陰性參考品符合率檢測：概念與重要性
在體外診斷試劑（IVD）的研發(fā)、質控和性能評估中，陰性參考品符合率檢測是一項至關重要的核心指標。它專門用于評估診斷試劑或檢測系統(tǒng)正確識別陰性樣本的能力。陰性參考品，通常由經(jīng)嚴格確認不含有待測目標物（如特定病原體核酸、抗原、抗體，或標志物）的臨床樣本或人工模擬樣本組成。這項檢測的核心目標是衡量檢測方法/試劑盒的特異性，即在面對沒有目標物的樣本時，能夠避免產(chǎn)生“假陽性”結果的能力。一個高的陰性符合率意味著該檢測具有較低的假陽性風險，這對于疾病的準確排除、避免不必要的后續(xù)診療（如過度治療、心理負擔）以及確保公共健康監(jiān)測數(shù)據(jù)的可靠性具有極其重要的意義。
檢測項目：陰性參考品符合率
本檢測項目的核心是計算陰性參考品符合率。其定義是：在已知為陰性的一組參考品中，被檢測試劑或系統(tǒng)正確判讀為陰性的樣本數(shù)量占該組總樣本數(shù)量的百分比。公式表達為：
`陰性符合率 (%) = (正確判定的陰性樣本數(shù) / 測試的陰性參考品總數(shù)) × 100%`
陰性參考品的選擇是此項目的關鍵，需要：
1. 明確來源與定義： 樣本需經(jīng)金標準方法（如病原分離培養(yǎng)、測序、權威機構確認）嚴格鑒定為不含目標物。
2. 基質匹配性： 陰性參考品的基質（如血清、血漿、尿液、拭子洗脫液等）應盡可能接近真實臨床樣本，以評估基質效應。
3. 多樣性： 應包含不同來源（如不同健康人群、潛在交叉反應物存在的樣本）、不同濃度范圍的潛在干擾物（如類風濕因子、溶血、脂血、膽紅素、常見共生微生物）以及不同儲存條件的樣本，以全面評估試劑的特異性抗干擾能力。
4. 數(shù)量充足： 需包含足夠數(shù)量的陰性參考品（通常建議不少于50份，根據(jù)具體產(chǎn)品要求可能更高），以保證統(tǒng)計學的可靠性。
檢測儀器
檢測所使用的儀器設備取決于待評估的診斷試劑或檢測系統(tǒng)本身的原理和技術平臺。常見的儀器包括：
1. 酶標儀 (Microplate Reader)： 用于酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、化學發(fā)光免疫分析（CLIA）等基于微孔板的檢測，讀取吸光度(OD)值或發(fā)光值(RLU)。
2. 化學發(fā)光免疫分析儀 (CLIA Analyzer)： 自動化執(zhí)行化學發(fā)光檢測流程，包括加樣、孵育、洗滌、信號讀取和結果判讀。
3. 實時熒光定量PCR儀 (Real-time PCR System / qPCR儀)： 用于核酸檢測，執(zhí)行擴增循環(huán)并實時監(jiān)測熒光信號，獲取Ct值或拷貝數(shù)。
4. 免疫熒光分析儀 (Immunofluorescence Analyzer)： 用于讀取基于熒光標記的快速檢測試劑卡（如膠體金/熒光層析）結果。
5. 生化分析儀 (Clinical Chemistry Analyzer)： 用于基于生化反應的標志物檢測。
6. 分子診斷自動化平臺 (Molecular Diagnostic Automation Platforms)： 整合核酸提取、擴增、檢測于一體的自動化系統(tǒng)。
7. 移液器 (Pipettes)、孵育器 (Incubators)、洗板機 (Plate Washers)： 在手動或半自動操作中必不可少的輔助設備。
關鍵點： 所有用于檢測的儀器必須經(jīng)過校準（Calibration） 和 性能驗證（Qualification），確保其在檢測參數(shù)（如溫度控制精度、加樣精度、光路穩(wěn)定性、信號讀取準確性）方面符合要求，以保證檢測結果的可靠性。
檢測方法
陰性參考品符合率檢測通常按照以下步驟進行：
1. 準備：
* 嚴格按照待評估試劑盒的說明書準備試劑、標準品/質控品和陰性參考品。
* 設定并校準檢測儀器。
* 記錄所有樣本信息（編號、來源、預期結果）和儀器參數(shù)。
2. 檢測運行：
* 將陰性參考品如同真實患者樣本一樣，按照試劑盒的標準操作程序（SOP）進行檢測。通常與試劑盒內(nèi)的陽性質控品、陰性質控品以及/或已知樣本在同一批次中運行。
* 確保操作環(huán)境（如溫度、濕度）符合要求。
* 操作人員需經(jīng)過培訓，嚴格按照SOP操作以避免人為誤差。
3. 結果判讀：
* 根據(jù)試劑盒說明書提供的判讀規(guī)則（如Cut-off值計算、肉眼判讀標準、儀器判讀閾值）對每個陰性參考品的檢測結果進行記錄（陰性/陽性/無效）。
