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標(biāo)準(zhǔn)透析液的微生物要求檢測

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發(fā)布時間：2025-08-04 17:52:57 更新時間：2025-08-03 17:52:57

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

標(biāo)準(zhǔn)透析液的微生物要求檢測：確?；颊咄肝霭踩年P(guān)鍵

透析液是血液透析治療中至關(guān)重要的組成部分，直接與患者的血液進(jìn)行物質(zhì)交換。因此，其微生物學(xué)質(zhì)量直接關(guān)系到患者的生命安全。透析液一旦被微生物污染，可能導(dǎo)致患者發(fā)生嚴(yán)重的感染、膿毒癥，甚至死亡。對透析液進(jìn)行嚴(yán)格、規(guī)范的微生物學(xué)檢測是保障透析治療安全、有效的基本前提。國家及國際相關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)均對透析液的微生物學(xué)指標(biāo)（主要是需氧菌總數(shù)和內(nèi)毒素含量）設(shè)定了嚴(yán)格的限值要求。建立科學(xué)、可靠的檢測流程，涵蓋規(guī)范的檢測項目、使用精確的檢測儀器、遵循標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法以及嚴(yán)格執(zhí)行相應(yīng)的檢測標(biāo)準(zhǔn)，是透析液質(zhì)量控制的核心環(huán)節(jié)，也是醫(yī)療機(jī)構(gòu)的法定責(zé)任。

核心檢測項目

透析液的微生物學(xué)質(zhì)量監(jiān)控主要聚焦于以下兩個核心項目：

1. 需氧菌總數(shù) (Total Viable Aerobic Count, TVAC)： 此項檢測旨在測定每毫升透析液樣品中存活的好氧細(xì)菌和真菌的總數(shù)量。該指標(biāo)是反映透析液總體微生物污染程度的最基本參數(shù)。根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（如YY 0598-2015， ISO 11663:2014），透析液中的需氧菌總數(shù)應(yīng)控制在非常低的水平。

2. 細(xì)菌內(nèi)毒素含量 (Endotoxin)： 細(xì)菌內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的脂多糖成分，具有極強(qiáng)的致熱原性和生物活性。即使透析液中活菌數(shù)量很低，但如果含有超標(biāo)的內(nèi)毒素，患者在接受透析時仍可能發(fā)生發(fā)熱、寒戰(zhàn)、低血壓甚至休克等嚴(yán)重的“熱原反應(yīng)”。內(nèi)毒素檢測對于透析安全至關(guān)重要。

關(guān)鍵檢測儀器

準(zhǔn)確進(jìn)行透析液微生物檢測依賴于精密和專用的儀器設(shè)備：

1. 微生物實驗室基礎(chǔ)設(shè)備： * 恒溫培養(yǎng)箱： 用于在特定溫度（通常為30-35°C或17-23°C）下培養(yǎng)微生物樣品，孵育時間通常為48小時（需氧菌總數(shù)）或72小時（真菌）。 * 生物安全柜： 提供無菌操作環(huán)境，保護(hù)操作人員、環(huán)境及樣品免受污染。 * 高壓蒸汽滅菌鍋： 用于培養(yǎng)基、稀釋液、采樣瓶、培養(yǎng)皿、移液器吸頭等實驗耗材的滅菌。 * 膜過濾裝置： 用于需氧菌總數(shù)檢測中的薄膜過濾法，是濃縮樣品中微生物的關(guān)鍵設(shè)備。 * 菌落計數(shù)器： 輔助人工計數(shù)瓊脂平板上的菌落形成單位(CFU)。 * 移液器： 精確量取和轉(zhuǎn)移液體樣品及試劑。 * pH計： 必要時調(diào)整培養(yǎng)基或樣品的pH值。

2. 內(nèi)毒素檢測專用設(shè)備： * 鱟試劑： 這是檢測內(nèi)毒素的核心生物試劑，來源于鱟（一種海洋節(jié)肢動物）的血液變形細(xì)胞溶解物。 * 恒溫水浴鍋/干式恒溫器： 為凝膠法鱟試驗提供精確、恒定的孵育溫度（通常是37°C ± 1°C）。 * 動態(tài)濁度法/顯色法檢測儀： 這些是用于定量檢測內(nèi)毒素的精密儀器。動態(tài)濁度法通過監(jiān)測濁度變化，顯色法通過監(jiān)測顏色變化（吸光度值）來測定內(nèi)毒素濃度。這些儀器通常配備有溫控模塊和讀數(shù)系統(tǒng)，自動化程度高，結(jié)果更客觀準(zhǔn)確。

標(biāo)準(zhǔn)檢測方法

透析液微生物檢測需嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序：

1. 需氧菌總數(shù)檢測方法: * 薄膜過濾法 (Membrane Filtration, MF)： 這是透析液需氧菌總數(shù)檢測的推薦方法。其原理是取一定體積（通常為100ml或更多）的透析液樣品，通過孔徑≤0.45μm的微孔濾膜過濾，將樣品中的微生物截留在濾膜表面。然后將濾膜正面貼于合適的瓊脂培養(yǎng)基（如胰酪大豆胨瓊脂TSA或R2A瓊脂）上，在指定溫度下培養(yǎng)規(guī)定時間后，計數(shù)濾膜上生長的菌落數(shù)，計算結(jié)果單位為CFU/mL。 * 傾注平板法/涂布平板法： 適用于微生物含量較低的樣品或作為補(bǔ)充方法。將一定量的樣品（通常為1mL或0.1mL）直接加入無菌培養(yǎng)皿中，再傾注熔化的瓊脂培養(yǎng)基混合（傾注法），或?qū)悠肪鶆蛲坎荚谝涯痰沫傊桨迳希ㄍ坎挤ǎ囵B(yǎng)后計數(shù)菌落。

