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血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分測(cè)定ELISA法檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-08-04 06:54:08 更新時(shí)間：2025-08-03 06:54:09

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分測(cè)定ELISA法檢測(cè)

血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分測(cè)定是臨床免疫學(xué)中的關(guān)鍵檢測(cè)項(xiàng)目，廣泛應(yīng)用于疾病診斷、免疫狀態(tài)評(píng)估和療效監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。免疫球蛋白（如IgG、IgM、IgA等）是由B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的抗體蛋白，負(fù)責(zé)識(shí)別和中和病原體，在體液免疫中扮演核心角色。補(bǔ)體成分（如C3、C4等）則是免疫系統(tǒng)中的一組蛋白質(zhì)，通過(guò)級(jí)聯(lián)反應(yīng)激活后，可促進(jìn)細(xì)胞溶解、炎癥反應(yīng)和病原清除，對(duì)先天和適應(yīng)性免疫至關(guān)重要。這些成分的異常水平往往與多種疾病相關(guān)，例如免疫缺陷病（如低丙種球蛋白血癥）、自身免疫性疾?。ㄈ缦到y(tǒng)性紅斑狼瘡）、感染性疾病（如HIV或COVID-19）以及慢性炎癥狀態(tài)。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法）作為一種高靈敏度、高特異性的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，已成為血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分測(cè)定的首選方法。該方法利用抗原-抗體反應(yīng)的原理，結(jié)合酶標(biāo)記的放大作用，能夠精確量化微量樣本中的目標(biāo)分子。ELISA法的優(yōu)勢(shì)包括操作簡(jiǎn)便、成本相對(duì)較低、通量高（可同時(shí)處理多個(gè)樣本），且適用于多種樣本類(lèi)型，如血清、血漿或體液。在臨床實(shí)踐中，ELISA檢測(cè)不僅用于篩查和診斷，還可監(jiān)測(cè)治療響應(yīng)，例如評(píng)估癌癥免疫療法或自身免疫病的管理效果。隨著生物技術(shù)發(fā)展，ELISA法不斷優(yōu)化，提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性和可靠性，使其成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的支柱工具。

檢測(cè)項(xiàng)目

血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分測(cè)定的核心項(xiàng)目包括多種免疫球蛋白和補(bǔ)體蛋白。免疫球蛋白檢測(cè)項(xiàng)目包括IgG（免疫球蛋白G）、IgM（免疫球蛋白M）、IgA（免疫球蛋白A）、IgD（免疫球蛋白D）和IgE（免疫球蛋白E）。IgG是血清中最豐富的免疫球蛋白，占總量的70-80%，主要負(fù)責(zé)長(zhǎng)期免疫保護(hù)；IgM是初次免疫應(yīng)答的主要抗體，具有強(qiáng)中和能力；IgA主要存在于黏膜表面，參與局部防御；IgD在免疫細(xì)胞激活中發(fā)揮作用；而IgE則與過(guò)敏反應(yīng)和寄生蟲(chóng)感染相關(guān)。補(bǔ)體成分檢測(cè)項(xiàng)目包括C3（補(bǔ)體成分3）、C4（補(bǔ)體成分4）、C1q、C5-9復(fù)合物等。C3是補(bǔ)體系統(tǒng)的核心分子，參與旁路途徑激活；C4則主要在經(jīng)典途徑中起作用；這些成分的水平變化可反映補(bǔ)體激活狀態(tài)，例如C3和C4低下常提示系統(tǒng)性自身免疫病。其他相關(guān)項(xiàng)目可能包括特定亞類(lèi)（如IgG亞類(lèi)：IgG1、IgG2等）或功能檢測(cè)（如補(bǔ)體溶血活性測(cè)定）。這些項(xiàng)目通過(guò)ELISA法檢測(cè)，能為臨床提供定量數(shù)據(jù)，幫助診斷免疫缺陷、過(guò)敏性疾病、感染等病癥。

