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生物學(xué)評價（皮內(nèi)刺激）檢測

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發(fā)布時間：2025-08-06 17:44:27 更新時間：2025-08-05 17:44:28

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

生物學(xué)評價（皮內(nèi)刺激）檢測：關(guān)鍵要素解析

在醫(yī)療器械、生物材料及藥品的安全性評價體系中，生物學(xué)評價占據(jù)著核心地位。其中，皮內(nèi)刺激試驗是評估材料或器械浸提液在局部接觸后是否引起潛在刺激、炎癥或毒性反應(yīng)的關(guān)鍵項目。該試驗?zāi)M了材料在人體內(nèi)或與組織直接接觸后可能引發(fā)的局部皮膚反應(yīng)，對于預(yù)測臨床應(yīng)用的安全性至關(guān)重要。相較于其他刺激性試驗（如皮膚刺激或眼刺激），皮內(nèi)刺激因其注射方式，能夠更直接地評估材料浸提液成分對皮下組織的潛在影響，是識別材料釋放出的可瀝濾物（如添加劑、單體、滅菌殘留物、降解產(chǎn)物等）是否具有局部刺激性的重要篩選手段。其評價結(jié)果直接影響醫(yī)療器械的生物學(xué)風(fēng)險等級判定和最終上市許可。

檢測項目

皮內(nèi)刺激檢測的核心項目是評估被試材料或器械的浸提液注射到實驗動物（通常為新西蘭白兔）皮內(nèi)后，在規(guī)定的時間點（通常為注射后24小時、48小時和72小時）觀察注射部位皮膚組織的反應(yīng)情況。主要觀察和評價的終點指標(biāo)包括：

1. 紅斑：注射部位皮膚的發(fā)紅程度和范圍。
2. 水腫：注射部位及周圍組織的腫脹程度。
3. 其他異常反應(yīng)：如壞死、出血、色素沉著等。
4. 反應(yīng)評分：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化的評分系統(tǒng)（如Draize評分或其修訂版本）對紅斑和水腫進行量化評分。
5. 組織病理學(xué)檢查（必要時）：對注射部位皮膚進行組織切片，在顯微鏡下觀察炎癥細胞浸潤、組織壞死、纖維化等微觀病理變化，提供更深入的評估依據(jù)。

檢測儀器

皮內(nèi)刺激試驗的進行依賴于一系列標(biāo)準(zhǔn)化的實驗室儀器和設(shè)備：

1. 注射器：無菌、精密的一次性注射器（通常為1mL結(jié)核菌素注射器），用于準(zhǔn)確注射定量的浸提液和對照液。
2. 針頭：細針頭（如26-30G），確保皮內(nèi)注射的精確性和最小化組織損傷。
3. 浸提容器：用于制備材料浸提液，需滿足化學(xué)惰性、無菌、耐高溫的要求（如玻璃容器、特定惰性塑料容器）。
4. 恒溫裝置：恒溫水浴箱或培養(yǎng)箱，用于在特定溫度（如37°C, 50°C, 70°C, 121°C）下進行浸提。
5. 計時設(shè)備：精確計時器或時鐘。
6. 動物固定裝置：安全、人道的兔子固定器。
7. 剃毛工具：電動剃刀或脫毛劑，用于準(zhǔn)備注射部位皮膚。
8. 評分工具：標(biāo)準(zhǔn)化的評分卡或電子記錄系統(tǒng)。
9. 病理學(xué)設(shè)備（如進行組織學(xué)檢查）：組織處理機、包埋機、切片機、染色設(shè)備、光學(xué)顯微鏡等。
10. 離心機（如需要）：用于浸提液的澄清。