2. 細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法: 主要使用鱟試驗 (Limulus Amebocyte Lysate test, LAL test)： * 凝膠法： 將樣品或樣品稀釋液與鱟試劑在無菌無熱原試管中混合，在37°C水浴中孵育規(guī)定時間（通常60±2分鐘）。孵育后將試管緩慢倒轉(zhuǎn)180°，觀察凝膠形成情況。形成堅實凝膠判斷為陽性，表明內(nèi)毒素含量≥該濃度鱟試劑的標(biāo)示靈敏度（λ）。通過系列稀釋樣品，確定其內(nèi)毒素含量是否超過限值（半定量）。方法簡單經(jīng)濟(jì)。 * 動態(tài)濁度法： 連續(xù)監(jiān)測鱟試劑與樣品混合液在反應(yīng)過程中濁度（吸光度或透光率）的變化速率。該速率與內(nèi)毒素濃度呈正相關(guān)。通過與內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)品繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，可精確計算出樣品的內(nèi)毒素含量（定量）。 * 顯色法： 分為終點(diǎn)顯色法和動態(tài)顯色法。終點(diǎn)顯色法在反應(yīng)終止后加入顯色劑，檢測特定波長下的吸光度值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較定量。動態(tài)顯色法則是通過連續(xù)監(jiān)測反應(yīng)混合物中人工合成顯色底物被激活的C因子（途徑酶）水解時釋放出的有色基團(tuán)的吸光度變化速率來計算內(nèi)毒素濃度（定量）。動態(tài)法（濁度法/顯色法）靈敏度和精度高，自動化程度好。

權(quán)威檢測標(biāo)準(zhǔn)

透析液的微生物學(xué)檢測必須嚴(yán)格遵循國家、行業(yè)或國際標(biāo)準(zhǔn)，確保結(jié)果的可靠性、可比性和符合法規(guī)要求：

1. 國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)： * YY 0598-2015 《血液透析及相關(guān)治療用濃縮物》： 這是中國針對血液透析濃縮物（包括最終配制的透析液）的強(qiáng)制性行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。該標(biāo)準(zhǔn)明確規(guī)定了微生物污染限值： * 需氧菌總數(shù)：≤ 100 CFU/mL。 * 細(xì)菌內(nèi)毒素：≤ 0.25 EU/mL。 * 《中華人民共和國藥典》： 在通則中提供了藥品微生物限度檢查法和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的通用操作規(guī)程和要求，是方法學(xué)的重要依據(jù)。

2. 國際標(biāo)準(zhǔn)： * ISO 11663:2014 《血液透析及相關(guān)治療用透析液質(zhì)量》： 該國際標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了用于血液透析、血液透析濾過和血液濾過的透析液的質(zhì)量要求。其微生物限值與YY 0598-2015一致： * 細(xì)菌總數(shù) (TVAC)：≤ 100 CFU/mL。 * 內(nèi)毒素含量：≤ 0.25 EU/mL。 * 歐洲藥典 (Ph. Eur.)： 對“用于制備透析濃縮物的水”和“透析液”有明確的微生物和內(nèi)毒素要求，限值與上述標(biāo)準(zhǔn)相同。

關(guān)鍵執(zhí)行要點(diǎn)： * 樣品的采集、運(yùn)輸和保存必須嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行，防止二次污染或微生物生長/死亡。 * 必須在規(guī)定的時限內(nèi)（通常建議在采樣后2小時內(nèi)）開始微生物檢測（特別是活菌計數(shù)），或采取適當(dāng)措施保存樣品（如冷藏，但建議盡快檢測）。 * 檢測環(huán)境（潔凈室/生物安全柜）需符合要求，防止假陽性或假陰性。 * 使用經(jīng)驗證合格的方法和儀器，并進(jìn)行定期的校準(zhǔn)與維護(hù)。 * 檢測人員需經(jīng)過專業(yè)培訓(xùn)，并嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)。 * 定期進(jìn)行培養(yǎng)基適用性檢查、鱟試劑靈敏度復(fù)核、內(nèi)毒素干擾試驗等質(zhì)量控制措施。

嚴(yán)格執(zhí)行上述檢測項目、使用合規(guī)的儀器設(shè)備、遵循標(biāo)準(zhǔn)的檢測方法并依據(jù)權(quán)威的檢測標(biāo)準(zhǔn)對透析液進(jìn)行微生物學(xué)監(jiān)控，是保障血液透析患者安全、防止透析相關(guān)感染的基石。醫(yī)療機(jī)構(gòu)和質(zhì)量控制實驗室必須對此給予高度重視。