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豬肺炎支原體抗體ELISA檢測(cè)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-05-14 03:44:20 更新時(shí)間：2025-05-13 03:44:22

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

豬肺炎支原體抗體ELISA檢測(cè)概述

豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp）是引起豬支原體肺炎（又稱(chēng)豬喘氣?。┑闹饕≡w，該病以慢性呼吸道癥狀、生長(zhǎng)遲緩和飼料轉(zhuǎn)化率降低為特征，對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。抗體檢測(cè)是評(píng)估豬群感染狀態(tài)、疫苗免疫效果及制定防控策略的重要手段。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）技術(shù)因其高靈敏性、特異性和可批量操作的特點(diǎn)，成為檢測(cè)豬肺炎支原體抗體的主流方法。通過(guò)檢測(cè)血清中特異性IgG或IgM抗體水平，可動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)豬群感染或免疫后的抗體變化，為疾病防控提供科學(xué)依據(jù)。

檢測(cè)項(xiàng)目

豬肺炎支原體抗體ELISA檢測(cè)的核心目標(biāo)是定量或定性分析血清樣本中的Mhp特異性抗體。檢測(cè)項(xiàng)目主要包括： 1. IgG抗體檢測(cè)：用于評(píng)估豬群既往感染或疫苗接種后的長(zhǎng)期免疫應(yīng)答； 2. IgM抗體檢測(cè)：用于早期感染診斷，反映近期病原體暴露情況； 3. 抗體效價(jià)分析：通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算抗體濃度，評(píng)價(jià)免疫保護(hù)力或感染強(qiáng)度。

檢測(cè)儀器

ELISA檢測(cè)需依賴(lài)專(zhuān)業(yè)儀器完成，主要包括： 1. 酶標(biāo)儀（Microplate Reader）：用于讀取反應(yīng)孔的光密度值（OD值），支持雙波長(zhǎng)（如450nm/630nm）檢測(cè)； 2. 洗板機(jī)（Plate Washer）：確保反應(yīng)孔洗滌步驟的標(biāo)準(zhǔn)化，減少人為誤差； 3. 恒溫孵育箱：控制反應(yīng)溫度（通常37℃），保證抗原-抗體結(jié)合穩(wěn)定性； 4. 移液器及多通道移液器：用于精確加樣，提高實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。

檢測(cè)方法

豬肺炎支原體抗體ELISA檢測(cè)通常采用間接法，具體流程如下： 1. 包被抗原：將純化的Mhp抗原固定于96孔板； 2. 封閉：加入封閉液（如BSA）減少非特異性結(jié)合； 3. 加樣孵育：加入稀釋后的血清樣本，陽(yáng)性/陰性對(duì)照，37℃孵育； 4. 洗滌：洗去未結(jié)合物質(zhì)； 5. 加酶標(biāo)二抗：加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的抗豬IgG/IgM二抗； 6. 顯色：加入底物（如TMB），酶催化反應(yīng)生成有色產(chǎn)物； 7. 終止與讀數(shù)：加入終止液，用酶標(biāo)儀測(cè)量OD值； 8. 結(jié)果判讀：根據(jù)OD值與閾值（Cut-off值）比較，判定抗體陽(yáng)性或陰性。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

豬肺炎支原體抗體ELISA檢測(cè)需遵循以下標(biāo)準(zhǔn)： 1. 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：參考世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）《陸生動(dòng)物診斷試驗(yàn)手冊(cè)》中的ELISA技術(shù)規(guī)范； 2. 試劑盒標(biāo)準(zhǔn)：選用經(jīng)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部或國(guó)際認(rèn)證（如IDEXX、LSI等品牌）的試劑盒，確保靈敏度（≥95%）和特異性（≥98%）； 3. 判定標(biāo)準(zhǔn)： - S/P值（樣本OD值/陽(yáng)性對(duì)照OD值）：若S/P≥0.4為陽(yáng)性，＜0.3為陰性，介于兩者之間需復(fù)檢； - 抗體效價(jià)：通常以≥1:40為陽(yáng)性閾值； 4. 質(zhì)控要求：每批次檢測(cè)需包含陰陽(yáng)性對(duì)照，且CV值（變異系數(shù)）≤15%。

結(jié)論

豬肺炎支原體抗體ELISA檢測(cè)是豬場(chǎng)健康管理的關(guān)鍵工具，其標(biāo)準(zhǔn)化操作和精準(zhǔn)結(jié)果可指導(dǎo)疫苗免疫程序優(yōu)化、感染豬群隔離及凈化措施制定。通過(guò)規(guī)范使用檢測(cè)儀器、嚴(yán)格遵循操作流程及判定標(biāo)準(zhǔn)，能有效提升豬群呼吸道疾病的防控水平，保障養(yǎng)殖效益。