金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一種廣泛分布于自然界及人體皮膚、鼻腔等處的常見革蘭氏陽(yáng)性球菌。它是導(dǎo)致食源性疾病的重要病原菌之一，主要通過產(chǎn)生多種腸毒素（Staphylococcal Enterotoxins, SEs）引發(fā)食物中毒。金黃色葡萄球菌腸毒素具有極強(qiáng)的熱穩(wěn)定性（100℃煮沸30分鐘仍不能完全破壞）和耐酶特性，即使在細(xì)菌被殺滅后，毒素依然存在于食品中，對(duì)人體健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此，建立快速、準(zhǔn)確、靈敏的金黃色葡萄球菌及其腸毒素檢測(cè)體系，對(duì)于食品安全監(jiān)控、臨床診斷、疫情溯源以及保障公共衛(wèi)生安全具有極其重要的意義。
一、 主要檢測(cè)項(xiàng)目
金黃色葡萄球菌及其腸毒素的檢測(cè)項(xiàng)目主要圍繞以下核心目標(biāo)展開：
1. 金黃色葡萄球菌活菌計(jì)數(shù)： 檢測(cè)食品或樣品中存活的、具有繁殖能力的金黃色葡萄球菌數(shù)量（通常以CFU/g或CFU/mL表示），評(píng)估污染程度和食品安全風(fēng)險(xiǎn)。
2. 金黃色葡萄球菌定性檢測(cè)： 確認(rèn)樣品中是否存在金黃色葡萄球菌（是/否），用于快速篩查和初步判斷。
3. 腸毒素定性檢測(cè)： 確定樣品中是否存在金黃色葡萄球菌腸毒素（SEs），特別是常見的SEA、SEB、SEC等型別，這是判斷食物中毒風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)鍵指標(biāo)。
4. 腸毒素分型檢測(cè)： 確定檢出的腸毒素具體屬于哪一種或哪幾種血清型（如SEA, SEB, SEC1, SEC2, SED, SEE等），有助于追溯污染源和流行病學(xué)調(diào)查。
5. 腸毒素定量檢測(cè)： 精確測(cè)定樣品中腸毒素的含量（通常以ng/g或ng/mL表示），用于評(píng)估毒素水平和致病風(fēng)險(xiǎn)。
二、 常用檢測(cè)儀器
金黃色葡萄球菌及其腸毒素的檢測(cè)涉及多種儀器設(shè)備：
1. 微生物培養(yǎng)相關(guān)儀器：
- 恒溫培養(yǎng)箱： 提供細(xì)菌生長(zhǎng)所需的恒定溫度環(huán)境（通常35-37℃）。
- 生物安全柜： 提供無菌操作環(huán)境，保護(hù)操作人員和樣品。
- 高壓蒸汽滅菌器： 對(duì)培養(yǎng)基、實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行滅菌處理。
- 菌落計(jì)數(shù)器/自動(dòng)菌落計(jì)數(shù)儀： 用于統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)量。
- 顯微鏡： 進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢等形態(tài)學(xué)觀察。
2. 生化鑒定與免疫學(xué)檢測(cè)儀器：
- 酶標(biāo)儀： 用于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的吸光度（OD值）讀取。
- 免疫層析讀數(shù)儀： 對(duì)免疫層析試紙條（如膠體金試紙條）進(jìn)行半定量或定量判讀。
- 自動(dòng)化微生物鑒定系統(tǒng)： (如VITEK, BD Phoenix等) 基于生化反應(yīng)或顯色原理快速鑒定金黃色葡萄球菌。
3. 分子生物學(xué)檢測(cè)儀器：
- 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀： 用于核酸擴(kuò)增（PCR），檢測(cè)金黃色葡萄球菌特異性基因（如nuc, coa, 16S rRNA）及腸毒素基因（如sea, seb, sec等）。
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀： 在PCR過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。
- 電泳儀及凝膠成像系統(tǒng)： 用于PCR產(chǎn)物的分離、分析和記錄。
4. 毒素精密分析儀器：
- 高效液相色譜儀： 可用于腸毒素的分離純化。
- 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀： 高靈敏度、高特異性地對(duì)腸毒素進(jìn)行定性和定量分析（金標(biāo)準(zhǔn)方法之一）。
三、 核心檢測(cè)方法
檢測(cè)方法的選擇取決于檢測(cè)目標(biāo)（菌體or毒素）、靈敏度、特異性要求以及時(shí)效性。
1. 金黃色葡萄球菌檢測(cè)方法：
- 傳統(tǒng)培養(yǎng)法（金標(biāo)準(zhǔn)）： 依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（如GB 4789.10-2016）進(jìn)行樣品前處理、選擇性增菌（如7.5%氯化鈉肉湯或Baird-Parker肉湯）、選擇性平板分離（如Baird-Parker瓊脂平板）、典型菌落確認(rèn)（血漿凝固酶試驗(yàn)、耐熱核酸酶試驗(yàn)、生化鑒定等）。步驟嚴(yán)謹(jǐn)?shù)臅r(shí)較長(zhǎng)（通常需3-5天）。
