一、引言

基孔肯雅熱（Chikungunya fever）是由基孔肯雅病毒（CHIKV）引起、經(jīng)伊蚊（主要是埃及伊蚊和白紋伊蚊）傳播的急性傳染病。臨床特征為突發(fā)高熱、劇烈關(guān)節(jié)疼痛和皮疹，部分患者可遺留持續(xù)性關(guān)節(jié)疼痛。CHIKV在全球熱帶和亞熱帶地區(qū)廣泛流行，對(duì)公共衛(wèi)生構(gòu)成嚴(yán)重威脅。

國境口岸作為人員、貨物和國際交通工具往來的樞紐，是防止傳染病跨境傳播的第一道防線。開展口岸蚊類攜帶CHIKV的監(jiān)測(cè)與檢測(cè)，對(duì)于早期預(yù)警、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估、精準(zhǔn)防控輸入性疫情至關(guān)重要。本指南旨在系統(tǒng)介紹國境口岸蚊類CHIKV檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)、方法、儀器及流程。

二、檢測(cè)的重要性與目標(biāo)

• 重要性：
  • 監(jiān)測(cè)病毒輸入風(fēng)險(xiǎn)： 及時(shí)發(fā)現(xiàn)隨入境交通工具或貨物攜帶的蚊蟲是否感染CHIKV。
  • 評(píng)估本地傳播潛力： 掌握口岸及周邊地區(qū)媒介蚊蟲的感染狀況，評(píng)估本地傳播風(fēng)險(xiǎn)。
  • 指導(dǎo)防控措施： 為采取針對(duì)性滅蚊、疫情預(yù)警、旅行健康建議等提供科學(xué)依據(jù)。
  • 履行國際衛(wèi)生條例義務(wù)： 加強(qiáng)口岸核心能力建設(shè)，防止疾病國際傳播。
• 目標(biāo)：
  • 快速、準(zhǔn)確、靈敏地檢測(cè)蚊蟲樣本中是否存在CHIKV核酸或病毒粒子。
  • 對(duì)陽性結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)和分析。
  • 為風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估和決策提供及時(shí)可靠的實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)。

三、檢測(cè)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)與規(guī)范

國境口岸蚊類CHIKV檢測(cè)需嚴(yán)格遵循國內(nèi)外相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范，確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性、可比性和法律效力：

1. 國內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)：
   • 《國境口岸病媒生物監(jiān)測(cè)規(guī)程》系列標(biāo)準(zhǔn)： 規(guī)定了口岸蚊類監(jiān)測(cè)的總體要求、方法（包括采樣點(diǎn)設(shè)置、采樣方法、樣本處理等）。
   • SN/T 2770-2011 《國境口岸基孔肯雅病毒檢測(cè)方法》： 現(xiàn)行有效的專門針對(duì)國境口岸CHIKV檢測(cè)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，詳細(xì)規(guī)定了分子生物學(xué)檢測(cè)（RT-PCR）和病毒分離的操作步驟、試劑、儀器和質(zhì)量控制要求。
   • GB 19489 《實(shí)驗(yàn)室 生物安全通用要求》： 規(guī)定實(shí)驗(yàn)室生物安全分級(jí)（如BSL-2）及防護(hù)要求，所有涉及活病毒的操作必須在此標(biāo)準(zhǔn)框架下進(jìn)行。
   • 《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》： 對(duì)高致病性病原微生物（CHIKV屬于第三類）的運(yùn)輸、保存、實(shí)驗(yàn)活動(dòng)等有明確規(guī)定。
2. 國際參考：
   • 世界衛(wèi)生組織（WHO）指南： 如《基孔肯雅病毒實(shí)驗(yàn)室診斷指南》等，提供最新的診斷策略、方法學(xué)建議和質(zhì)量保證框架。
   • 世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（WOAH，原OIE）手冊(cè)： 對(duì)蟲媒病毒檢測(cè)也有相關(guān)參考。
   • 國際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)： 如ISO/IEC 17025 《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求》，是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理體系的重要依據(jù)。

