產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌檢測：保障食品安全的關(guān)鍵防線
產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌是一類能夠產(chǎn)生強效細胞毒素——志賀毒素的大腸桿菌，主要包括大腸桿菌O157:H7和其他非O157血清型（如O26、O45、O103、O111、O121、O145等）。它們是人類食源性疾病的重要病原體，常通過受污染的食品（如未煮熟的碎牛肉、生鮮牛奶、被污染的蔬菜水果、水源）傳播，可引起從輕微腹瀉到嚴重的溶血性尿毒綜合征等嚴重后果。因此，建立快速、準確、可靠的產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌檢測體系，在食品安全監(jiān)測、疫情溯源、臨床診斷和公共衛(wèi)生應急響應中至關(guān)重要。
核心檢測項目
產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌的檢測核心在于確認目標菌株及其毒力特性：
1. 目標病原體篩查與分離： 首要目標是從待檢樣本（食品、環(huán)境樣本、糞便等）中分離出疑似大腸桿菌菌落。
2. 志賀毒素基因檢測： 這是確認產(chǎn)毒能力的金標準。主要檢測編碼志賀毒素Stx1和Stx2的特異性基因片段（stx1和stx2）。這是判斷是否為STEC的核心依據(jù)。
3. 重要毒力因子檢測： 檢測與嚴重疾病相關(guān)的毒力因子，如緊密粘附素基因（eae，與附著抹平病變相關(guān)），溶血素基因（hlyA），以及質(zhì)粒編碼的毒力因子（如ehxA）。
4. O抗原血清群分型： 利用特異性抗血清或分子方法對分離株進行O抗原分型（如O157、O26、O103、O111、O121、O145等），以確定其是否屬于重點關(guān)注的高致病性血清群。
5. H抗原血清分型： 如O157:H7中的H7，提供更精細的分型信息，有助于溯源。
關(guān)鍵檢測儀器
完成上述檢測項目需要一系列專業(yè)儀器設備：
1. 微生物培養(yǎng)設備： 恒溫培養(yǎng)箱、生物安全柜（用于無菌操作）、均質(zhì)器（處理食品樣本）、厭氧培養(yǎng)系統(tǒng)（部分選擇性培養(yǎng)需要）。
2. 分子生物學檢測平臺：
* 聚合酶鏈式反應儀： 用于擴增stx1, stx2, eae等特異性基因片段。是基因檢測的核心設備。
* 實時熒光定量PCR儀： 在PCR擴增過程中實時監(jiān)測熒光信號，實現(xiàn)快速、高靈敏度、高特異性的基因檢測和定量（若需要），是目前主流的快速檢測方法。
* 核酸提取儀： 自動化提取樣本中的DNA/RNA，提高效率和一致性。
* 電泳系統(tǒng)： （傳統(tǒng)PCR后）用于分離和觀察擴增產(chǎn)物，包括凝膠成像系統(tǒng)。
* 微陣列或測序平臺： 用于更全面的毒力基因譜分析或菌株溯源（如全基因組測序WGS）。
3. 免疫學檢測設備：
* 酶標儀： 用于讀取酶聯(lián)免疫吸附試驗的結(jié)果，檢測志賀毒素蛋白或特定血清型抗原。
* 免疫磁珠分離系統(tǒng)： 利用包被特異性抗體（如抗O157）的磁珠從復雜樣本中富集目標菌，提高分離效率（常用于O157:H7）。
4. 生化鑒定系統(tǒng)： 自動化或半自動化微生物鑒定儀（如VITEK, API 20E），輔助鑒定大腸桿菌并進行初步生化分型。
5. 血清學分型設備： 玻片、試管、離心機等，用于傳統(tǒng)的凝集試驗。
6. 細胞培養(yǎng)設備（選擇性）： 用于Vero細胞毒性試驗（檢測志賀毒素生物活性），需要CO2培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡等，通常在專業(yè)實驗室進行。
主要檢測方法
檢測方法通常遵循“初篩-確證-分型”或“培養(yǎng)-非培養(yǎng)”相結(jié)合的策略：
1. 培養(yǎng)分離法（金標準）：
