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肽含量（以干基計）檢測

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發(fā)布時間：2025-07-19 11:32:34 更新時間：2025-07-18 11:32:34

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

肽含量（以干基計）檢測：關(guān)鍵要素與流程解析

肽作為由氨基酸通過肽鍵連接而成的生物活性物質(zhì)，在食品、保健品、醫(yī)藥及化妝品等領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。準確測定產(chǎn)品中的肽含量，尤其是“以干基計”的含量，是評估其質(zhì)量、純度、功效及進行標準化生產(chǎn)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。“以干基計”意味著檢測結(jié)果排除了樣品中水分及其他揮發(fā)性物質(zhì)的干擾，直接反映了干燥物質(zhì)中肽的實際含量。這對于比較不同批次、不同來源或不同形態(tài)（如粉末、液體）的樣品尤為重要，確保了結(jié)果的可比性和準確性。精確的肽含量檢測不僅是產(chǎn)品質(zhì)量控制的核心指標，也是滿足法規(guī)要求、進行科學(xué)研究和新產(chǎn)品開發(fā)的重要基礎(chǔ)。

檢測項目：核心目標

本檢測的核心項目為：樣品中肽（Peptide）的含量測定，結(jié)果以質(zhì)量百分比（%）表示，基準為干燥后的樣品（即干基）。這里的“肽”通常指分子量小于一定范圍（例如小于10, 000 Da，具體依據(jù)標準定義）的寡肽或多肽混合物。明確檢測項目是確保整個流程目標明確、方法選擇恰當?shù)那疤帷?/p>

檢測儀器：精密設(shè)備的支撐

精確測定肽含量依賴于一系列精密的實驗室儀器：

分析天平： 精確稱量樣品（精確至0.0001 g）。
恒溫干燥箱： 用于樣品的干燥處理，去除水分及其他揮發(fā)性物質(zhì)，得到干基樣品。通?？刂茰囟仍?05°C ± 2°C。
干燥器： 用于冷卻干燥后的樣品，防止其再次吸收空氣中的水分。
凱氏定氮裝置或自動定氮儀： 用于測定總氮含量（這是經(jīng)典凱氏定氮法測蛋白質(zhì)/肽含量的核心步驟）。
高效液相色譜儀： 配備紫外檢測器或蒸發(fā)光散射檢測器等。當需要測定特定肽段或采用色譜法進行分離定量時使用。
分光光度計： 用于比色法（如雙縮脲法、Lowry法、BCA法）測定肽含量時的吸光度檢測。
pH計： 調(diào)節(jié)溶液酸堿度（如比色法或HPLC前處理時可能需控制pH）。
離心機： 用于樣品溶液的澄清處理。
旋渦混合器/超聲儀： 用于樣品的溶解、萃取和混勻。