- 顯色培養(yǎng)基法： 利用金黃色葡萄球菌特有的酶解底物顯色特性，在選擇性瓊脂平板上直接區(qū)分和計(jì)數(shù)，縮短時(shí)間（24-48小時(shí)），如CHROMagar? Staph aureus等。
- 免疫學(xué)方法（快速檢測(cè)）： 如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、膠體金免疫層析試紙條等，檢測(cè)菌體表面抗原或特異性蛋白，操作簡(jiǎn)便快速（幾小時(shí)），適合大批量篩查，但可能存在交叉反應(yīng)。
- 分子生物學(xué)方法：
- 普通PCR： 擴(kuò)增檢測(cè)金黃色葡萄球菌特異性基因（如nuc基因，編碼耐熱核酸酶），定性判斷存在與否。
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR： 可定量檢測(cè)目標(biāo)基因，速度更快（數(shù)小時(shí)），靈敏度高，特異性強(qiáng)，并能同時(shí)檢測(cè)多種基因（如毒素基因）。
- 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增： 在恒溫條件下快速、高靈敏度擴(kuò)增核酸，設(shè)備要求相對(duì)較低。
2. 腸毒素檢測(cè)方法：
- 免疫學(xué)方法（主流）：
- 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)： 最常用的腸毒素檢測(cè)方法之一。將特異性抗體包被于微孔板，捕獲樣品中的腸毒素，通過酶標(biāo)記的二抗產(chǎn)生顏色反應(yīng)進(jìn)行定性或定量（靈敏度可達(dá)ng級(jí)）。有商品化試劑盒可用。
- 免疫層析法： 如膠體金試紙條，操作極為簡(jiǎn)便快捷（幾分鐘到半小時(shí)），肉眼判讀，適用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩查，但靈敏度通常低于ELISA。
- 乳膠凝集試驗(yàn)： 將抗體包被在乳膠顆粒上，與毒素結(jié)合產(chǎn)生肉眼可見的凝集反應(yīng)，操作簡(jiǎn)單快速。
- 分子生物學(xué)方法： 通過PCR或RT-PCR檢測(cè)金黃色葡萄球菌中的腸毒素基因（如sea, seb, sec等）。此方法檢測(cè)的是產(chǎn)毒素的潛力，而非直接檢測(cè)毒素本身。當(dāng)毒素基因表達(dá)且產(chǎn)生足夠量的毒素時(shí)，才具有實(shí)際的毒力風(fēng)險(xiǎn)。因此，分子方法主要用于預(yù)測(cè)產(chǎn)毒能力或輔助診斷。
- 生物質(zhì)譜法： 主要是液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法。具有最高的特異性、靈敏度和準(zhǔn)確性，能同時(shí)檢測(cè)多種腸毒素并進(jìn)行精確定量，是確證方法（金標(biāo)準(zhǔn)之一）。但儀器昂貴，操作復(fù)雜，需專業(yè)人員。
四、 主要檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)
為確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可比性，必須依據(jù)國(guó)家或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作：
1. 金黃色葡萄球菌檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)：
- 中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) (GB)：
- GB 4789.10-2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)》 - 詳細(xì)規(guī)定了食品中金黃色葡萄球菌的定性檢驗(yàn)和MPN計(jì)數(shù)法（傳統(tǒng)培養(yǎng)法）。
- GB 4789.36-2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗(yàn)》 附錄B - 規(guī)定了顯色培養(yǎng)基法。
- GB 4789.40-2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）檢驗(yàn)》 中有時(shí)會(huì)參考相關(guān)快速方法學(xué)通則。
- 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn) (ISO):
- ISO 6888 系列： 包括平板計(jì)數(shù)
CMA認(rèn)證
檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書
證書編號(hào)：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認(rèn)可
實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書
證書編號(hào)：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認(rèn)證
質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書
證書編號(hào)：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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