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水生動(dòng)物及其產(chǎn)品病毒性出血性敗血癥病毒（VHSV）檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-10-22 21:54:40 更新時(shí)間：2025-10-21 21:54:40

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

水生動(dòng)物及其產(chǎn)品病毒性出血性敗血癥病毒（VHSV）檢測(cè)

水生動(dòng)物及其產(chǎn)品病毒性出血性敗血癥病毒（VHSV）檢測(cè)

病毒性出血性敗血癥病毒（Viral Hemorrhagic Septicemia Virus，VHSV）是嚴(yán)重危害水生動(dòng)物健康的病原體，主要感染鮭科魚(yú)類(lèi)及其他多種淡水與海水魚(yú)類(lèi)。該病毒引發(fā)的病毒性出血性敗血癥（VHS）具有高傳染性和致死性，可導(dǎo)致養(yǎng)殖業(yè)重大經(jīng)濟(jì)損失，并對(duì)野生魚(yú)類(lèi)種群構(gòu)成威脅。因此，開(kāi)展VHSV的快速、準(zhǔn)確檢測(cè)對(duì)于水產(chǎn)養(yǎng)殖疾病防控、進(jìn)出口檢疫以及生態(tài)保護(hù)至關(guān)重要。檢測(cè)工作通常涉及對(duì)活體水生動(dòng)物、其組織樣本（如腎臟、脾臟）或加工產(chǎn)品進(jìn)行病毒篩查，以確保生物安全并防止疫情擴(kuò)散。通過(guò)系統(tǒng)性檢測(cè)，可及時(shí)識(shí)別感染源，采取隔離或撲殺措施，有效遏制病毒傳播。

檢測(cè)項(xiàng)目

VHSV檢測(cè)項(xiàng)目主要包括病毒病原學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)檢測(cè)以及血清學(xué)檢測(cè)三大類(lèi)。病原學(xué)檢測(cè)側(cè)重于通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒，觀察特征性細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE），適用于病毒活性的確認(rèn)。分子生物學(xué)檢測(cè)則聚焦于病毒核酸的識(shí)別，常用方法包括逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR），能夠高靈敏度地檢測(cè)病毒RNA，尤其適合早期診斷和大規(guī)模篩查。血清學(xué)檢測(cè)則通過(guò)檢測(cè)魚(yú)類(lèi)血清中的特異性抗體，如采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）或病毒中和試驗(yàn)，評(píng)估群體免疫狀況或追溯既往感染歷史。此外，針對(duì)水生動(dòng)物產(chǎn)品（如冷凍魚(yú)卵、魚(yú)糜等），還需進(jìn)行病毒存活性檢測(cè)，確保加工過(guò)程未殘留活性病毒。

檢測(cè)儀器

VHSV檢測(cè)依賴于多種精密儀器以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)節(jié)需使用生物安全柜、二氧化碳培養(yǎng)箱及倒置顯微鏡，用于病毒分離與病變觀察。分子生物學(xué)檢測(cè)中，核酸提取儀、PCR擴(kuò)增儀、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀以及凝膠成像系統(tǒng)是核心設(shè)備，可實(shí)現(xiàn)病毒RNA的高通量提取與定量分析。血清學(xué)檢測(cè)則常用酶標(biāo)儀、洗板機(jī)等自動(dòng)化設(shè)備進(jìn)行ELISA操作，提高檢測(cè)效率。此外，實(shí)驗(yàn)室還需配備超低溫冰箱（-80°C）用于樣本與試劑保存，以及離心機(jī)、微量移液器等輔助工具，確保檢測(cè)流程的標(biāo)準(zhǔn)化與安全性。

檢測(cè)方法

VHSV的檢測(cè)方法需根據(jù)樣本類(lèi)型和檢測(cè)目的靈活選擇。細(xì)胞培養(yǎng)法是將疑似樣本接種于易感細(xì)胞系（如EPC或BF-2細(xì)胞），培養(yǎng)后觀察細(xì)胞病變，并通過(guò)免疫熒光或電鏡進(jìn)一步確認(rèn)病毒存在，該方法特異性高但耗時(shí)較長(zhǎng)。RT-PCR法通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄將病毒RNA轉(zhuǎn)為cDNA，再進(jìn)行PCR擴(kuò)增，通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)特定基因片段，適用于快速篩查；qRT-PCR則可實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程，實(shí)現(xiàn)病毒載量的精確量化，靈敏度極高。血清學(xué)方法如ELISA，利用包被病毒抗原與血清抗體結(jié)合，通過(guò)酶促顯色反應(yīng)判斷結(jié)果，適用于群體監(jiān)測(cè)。對(duì)于產(chǎn)品檢測(cè)，常結(jié)合樣品前處理（如勻漿、離心）與上述方法，確保病毒顆粒或核酸的有效提取。所有方法均需設(shè)置陽(yáng)性與陰性對(duì)照，并進(jìn)行重復(fù)實(shí)驗(yàn)以保障準(zhǔn)確性。