四、主要檢測(cè)方法

1. 分子生物學(xué)檢測(cè)（核心方法）：
   • 原理： 檢測(cè)病毒特異性核酸（RNA）。
   • 方法：
     • 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）： 經(jīng)典方法。提取蚊蟲樣本總RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA，再通過PCR擴(kuò)增病毒特異性片段（如E1、nsP1等基因片段），通過凝膠電泳觀察擴(kuò)增條帶判斷結(jié)果。優(yōu)點(diǎn)： 相對(duì)簡單、成本較低。缺點(diǎn)： 需開蓋進(jìn)行電泳，污染風(fēng)險(xiǎn)略高，靈敏度低于實(shí)時(shí)熒光法。
     • 實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Real-time RT-PCR / qRT-PCR）： 目前最常用、推薦的首選方法。 在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記探針（如TaqMan探針）或熒光染料（如SYBR Green），實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過程中熒光信號(hào)的變化，實(shí)現(xiàn)核酸的定量或定性檢測(cè)。優(yōu)點(diǎn)： 閉管操作，污染風(fēng)險(xiǎn)低；靈敏度高、特異性強(qiáng)；可定量；速度快（通常2-4小時(shí)出結(jié)果）。
   • 關(guān)鍵點(diǎn)：
     • 引物/探針設(shè)計(jì)： 針對(duì)CHIKV保守區(qū)域（如結(jié)構(gòu)蛋白E1、E2或非結(jié)構(gòu)蛋白nsP1、nsP4基因）設(shè)計(jì)特異性引物和探針。需定期驗(yàn)證其有效性。
     • 內(nèi)參： 應(yīng)設(shè)置內(nèi)源性對(duì)照（如蚊蟲管家基因Actin、RPS6等）以監(jiān)測(cè)RNA提取質(zhì)量和抑制物存在。
     • 靈敏度與特異性： 通?？蓹z測(cè)到極低拷貝數(shù)的病毒RNA，并能有效區(qū)分CHIKV與其他黃病毒（如登革熱病毒、寨卡病毒）。

2. 病毒分離（金標(biāo)準(zhǔn)）：

   • 原理： 利用活的敏感細(xì)胞系（如C6/36蚊細(xì)胞、Vero E6猴腎細(xì)胞）或乳鼠腦內(nèi)接種，從樣本中分離出活的CHIKV。
   • 方法： 將蚊蟲樣本研磨懸液接種細(xì)胞，觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），或接種乳鼠觀察發(fā)病情況。分離到的病毒需通過免疫熒光（IFA）、RT-PCR或中和試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。
   • 地位： 被認(rèn)為是病毒檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，能獲得活病毒用于分型、溯源、耐藥性等深入研究。
   • 局限性： 耗時(shí)長（通常需數(shù)天至數(shù)周）、成本高、操作復(fù)雜、生物安全要求極高（需在BSL-3實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行增殖后的操作），不適合作為口岸常規(guī)快速篩查的首選方法。主要用于陽性樣本的確證、毒株特性研究或分子方法結(jié)果不明確時(shí)。

3. 血清學(xué)檢測(cè)（主要用于人或動(dòng)物診斷，蚊類檢測(cè)不常用）：

   • 原理： 檢測(cè)病毒特異性抗體（如IgM, IgG）。
   • 方法： 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光試驗(yàn)（IFA）、中和試驗(yàn)（PRNT）等。
   • 在蚊類檢測(cè)中的應(yīng)用： 一般不適用于蚊蟲樣本的直接檢測(cè)，因?yàn)槲孟x不產(chǎn)生針對(duì)病毒的抗體。主要用于監(jiān)測(cè)人群或特定動(dòng)物宿主的感染率，間接反映傳播風(fēng)險(xiǎn)。

