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豬源性檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-19 11:19:05 更新時(shí)間：2025-07-18 11:19:05

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

豬源性檢測概述

豬源性檢測是指通過特定的技術(shù)手段，對食品、飼料、藥品、化妝品、皮革制品或其他生物材料中是否含有豬源性成分進(jìn)行定性或定量分析的過程。這項(xiàng)檢測具有極其重要的現(xiàn)實(shí)意義：首先，在全球范圍內(nèi)，伊斯蘭教、猶太教等宗教嚴(yán)格禁止食用豬肉及其制品，確保產(chǎn)品無豬源性成分是尊重宗教信仰和滿足特定消費(fèi)群體的基本要求；其次，部分人群對豬肉存在嚴(yán)重過敏反應(yīng)，明確標(biāo)識豬源性成分是保障消費(fèi)者健康與知情權(quán)的關(guān)鍵措施；再者，在食品安全監(jiān)管、物種保護(hù)（如防止瀕危豬種非法貿(mào)易）、法醫(yī)鑒定以及反欺詐（如以低價(jià)肉冒充高價(jià)肉）等領(lǐng)域，精確的豬源性溯源技術(shù)發(fā)揮著不可替代的作用。因此，建立靈敏、準(zhǔn)確、高效的豬源性檢測體系是保障市場秩序、維護(hù)消費(fèi)者權(quán)益和促進(jìn)國際貿(mào)易順暢進(jìn)行的重要技術(shù)支撐。

隨著全球化貿(mào)易的發(fā)展和食品供應(yīng)鏈的日益復(fù)雜，原料來源交叉污染的風(fēng)險(xiǎn)增加，對豬源性成分進(jìn)行嚴(yán)格監(jiān)控的需求也日益迫切。現(xiàn)代檢測技術(shù)已能實(shí)現(xiàn)從痕量水平（如DNA片段）到宏觀成分（如蛋白質(zhì)）的精準(zhǔn)識別。

主要檢測項(xiàng)目

豬源性檢測的核心目標(biāo)是特異性識別豬（Sus scrofa domestica）的生物學(xué)標(biāo)記物。主要檢測項(xiàng)目包括：

1. 物種特異性DNA序列檢測： 這是目前最主流和應(yīng)用最廣泛的方法。通過檢測豬特有的基因片段（如線粒體DNA中的細(xì)胞色素b基因、D-loop區(qū)，或核基因中的生長激素基因、特定微衛(wèi)星標(biāo)記等）來確認(rèn)豬源性成分的存在。

2. 物種特異性蛋白質(zhì)檢測： 主要針對豬肌肉或其他組織中的特征性蛋白質(zhì)（如肌紅蛋白的特定變體、膠原蛋白類型等）進(jìn)行免疫學(xué)分析。適用于熱加工后DNA可能嚴(yán)重降解的樣品。

3. 豬源性成分定量分析： 在部分需要了解污染程度或摻假比例的場合（如混合肉制品），需要進(jìn)行定量檢測，確定豬源性成分在樣品中的含量百分比。

常用檢測儀器

豬源性檢測依賴于一系列精密的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備：

1. 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀： 用于擴(kuò)增目標(biāo)DNA片段，是DNA檢測法最核心的設(shè)備。包括常規(guī)PCR儀和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀能實(shí)現(xiàn)DNA的定性和定量分析，靈敏度高，應(yīng)用最為廣泛。

2. 核酸提取系統(tǒng)/工作站： 用于從復(fù)雜樣品基質(zhì)（肉、飼料、加工食品等）中高效、穩(wěn)定地提取和純化DNA。

3. 電泳系統(tǒng)： 用于常規(guī)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的分離和初步可視化（凝膠成像系統(tǒng)）。

4. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測系統(tǒng)： 集成了溫控模塊、光學(xué)檢測模塊和數(shù)據(jù)分析軟件，用于實(shí)時(shí)監(jiān)測PCR擴(kuò)增過程中的熒光信號，實(shí)現(xiàn)高靈敏度、高特異性的定性和定量檢測。

