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水生動(dòng)物及其產(chǎn)品病毒性神經(jīng)壞死病檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-10-22 21:02:02 更新時(shí)間：2025-10-21 21:02:03

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

水生動(dòng)物及其產(chǎn)品病毒性神經(jīng)壞死病檢測(cè)

水生動(dòng)物及其產(chǎn)品病毒性神經(jīng)壞死病檢測(cè)

病毒性神經(jīng)壞死病（Viral Nervous Necrosis，VNN）是由神經(jīng)壞死病毒（NNV）引起的一種嚴(yán)重危害水生動(dòng)物健康的病毒性疾病，主要感染海水和淡水魚類，尤其是仔魚和幼魚階段易感性最高。該病以神經(jīng)系統(tǒng)損傷為主要特征，患病個(gè)體常表現(xiàn)出異常游動(dòng)、螺旋狀翻滾、體色變暗、食欲減退等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可在短時(shí)間內(nèi)導(dǎo)致大規(guī)模死亡，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。由于病毒可通過(guò)垂直傳播（親魚攜帶病毒傳染給后代）和水平傳播（水體、飼料、器械等媒介）擴(kuò)散，且感染后尚無(wú)有效治療方法，因此早期、準(zhǔn)確的檢測(cè)對(duì)于疫情預(yù)警、種苗健康管理和國(guó)際貿(mào)易檢疫至關(guān)重要。對(duì)水生動(dòng)物活體、卵、精液以及加工產(chǎn)品（如冷凍魚片）進(jìn)行病毒性神經(jīng)壞死病的病原檢測(cè)，是防控該病蔓延的核心環(huán)節(jié)。

檢測(cè)項(xiàng)目

病毒性神經(jīng)壞死病的檢測(cè)項(xiàng)目主要圍繞病原體——神經(jīng)壞死病毒的識(shí)別和確認(rèn)展開(kāi)。核心檢測(cè)項(xiàng)目包括：病毒核酸檢測(cè)，旨在直接檢測(cè)病毒基因組的存在，這是確認(rèn)感染的黃金標(biāo)準(zhǔn)；病毒抗原檢測(cè)，通過(guò)識(shí)別病毒特異性蛋白來(lái)指示感染狀態(tài)，適用于快速篩查；病毒分離與培養(yǎng)，通過(guò)將樣本接種到敏感細(xì)胞系中觀察細(xì)胞病變效應(yīng)，從而驗(yàn)證病毒的活性，但該方法耗時(shí)較長(zhǎng)；血清學(xué)檢測(cè)，用于檢測(cè)魚類體內(nèi)針對(duì)NNV的特異性抗體，可反映歷史感染或免疫狀況，常用于流行病學(xué)調(diào)查。此外，對(duì)于加工產(chǎn)品，還需評(píng)估病毒在加工過(guò)程中的存活能力，確保產(chǎn)品安全性。

檢測(cè)儀器

進(jìn)行病毒性神經(jīng)壞死病檢測(cè)需要一系列精密的實(shí)驗(yàn)室儀器。核心儀器包括：實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，用于高靈敏度、定量地檢測(cè)病毒核酸，是當(dāng)前最常用的分子診斷工具；PCR基因擴(kuò)增儀，用于常規(guī)的病毒核酸擴(kuò)增；凝膠成像系統(tǒng)，用于觀察PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳結(jié)果；酶標(biāo)儀，在進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）等血清學(xué)檢測(cè)時(shí)，用于讀取吸光度值以定量分析抗原或抗體；生物安全柜，為病毒操作提供無(wú)菌環(huán)境，防止交叉污染和人員感染；細(xì)胞培養(yǎng)箱，用于病毒分離培養(yǎng)時(shí)維持特定溫度、濕度和CO?濃度；高速冷凍離心機(jī)，用于快速分離樣本中的病毒顆?；蚝怂幔灰约俺蜏乇?，用于長(zhǎng)期保存病毒標(biāo)準(zhǔn)品、核酸提取物和臨床樣本。

檢測(cè)方法

病毒性神經(jīng)壞死病的檢測(cè)方法多樣，可根據(jù)檢測(cè)目的和樣本類型選擇適宜的技術(shù)。分子生物學(xué)方法是目前的主流，尤其是實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法，該方法通過(guò)反轉(zhuǎn)錄將病毒RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，再進(jìn)行特異性擴(kuò)增和熒光信號(hào)檢測(cè)，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、可定量且快速的優(yōu)點(diǎn)，適用于大批量樣本的篩查和確診。常規(guī)RT-PCR法結(jié)合凝膠電泳也可用于定性檢測(cè)，但靈敏度相對(duì)較低。細(xì)胞培養(yǎng)法是傳統(tǒng)的病毒分離方法，將組織勻漿液接種到SSN-1等易感細(xì)胞系，觀察特征性的細(xì)胞病變，可確認(rèn)活病毒的存在，但周期需數(shù)天至數(shù)周。免疫學(xué)方法如ELISA，利用特異性抗體捕獲病毒抗原，操作簡(jiǎn)便，適合現(xiàn)場(chǎng)快速初篩，但靈敏度和特異性可能低于分子方法。對(duì)于組織病理學(xué)檢查，可通過(guò)切片染色在顯微鏡下觀察腦、視網(wǎng)膜等神經(jīng)組織的空泡化壞死病變，作為輔助診斷依據(jù)。在選擇方法時(shí)，常結(jié)合多種技術(shù)相互驗(yàn)證，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。