五、檢測(cè)儀器與設(shè)備

開展口岸蚊類CHIKV檢測(cè)需要配備以下核心儀器設(shè)備：

1. 樣本前處理與保存：

   • 低溫冰箱： -20°C（短期保存樣本）、-70°C或液氮（長期保存樣本/病毒株）。
   • 生物安全柜（BSC）： II級(jí)A2或B2型（必備?。Ｋ锌赡墚a(chǎn)生氣溶膠或涉及感染性材料的操作（如樣本勻漿、核酸提取、加樣、病毒分離）必須在BSC內(nèi)進(jìn)行。
   • 高速離心機(jī)（帶生物安全轉(zhuǎn)頭）： 用于樣本、裂解液等的離心。
   • 組織研磨器/勻漿器： 用于蚊蟲樣本的粉碎勻漿（需在BSC內(nèi)使用）。
   • 渦旋振蕩器： 用于混勻樣本和試劑。

2. 分子生物學(xué)檢測(cè)（RT-PCR / qRT-PCR）：

   • 核酸提取儀及配套試劑盒： 自動(dòng)化提取蚊蟲樣本總RNA（推薦使用柱式法或磁珠法）。常用品牌：QIAGEN, Thermo Fisher, Roche, Bioer等。
   • PCR儀： 用于常規(guī)RT-PCR擴(kuò)增。
   • 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（qPCR儀）： 進(jìn)行Real-time RT-PCR檢測(cè)的核心設(shè)備。需具備多通道熒光檢測(cè)能力。常用品牌：ABI（現(xiàn)Thermo Fisher）, Bio-Rad, Roche, Qiagen等。
   • 電泳儀及成像系統(tǒng)： 用于常規(guī)RT-PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的分析（凝膠電泳觀察條帶）。
   • 微量移液器（不同量程）： 精確加樣。
   • 超純水系統(tǒng)： 制備實(shí)驗(yàn)用水。

3. 病毒分離（若開展）：

   • CO2培養(yǎng)箱： 用于細(xì)胞培養(yǎng)。
   • 倒置顯微鏡： 觀察細(xì)胞生長狀態(tài)和CPE。
   • 液氮罐： 保存細(xì)胞株和病毒株。
   • 恒溫水浴鍋/金屬?。?/strong> 用于樣本、試劑解凍或保溫。

4. 質(zhì)量控制與生物安全：

   • 高壓蒸汽滅菌器： 對(duì)實(shí)驗(yàn)廢棄物和器材進(jìn)行滅菌處理。
   • 溫度計(jì)、濕度計(jì)： 監(jiān)控實(shí)驗(yàn)室環(huán)境。
   • 個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）： 包括防護(hù)服、口罩（N95或更高）、護(hù)目鏡/面罩、手套等。

檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書

CMA認(rèn)證

檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書

證書編號(hào)：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認(rèn)可

實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書

證書編號(hào)：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認(rèn)證

質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書

證書編號(hào)：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

國境口岸蚊類攜帶基孔肯雅病毒檢測(cè) 甲硝噠唑(甲硝唑)檢測(cè) 異惡隆檢測(cè) 多西環(huán)素(強(qiáng)力霉素）檢測(cè) 管道系統(tǒng)和配管的機(jī)械連接管件性檢測(cè) 壞仁粒檢測(cè) 遷移量檢測(cè) 比芬諾檢測(cè) 亞硝基二甲胺檢測(cè) 金屬物理性能檢測(cè) 聯(lián)系我們 壓力表檢測(cè) 瓷磚檢測(cè) 輪胎檢測(cè) 藥品檢測(cè)要去哪里 材料檢測(cè) 中科光析科學(xué)技術(shù)研究所簡介 家具檢測(cè) 油品檢測(cè) 吸濕性測(cè)定 木質(zhì)素檢測(cè) 低環(huán)境溫度空氣源熱泵（冷水）機(jī)組 戶用和類似用途的熱泵（冷水）機(jī)組檢測(cè) 低環(huán)境溫度空氣源熱泵（冷水）機(jī)組 工商業(yè)用和類似用途的熱泵（冷水）機(jī)組檢測(cè) 一氯胺（總氯）檢測(cè) 牛用橡膠墊檢測(cè)

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