檢測方法：科學(xué)與流程的結(jié)合

肽含量（以干基計）的測定通常遵循以下主要步驟：

樣品干燥（干基制備）：
- 精確稱取適量（W1, g）均勻樣品于已恒重的稱量皿中。
- 將稱量皿放入恒溫干燥箱（通常105°C±2°C）干燥至恒重（連續(xù)兩次干燥后稱量差異小于規(guī)定值，如2 mg）。
- 取出，置于干燥器中冷卻至室溫。
- 精確稱量干燥后樣品與稱量皿的總重（W2, g）。計算干物質(zhì)質(zhì)量 = W2 - 稱量皿重，干基含量 = (干燥后樣品質(zhì)量 / W1) * 100%。
肽含量測定： 基于干基樣品進行。常用方法包括：
- 凱氏定氮法（間接法）： 這是最經(jīng)典和應(yīng)用最廣的方法之一，尤其適用于成分復(fù)雜的樣品。
  1. 消化：精確稱取一定量干燥樣品，用濃硫酸和催化劑在高溫下消化，將有機氮轉(zhuǎn)化為硫酸銨。
  2. 蒸餾：消化液堿化后，將氨蒸餾出來。
  3. 吸收與滴定：蒸餾出的氨用硼酸溶液吸收，再用標準酸溶液滴定。計算出總氮含量。
  4. 換算：根據(jù)樣品中肽的來源和特性，選擇適當?shù)膿Q算系數(shù)（F，通常為6.25，但對于特定肽混合物可能需調(diào)整）計算粗肽含量：肽含量(%) = (V * c * F * 14.01 / m) * 100%。其中V為滴定消耗標準酸體積(ml)，c為標準酸濃度(mol/L)，m為測定所用干基樣品質(zhì)量(g)。此結(jié)果即為肽含量（以干基計）。
- 比色法（直接法）： 利用肽與特定試劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色，其強度與肽濃度成正比進行定量（如雙縮脲法、Lowry法、BCA法）。
  1. 標準曲線制備：用已知濃度的標準肽（如牛血清白蛋白水解物）配制系列濃度溶液，與試劑反應(yīng)后測吸光度，繪制標準曲線。
  2. 樣品處理與測定：精確稱取干燥樣品，溶解/提取后，取一定體積與相同試劑反應(yīng)，測其吸光度。
  3. 結(jié)果計算：根據(jù)樣品吸光度值，從標準曲線上查得對應(yīng)的肽濃度，再結(jié)合樣品稀釋倍數(shù)和稱樣量，計算樣品中的肽含量（以干基計）。
- 高效液相色譜法： 適用于測定特定肽段含量或需要高分離度的場合。選擇合適的色譜柱和檢測器（如UV, ELSD），建立標準曲線。將干燥樣品處理后進樣分析，根據(jù)保留時間和峰面積（或峰高）定量目標肽或總肽（通過積分特定分子量范圍的峰）。結(jié)果同樣需換算為干基含量。
無論采用哪種方法測定肽含量，最終結(jié)果都需要基于步驟1獲得的干基進行轉(zhuǎn)換：干基肽含量(%) = (濕基測得的肽含量 / 干基含量) * 100%。

檢測標準：質(zhì)量與合規(guī)的基石

進行肽含量檢測必須遵循相關(guān)的國家、行業(yè)或國際標準，以確保結(jié)果的科學(xué)性、準確性和可比性。常見的標準包括：

國家標準（GB）：
- GB 5009.5 《食品安全國家標準食品中蛋白質(zhì)的測定》：規(guī)定了凱氏定氮法（第一法）作為食品中蛋白質(zhì)（含肽）測定的基準方法。
- GB/T 28715 《飼料添加劑酸性、中性蛋白酶活力的測定分光光度法》：雖測酶活，但其中涉及的肽底物或產(chǎn)物測定方法可參考。
- 其他相關(guān)產(chǎn)品標準中可能包含特定的肽含量測定方法要求。
藥典標準： 《中華人民共和國藥典》（ChP）中各相關(guān)肽類原料藥或制劑的質(zhì)量標準中會明確規(guī)定其肽含量（或氮含量）的測定方法和限度要求。
行業(yè)標準： QB/T, NY/T 等行業(yè)標準也可能對特定產(chǎn)品（如大豆肽粉、玉米肽粉、膠原蛋白肽）的肽含量測定方法做出規(guī)定。
國際標準：
- ISO 1871:2009 《動物飼料—凱氏法測定氮含量和粗蛋白含量的計算》：規(guī)范了凱氏定氮的基本操作。
- AOAC Official Methods：如AOAC 981.10（凱氏定氮法）等在國際上被廣泛認可。
- USP/NF, EP, JP 等藥典中對特定肽類物質(zhì)的規(guī)定。
企業(yè)內(nèi)部標準： 企業(yè)通常會在國標/行標基礎(chǔ)上，制定更嚴格、更詳細的操作規(guī)程（SOP）來指導(dǎo)實際檢測工作。