* 富集培養(yǎng)： 樣本在選擇性增菌肉湯（如改良EC肉湯加新生霉素，mEC+n）中孵育，促進目標菌生長。
* 分離培養(yǎng)： 將富集液接種到選擇性/鑒別性平板（如O157專有的山梨醇麥康凱瓊脂SMAC、CHROMagar? STEC顯色培養(yǎng)基；非O157常用彩虹?O157 H7平板或含特定抗生素的培養(yǎng)基）。挑取可疑菌落（如O157在SMAC上呈不發(fā)酵山梨醇的灰白色菌落）。
* 生化和血清學鑒定： 對可疑菌落進行生化試驗（吲哚、MR-VP等）確認大腸桿菌，再用特異性抗血清進行O和H抗原凝集試驗鑒定血清型。
2. 免疫學方法：
* 酶聯(lián)免疫吸附試驗： 直接檢測樣本（富集后）或分離株中的志賀毒素（Stx）或特定O抗原（如O157抗原）。有商品化試劑盒。
* 免疫層析試紙條： 快速檢測Stx或特定血清型抗原，操作簡便，適合現(xiàn)場或初篩。
* 免疫磁珠分離： 通常作為富集和分離特定血清型（尤其是O157:H7）的前處理步驟，與后續(xù)培養(yǎng)或檢測聯(lián)用。
3. 分子生物學方法（核心快速確證方法）：
* 聚合酶鏈式反應： 針對stx1, stx2, eae等特異性基因設計引物，對增菌液或分離株進行DNA擴增，通過凝膠電泳或?qū)崟r熒光（更快速、避免污染）判斷結(jié)果?？芍苯釉谠鼍褐羞M行，大大縮短檢測周期。
* 多重PCR： 在同一反應中同時擴增多個靶基因（如stx1, stx2, eae, O-群特異性基因），提高效率。
* 實時熒光定量PCR： 目前最主流的快速檢測方法，靈敏度高、特異性強、速度快，可定量（可選），并實現(xiàn)閉管檢測減少污染風險。
* 基因芯片/微陣列： 可一次性檢測大量毒力基因和血清型標記，信息量大，但成本較高。
4. 細胞毒性試驗（確證毒素活性）： 將樣本濾液或培養(yǎng)上清液加入Vero或Hela細胞，觀察細胞病變效應來確認志賀毒素的生物活性，是毒素檢測的“黃金標準”，但操作繁瑣耗時，通常用于研究或疑難樣本的確證。
重要檢測標準
為確保檢測結(jié)果的準確性、可靠性和可比性，必須遵循國際和國內(nèi)公認的標準方法：
1. 國際標準：
* ISO/TS 13136:2012《食物鏈微生物學-實時熒光PCR檢測產(chǎn)志賀毒素大腸桿菌（STEC）和O157、O111、O26、O103及O145血清群測定指南》： 這是國際公認的核心標準，詳細規(guī)定了使用實時熒光PCR檢測食品中STEC特異性基因（stx和eae）以及重點血清型的方法。
* ISO 16654:2001《食品和動物飼料的微生物學-大腸桿菌O157的水平檢測方法》： 專門針對O157:H7的檢測方法（培養(yǎng)法為基礎）。
2. 國際組織指南：
* 國際食品法典委員會： 發(fā)布的指南文件對STEC的風險管理和控制具有重要參考價值。
3. 國家標準（示例，需依據(jù)具體國家）：
* 中國： GB 4789.36-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸埃希氏菌O157:H7/NM檢驗》（主要針對O157）; GB 4789.6-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 致瀉大腸埃希氏菌檢驗》（包含部分STEC的檢測，側(cè)重臨床腹瀉樣本）; SN/T 0973-2013《進出口肉及肉制品檢驗規(guī)程》（包含STEC相關(guān)要求）。針對非O157 STEC的國家標準正在發(fā)展和完善中。
* 美國： FDA《細菌學分析手冊》中包含STEC檢測章節(jié)；
CMA認證
檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認證
質(zhì)量管理體系認證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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