檢測方法

皮內(nèi)刺激試驗嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP），主要步驟包括：

1. 樣品制備與浸提：按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（如ISO 10993-12）選擇合適的浸提條件（浸提介質(zhì)：生理鹽水或植物油；浸提比例；浸提溫度和時間）。將材料或器械代表性樣品置于浸提介質(zhì)中，在規(guī)定條件下進行浸提。浸提完成后，收集浸提液并澄清（如需）。
2. 對照設(shè)置：使用陰性對照（如空白浸提介質(zhì)）和陽性對照（如已知溫和刺激物，如苯酚的稀釋液）。
3. 實驗動物準(zhǔn)備：選擇健康成年新西蘭白兔。試驗前適應(yīng)環(huán)境。在背部脊柱兩側(cè)對稱區(qū)域剃毛（避免損傷皮膚）。
4. 皮內(nèi)注射：使用精密注射器，將定量的被試材料浸提液、陰性對照液和陽性對照液分別皮內(nèi)注射到兔子背部兩側(cè)預(yù)先標(biāo)記好的注射點（通常每側(cè)5個點）。確保注射形成皮丘。
5. 觀察與評分：在注射后規(guī)定的時間點（通常是24小時、48小時和72小時），由經(jīng)過培訓(xùn)的觀察員對每個注射部位的紅斑和水腫反應(yīng)進行盲法觀察（即觀察者不知曉注射內(nèi)容物），并依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)評分系統(tǒng)（如Draize法）進行評分。
6. 數(shù)據(jù)記錄與計算：詳細記錄每個時間點、每個注射部位的紅斑評分和水腫評分。計算每個被試樣品和每個對照組的平均原發(fā)刺激指數(shù)（Primary Irritation Index, PII）或根據(jù)具體要求計算其他評價指標(biāo)。
7. 組織病理學(xué)檢查（如適用）：在終點（如72小時）處死動物，取注射部位皮膚組織，固定、包埋、切片、染色，進行顯微鏡下組織學(xué)評估。
8. 結(jié)果分析與判定：將被試樣品的反應(yīng)與陰性對照和陽性對照進行比較。根據(jù)預(yù)定的接受標(biāo)準(zhǔn)（通常基于PII值或組織學(xué)改變的程度）判定被試材料是否具有不可接受的皮內(nèi)刺激反應(yīng)。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

皮內(nèi)刺激試驗的實施和結(jié)果評價必須嚴(yán)格遵循國際和國家認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)，以確保試驗的科學(xué)性、可靠性和可比性。主要的參考標(biāo)準(zhǔn)包括：

1. ISO 10993-10: 醫(yī)療器械生物學(xué)評價 - 第10部分：刺激與皮膚致敏試驗：這是國際上最權(quán)威和廣泛采用的標(biāo)準(zhǔn)。它詳細規(guī)定了皮內(nèi)刺激試驗的原理、動物選擇、樣品制備、試驗方法、觀察評分、結(jié)果解釋和報告要求。該標(biāo)準(zhǔn)提供了試驗設(shè)計的核心框架和結(jié)果判定的指導(dǎo)原則。
2. GB/T 16886.10: 醫(yī)療器械生物學(xué)評價第10部分：刺激與皮膚致敏試驗：中國國家標(biāo)準(zhǔn)，等同于采用ISO 10993-10。是在中國境內(nèi)進行醫(yī)療器械注冊申報必須遵循的標(biāo)準(zhǔn)。
3. USP <88> Biological Reactivity Tests, In Vivo - Intracutaneous Test：美國藥典中規(guī)定的皮內(nèi)試驗方法，常用于藥品包裝材料和某些醫(yī)療器械的測試。其方法與ISO 10993-10有相似性但也有細節(jié)差異（如浸提介質(zhì)、浸提條件、評分時間點等）。
4. OECD TG 404: Acute Dermal Irritation/Corrosion：經(jīng)濟合作與發(fā)展組織（OECD）的測試指南，主要針對化學(xué)品，但其皮內(nèi)刺激評估部分也可提供參考，尤其關(guān)注腐蝕性評估。
5. 藥典（各國藥典）：如中國藥典、歐洲藥典、美國藥典中關(guān)于醫(yī)療器械或包裝材料生物相容性試驗的相關(guān)通則。

實驗室在開展皮內(nèi)刺激試驗時，必須聲明所遵循的具體標(biāo)準(zhǔn)版本，并確保試驗設(shè)計、操作和報告完全符合該標(biāo)準(zhǔn)的要求。遵守這些標(biāo)準(zhǔn)是確保檢測結(jié)果科學(xué)有效、獲得監(jiān)管機構(gòu)認(rèn)可的基礎(chǔ)。