5. 酶聯(lián)免疫吸附測定儀： 用于基于蛋白質(zhì)的免疫學(xué)檢測（如ELISA法），包括酶標(biāo)儀、洗板機(jī)等。

6. 測序儀： 當(dāng)需要更高特異性的確認(rèn)或開發(fā)新方法時(shí)，用于對擴(kuò)增的DNA片段進(jìn)行測序分析。

7. 質(zhì)譜儀： 用于基于蛋白質(zhì)或多肽指紋圖譜的檢測方法（如MALDI-TOF MS）。

核心檢測方法

根據(jù)檢測靶標(biāo)（DNA或蛋白質(zhì)）的不同，主要方法如下：

1. 基于DNA的檢測方法：

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)： 最常用和最成熟的方法。
- 常規(guī)PCR：擴(kuò)增豬特異性DNA片段，通過瓊脂糖凝膠電泳觀察條帶判斷結(jié)果。操作相對簡單，成本較低。
- 實(shí)時(shí)熒光定量PCR： 在PCR反應(yīng)體系中加入特異性熒光探針（如TaqMan探針）或熒光染料，實(shí)時(shí)監(jiān)測擴(kuò)增過程。具有更高的特異性、靈敏度，能實(shí)現(xiàn)絕對或相對定量，且閉管操作減少污染風(fēng)險(xiǎn)，是目前的主流和推薦方法。
- 多重PCR：同時(shí)檢測多個(gè)物種（如豬、牛、羊、雞等），提高檢測效率。
DNA測序： 對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序，與數(shù)據(jù)庫比對，提供最確鑿的物種鑒定證據(jù)。
環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增： 在恒定溫度下進(jìn)行核酸擴(kuò)增，對設(shè)備要求較低，適合現(xiàn)場快速篩查。

2. 基于蛋白質(zhì)的檢測方法：

酶聯(lián)免疫吸附測定： 利用抗豬特異性蛋白質(zhì)（如肌紅蛋白、膠原蛋白）的抗體進(jìn)行檢測。操作相對簡便，對深加工、DNA可能降解的樣品有一定優(yōu)勢，但靈敏度和特異性通常低于DNA方法，且可能受物種間蛋白質(zhì)同源性干擾。
免疫層析試紙條： 快速檢測方法，常用于現(xiàn)場初篩，但靈敏度和準(zhǔn)確性有限。
質(zhì)譜技術(shù)： 通過分析特征性肽段指紋圖譜來識別物種。精度高，但成本高昂，操作復(fù)雜，應(yīng)用不如PCR普及。

主要檢測標(biāo)準(zhǔn)

為確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可比性，國內(nèi)外均制定了相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)方法：

1. 中國國家標(biāo)準(zhǔn)/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：
SN/T 2051-2008 《食品、化妝品和飼料中牛羊豬源性成分檢測方法實(shí)時(shí)PCR法》
SN/T 3731.4-2013 《食品及飼料中常見畜禽類成分的檢測方法第4部分：貂成分檢測實(shí)時(shí)熒光PCR法》(該系列標(biāo)準(zhǔn)包含豬、牛、羊、雞、貂等)
GB/T 20190-2006 《飼料中牛羊源性成分的定性檢測定性聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法》 (雖主要針對牛羊，方法學(xué)原理類似，部分實(shí)驗(yàn)室會(huì)參考或建立針對豬的PCR方法)
農(nóng)業(yè)農(nóng)村部及國家市場監(jiān)督管理總局等也會(huì)發(fā)布相關(guān)公告和檢測方法指南。

2. 國際標(biāo)準(zhǔn)：
ISO 21571:2005 《食品. 基因改良生物和衍生產(chǎn)品檢測的分析方法. 核酸提取》 (提供通用的核酸提取指南，適用于豬源性檢測前處理)
ISO 20838:2006 《食品. 微生物學(xué). 食品病原體檢測用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）. 擴(kuò)增和檢測要求》 (提供PCR檢測的通用規(guī)范)
盡管沒有專門針對豬源性定量的單一ISO標(biāo)準(zhǔn)，但實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法學(xué)遵循ISO 22118:2011, ISO 22119:2011等關(guān)于食品和飼料中病原體核酸檢測的PCR標(biāo)準(zhǔn)原則。

3. 區(qū)域性/國家性法規(guī)要求：
歐盟、美國、中東等國家和地區(qū)對清真食品、食品標(biāo)簽、飼料安全等有嚴(yán)格規(guī)定，強(qiáng)制要求進(jìn)行物種源性成分檢測（包括豬源性），并認(rèn)可符合其法規(guī)要求的檢測方法（通?；跇?biāo)準(zhǔn)化的實(shí)時(shí)熒光PCR或ELISA）。

選擇標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)鍵點(diǎn)： 實(shí)驗(yàn)室在選擇檢測方法時(shí)，應(yīng)優(yōu)先采用國家或國際公認(rèn)的、經(jīng)過驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn)方法，并確保方法的特異性（只檢出豬）、靈敏度（能檢出痕量成分）、穩(wěn)健性（抵抗樣品基質(zhì)干擾）符合監(jiān)管或客戶要求。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法因其綜合性能優(yōu)越，在絕大多數(shù)標(biāo)準(zhǔn)中被列為首選方法。