
- GB/T 22915-2008：中國國家標(biāo)準(zhǔn)《非洲馬瘟診斷技術(shù)》
- ISO/IEC 17025：實驗室質(zhì)量管理體系要求
- 生物安全三級（BSL-3）：病毒分離操作需在相應(yīng)生物安全等級實驗室進行
檢測報告需包含樣本信息、檢測方法、結(jié)果判定依據(jù)及質(zhì)量控制數(shù)據(jù)，陽性樣本需經(jīng)國家參考實驗室復(fù)核確認(rèn)。

總結(jié)

非洲馬瘟的診斷需結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查、臨床表現(xiàn)和實驗室檢測結(jié)果進行綜合判斷。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，核酸檢測因其快速、靈敏的特點成為首選方法，而病毒分離和血清學(xué)檢測在疫情溯源和免疫評估中仍不可替代。嚴(yán)格遵循國際檢測標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范操作流程，是確保診斷結(jié)果準(zhǔn)確性和可比性的關(guān)鍵。