* 儀器自動輸出的結果也需人工復核其與判讀規(guī)則及預期結果的一致性。
4. 數(shù)據(jù)分析與計算：
* 統(tǒng)計所有檢測的陰性參考品總數(shù)（N）。
* 統(tǒng)計被正確判讀為陰性的樣本數(shù)量（Tn）。
* 根據(jù)公式計算陰性參考品符合率：`陰性符合率 = (Tn / N) × 100%`。
* 記錄任何被錯誤判讀為陽性（假陽性）的樣本信息，分析可能原因（如特殊干擾物、操作失誤、儀器故障、試劑問題）。
5. 報告：
* 詳細記錄實驗條件、所用試劑批號、儀器型號及狀態(tài)、操作人員、檢測日期、每個陰性參考品的檢測結果和判讀結果。
* 計算并報告最終的陰性參考品符合率百分比。
檢測標準
陰性參考品符合率檢測的執(zhí)行和結果判定需依據(jù)相關的法規(guī)、技術指導原則和行業(yè)標準，常見的有：
1. 國際標準：
* ISO 15189: 《醫(yī)學實驗室 - 質量和能力的要求》：規(guī)定了醫(yī)學實驗室質量管理體系的要求，包括檢驗程序的驗證和確認，其中包含了對分析特異性（即陰性符合率）的要求。
* ISO/IEC 17025: 《檢測和校準實驗室能力的通用要求》：適用于進行檢測的實驗室，強調(diào)技術能力和管理體系。
2. 國際指南：
* CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) 文件： 如 EP12-A2《定性檢測性能評估的用戶協(xié)議》、EP17-A2《檢出能力評估》、EP05-A3《臨床化學設備的精密度性能評價》等提供了方法學驗證和性能評估的具體方案和統(tǒng)計學要求。
3. 國家法規(guī)與技術指導原則：
* 中國：
* 《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》及其配套規(guī)章（如《體外診斷試劑注冊與備案管理辦法》）。
* 國家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）發(fā)布的《體外診斷試劑分析性能評估指導原則》、《體外診斷試劑臨床試驗技術指導原則》、《免于臨床試驗的體外診斷試劑臨床評價技術指導原則》 等。這些文件明確要求對試劑的分析特異性（通常通過陰性符合率體現(xiàn)）進行評估，并規(guī)定了陰性參考品的選擇要求（如種類、數(shù)量）和可接受的最低性能要求（例如，通常要求陰性符合率 ≥ 95% 或更高，具體視產(chǎn)品風險類別和預期用途而定）。
* 美國：
* FDA 的法規(guī)（如21 CFR Part 809）和指南文件（如《Guidance for Industry and FDA Staff - Statistical Guidance on Reporting Results from Studies Evaluating Diagnostic Tests》)。
* 歐盟：
* IVDR (In Vitro Diagnostic Regulation, (EU) 2017/746) 及其相關協(xié)調(diào)標準（EN ISO 系列標準），對性能評估（包括分析特異性）有嚴格要求。
4. 試劑盒說明書/企業(yè)標準： 試劑制造商自身設定的性能指標（聲稱值），通常會在產(chǎn)品說明書中明確標出陰性符合率的要求（如不低于99%），檢測結果需要達到或超過此聲稱值。
結論： 陰性參考品符合率檢測是評估體外診斷試劑特異性、保障檢測結果準確可靠的核心環(huán)節(jié)。通過精心選擇代表性的陰性參考品，在符合規(guī)范的操作環(huán)境和經(jīng)過驗證的儀器上，嚴格按照標準操作程序（SOP）和相關法規(guī)標準（如ISO、CLSI、NMPA指導原則）進行測試和計算，獲得的陰性符合率是評判試劑性能、保障臨床診斷安全性和有效性的關鍵數(shù)據(jù)。其結果直接關系到假陽性風險的控制，對患者診療決策和公共衛(wèi)生具有重要意義。
CMA認證
檢驗檢測機構資質認定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認證
質量管理體系認證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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