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雜蛋白、脂質(zhì)、DNA殘留檢測

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發(fā)布時間：2025-08-03 15:17:33 更新時間：2025-08-02 15:17:34

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

引言

在生物制藥、食品安全、細胞治療等領(lǐng)域，雜蛋白、脂質(zhì)和DNA殘留的檢測是確保產(chǎn)品純度、安全性和效價的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。雜蛋白主要指在生物制品（如重組蛋白藥物、疫苗或單克隆抗體）生產(chǎn)過程中殘留的非目標蛋白質(zhì)，它們可能來源于宿主細胞（如CHO細胞或大腸桿菌）、培養(yǎng)基成分或降解產(chǎn)物；脂質(zhì)殘留涉及磷脂、膽固醇、甘油三酯等化合物，常源于細胞膜或培養(yǎng)基添加劑；DNA殘留則主要是宿主基因組或質(zhì)粒DNA片段，可能攜帶潛在致癌風(fēng)險。這些殘留物如果不嚴格控制，會導(dǎo)致產(chǎn)品免疫原性升高（如引發(fā)過敏反應(yīng)）、穩(wěn)定性下降（如脂質(zhì)氧化導(dǎo)致失效）或安全風(fēng)險（如DNA殘留可能整合到宿主基因組中引發(fā)突變）。因此，檢測這些殘留不僅是藥品GMP（良好生產(chǎn)規(guī)范）的核心要求，也是國際監(jiān)管機構(gòu)（如FDA、EMA）的強制性標準，旨在保障最終產(chǎn)品的臨床安全性和治療有效性。隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，殘留檢測已成為質(zhì)量控制體系中的基礎(chǔ)環(huán)節(jié)，其精度和靈敏度直接影響產(chǎn)品上市審批和患者健康。

檢測項目

雜蛋白、脂質(zhì)和DNA殘留的檢測項目主要針對特定殘留物進行定量或定性分析，以確保其含量低于安全閾值。雜蛋白檢測項目包括宿主細胞蛋白（HCP）殘留、培養(yǎng)基蛋白殘留和降解蛋白片段，這些項目常用于評估生物制品的純度，例如在單克隆抗體生產(chǎn)中監(jiān)測HCP水平以預(yù)防免疫反應(yīng)。脂質(zhì)檢測項目涵蓋磷脂、膽固醇、甘油三酯和游離脂肪酸殘留，重點關(guān)注其在細胞培養(yǎng)液或最終產(chǎn)品中的含量，以防止脂質(zhì)氧化導(dǎo)致的穩(wěn)定性問題（如在疫苗制劑中）。DNA殘留檢測項目主要針對宿主基因組DNA（gDNA）和質(zhì)粒DNA殘留，涉及片段大小和濃度分析，以確保無致癌風(fēng)險。這些項目通?；陲L(fēng)險分析，如ICH Q6B指南要求DNA殘留限量為每劑100pg以下。檢測項目的選擇需根據(jù)產(chǎn)品類型和生產(chǎn)階段定制，例如在細胞治療中優(yōu)先DNA殘留檢測，而在脂質(zhì)體制劑中則強調(diào)脂質(zhì)殘留。

檢測儀器

雜蛋白、脂質(zhì)和DNA殘留的檢測依賴于先進的儀器設(shè)備，這些儀器提供高靈敏度、高特異性和自動化功能以確保準確結(jié)果。雜蛋白檢測常用儀器包括酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）讀取儀、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）系統(tǒng)和質(zhì)譜儀（如LC-MS/MS），其中ELISA儀用于快速定量HCP殘留，而質(zhì)譜儀適用于復(fù)雜樣本的蛋白質(zhì)鑒定。脂質(zhì)檢測儀器主要有高效液相色譜儀（HPLC）、氣相色譜儀（GC）和傅里葉變換紅外光譜儀（FTIR），HPLC常用于磷脂定量，GC用于脂肪酸分析，F(xiàn)TIR則提供非破壞性快速篩查。DNA殘留檢測核心儀器是實時定量PCR儀（qPCR）、凝膠電泳系統(tǒng)和測序儀（如NGS），qPCR儀用于高靈敏度DNA定量（檢測限可達fg/μL），凝膠電泳用于片段大小分型，NGS則用于全面基因組殘留分析。這些儀器需定期校準，并符合ISO 17025標準，以確保數(shù)據(jù)可靠性。

檢測方法

雜蛋白、脂質(zhì)和DNA殘留的檢測方法涵蓋免疫學(xué)、色譜學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)，這些方法強調(diào)特異性、靈敏度和重現(xiàn)性。雜蛋白檢測主要采用免疫學(xué)方法，如酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）和Western blotting（免疫印跡），ELISA通過抗體-抗原反應(yīng)定量HCP殘留（靈敏度達ng/mL），而Western blotting用于蛋白質(zhì)大小和種類的定性分析；輔助方法包括尺寸排阻色譜（SEC）和質(zhì)譜分析。脂質(zhì)檢測方法以色譜法為主，例如反相高效液相色譜（RP-HPLC）用于磷脂分離定量，氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）用于脂肪酸譜分析，以及薄層色譜（TLC）用于快速篩查；光譜法如紫外-可見分光光度計也用于脂質(zhì)氧化產(chǎn)物檢測。DNA殘留檢測主要依賴分子生物學(xué)方法，如實時定量PCR（qPCR）通過熒光探針定量DNA濃度（基于SYBR Green或TaqMan探針），Southern blot用于DNA片段雜交確認，以及數(shù)字PCR（dPCR）用于高精度絕對定量；樣品前處理方法包括DNA提取和純化，需避免交叉污染。所有方法需驗證特異性、線性和回收率，以確保符合監(jiān)管要求。

檢測標準

雜蛋白、脂質(zhì)和DNA殘留的檢測標準由國際和國家級機構(gòu)制定，確保檢測的統(tǒng)一性、可比性和合規(guī)性，這些標準規(guī)定了殘留限量、方法驗證和報告要求。核心標準包括ICH（國際人用藥品注冊技術(shù)協(xié)調(diào)會）Q6B指南，它明確DNA殘留限量為≤100pg/劑，雜蛋白殘留需基于風(fēng)險設(shè)定閾值（通?！?00ppm），并推薦ELISA和qPCR作為驗證方法。USP（美國藥典）標準如<1132>章節(jié)詳細描述殘留檢測分析程序，要求脂質(zhì)檢測使用HPLC方法（精度誤差<5%），DNA檢測需符合qPCR驗證參數(shù)（如擴增效率90-110%）。EP（歐洲藥典）2.6.7和2.6.21章節(jié)強調(diào)了殘留方法的特異性驗證（如使用陰性對照），并規(guī)定脂質(zhì)氧化產(chǎn)物檢測需基于過氧化值測試。中國藥典（ChP）2020年版也整合了類似標準，要求檢測報告包括LOQ（定量限）和LOD（檢測限）數(shù)據(jù)。此外，ISO/IEC 17025標準確保實驗室質(zhì)量控制，而監(jiān)管提交需遵循EMEA/CVMP/815/00等指南。標準更新頻繁，強調(diào)基于QbD（質(zhì)量源于設(shè)計）原則進行風(fēng)險評估。