檢測(cè)儀器

ELISA法檢測(cè)血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分依賴(lài)于一系列專(zhuān)業(yè)儀器，確保實(shí)驗(yàn)的精確性和高效性。核心儀器包括微孔板閱讀器（酶標(biāo)儀）、微孔板洗板機(jī)、微孔板孵育器和數(shù)據(jù)處理軟件。微孔板閱讀器是ELISA系統(tǒng)的核心部件，用于測(cè)量反應(yīng)后的吸光度值（OD值），常見(jiàn)類(lèi)型包括單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，后者能減少背景干擾提高準(zhǔn)確性。洗板機(jī)用于在反應(yīng)步驟間清洗微孔板，去除未結(jié)合的試劑，確保特異性；現(xiàn)代洗板機(jī)通常配備自動(dòng)程序，可控制清洗次數(shù)和緩沖液量。孵育器提供恒溫環(huán)境（通常37°C），確?？乖?抗體反應(yīng)和酶標(biāo)記反應(yīng)的最佳條件。輔助儀器包括微量移液器（用于精確加樣）、微孔板震蕩器（促進(jìn)試劑混合）和冷藏設(shè)備（用于試劑儲(chǔ)存）。高端實(shí)驗(yàn)室還可能集成自動(dòng)化系統(tǒng)，如全自動(dòng)ELISA工作站，實(shí)現(xiàn)樣本加載、反應(yīng)和數(shù)據(jù)分析的全流程自動(dòng)化。這些儀器的選擇需符合國(guó)際質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，例如ISO 13485認(rèn)證，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。

檢測(cè)方法

ELISA法檢測(cè)血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分通常采用間接ELISA或夾心ELISA方法，這些方法基于抗原-抗體的特異性結(jié)合和酶催化反應(yīng)。以?shī)A心ELISA為例，其標(biāo)準(zhǔn)步驟如下：首先，準(zhǔn)備微孔板，包被特異性捕獲抗體（如抗人IgG抗體），在4°C孵育過(guò)夜以固定抗體；然后，用封閉緩沖液（如牛血清白蛋白溶液）封閉未結(jié)合位點(diǎn)，防止非特異性反應(yīng)；接下來(lái)，加入稀釋的血清樣本，使目標(biāo)分子（如IgG）與捕獲抗體結(jié)合，在37°C孵育1-2小時(shí)；之后，洗滌微孔板去除未結(jié)合物；再添加酶標(biāo)記的檢測(cè)抗體（如辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體），孵育后形成“夾心”復(fù)合物；再次洗滌后，加入底物溶液（如TMB），酶催化底物產(chǎn)生顏色變化；最后，用終止液（如硫酸）停止反應(yīng)，并在酶標(biāo)儀中讀取OD值。間接ELISA適用于檢測(cè)抗體水平，步驟類(lèi)似但以抗原包被開(kāi)始。整個(gè)過(guò)程中，檢測(cè)方法需嚴(yán)格控制參數(shù)，如孵育時(shí)間、溫度和試劑濃度，以確保靈敏度和特異性。數(shù)據(jù)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線（使用已知濃度的校準(zhǔn)品）進(jìn)行量化，計(jì)算樣本濃度。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分的ELISA檢測(cè)需遵循嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)化指南，以確保結(jié)果的一致性和可比性。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)包括CLSI（臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)）的指南，如CLSI EP17-A2（定量檢測(cè)的精密度和準(zhǔn)確性評(píng)估）和CLSI I/LA18-A2（免疫球蛋白測(cè)定方法）。此外，ISO標(biāo)準(zhǔn)如ISO 15189（醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力要求）規(guī)定實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理體系，包括儀器校準(zhǔn)、試劑驗(yàn)證和內(nèi)部質(zhì)量控制。在檢測(cè)實(shí)施中，標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）必須包括質(zhì)控措施：每批實(shí)驗(yàn)使用陰性和陽(yáng)性對(duì)照樣本、校準(zhǔn)曲線和質(zhì)控品（如國(guó)際參考血清），以監(jiān)控批間變異性。參考范圍通?；谌巳簲?shù)據(jù)設(shè)定，例如成人IgG正常值為700-1600 mg/dL，C3為90-180 mg/dL；檢測(cè)結(jié)果的報(bào)告需符合單位標(biāo)準(zhǔn)（如mg/dL或IU/mL）。其他標(biāo)準(zhǔn)涉及生物安全（如樣本處理符合CDC指南）和數(shù)據(jù)記錄（如電子LIMS系統(tǒng)）。定期參與外部質(zhì)量評(píng)估（EQA）計(jì)劃，如CAP（美國(guó)病理學(xué)家協(xié)會(huì)）認(rèn)證，是保證檢測(cè)準(zhǔn)確性的關(guān)鍵。

總之，ELISA法在血清免疫球蛋白和補(bǔ)體成分測(cè)定中具有顯著臨床價(jià)值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化流程和先進(jìn)儀器，為疾病管理提供可靠依據(jù)。