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紫外（UV）吸收檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-08-02 21:34:03 更新時(shí)間：2025-08-01 21:34:03

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

紫外（UV）吸收檢測(cè)是一種基于物質(zhì)在紫外光區(qū)（通常波長(zhǎng)范圍為200-400納米）對(duì)特定波長(zhǎng)光線吸收特性的分析技術(shù)，廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、環(huán)境科學(xué)、制藥和質(zhì)量控制等領(lǐng)域。該技術(shù)依賴于比爾-朗伯定律（Beer-Lambert Law），即物質(zhì)的吸光度與其濃度成正比，從而實(shí)現(xiàn)快速、非破壞性的定量分析。在實(shí)際應(yīng)用中，紫外吸收檢測(cè)因其操作簡(jiǎn)便、成本低廉和靈敏度高而備受青睞。例如，在生命科學(xué)研究中，它常用于蛋白質(zhì)和核酸的定量分析；在環(huán)境監(jiān)測(cè)中，用于檢測(cè)水體中的污染物如酚類化合物；在工業(yè)品質(zhì)控制中，則用于驗(yàn)證藥品純度或食品添加劑的安全性。此外，現(xiàn)代技術(shù)的發(fā)展使得紫外吸收檢測(cè)可與高效液相色譜（HPLC）等儀器聯(lián)用，進(jìn)一步提升其多功能性和準(zhǔn)確性。隨著自動(dòng)化儀器的普及，該檢測(cè)方法已成為實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)的基石，為科學(xué)研究和工業(yè)生產(chǎn)提供了可靠的數(shù)據(jù)支持。

檢測(cè)項(xiàng)目

紫外吸收檢測(cè)涵蓋多種常見項(xiàng)目，主要包括生物分子分析和環(huán)境污染物檢測(cè)。在生物領(lǐng)域，蛋白質(zhì)濃度測(cè)定是核心項(xiàng)目，通過測(cè)量280納米波長(zhǎng)的吸光度（因蛋白質(zhì)中的色氨酸和酪氨酸殘基在此波長(zhǎng)有強(qiáng)吸收），可快速評(píng)估樣品中蛋白質(zhì)含量，常用于Western blot或酶活性分析。核酸定量是另一關(guān)鍵項(xiàng)目，利用260納米波長(zhǎng)的吸收特性，測(cè)定DNA或RNA的濃度和純度（如A260/A280比值）。此外，該檢測(cè)還應(yīng)用于藥物分析（如抗生素或維生素的含量檢測(cè)）、水質(zhì)監(jiān)測(cè)（如水體中硝酸鹽或有機(jī)污染物的吸收分析）、以及食品工業(yè)中的添加劑檢測(cè)（如防腐劑或色素）。這些項(xiàng)目不僅支持基礎(chǔ)科研，還服務(wù)于臨床診斷和環(huán)境合規(guī)性測(cè)試，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

檢測(cè)儀器

紫外吸收檢測(cè)的核心儀器是紫外-可見分光光度計(jì)（UV-Vis spectrophotometer），它具備精確的光學(xué)系統(tǒng)和檢測(cè)模塊。主要組成部分包括：光源（常用氘燈或鎢燈，提供200-800納米范圍內(nèi)的穩(wěn)定光輸出）、單色器（用于選擇特定波長(zhǎng)，如通過光柵或棱鏡實(shí)現(xiàn)波長(zhǎng)掃描）、樣品池（通常為石英比色皿，以最小化紫外光的吸收損失）、以及光電檢測(cè)器（如光電倍增管或二極管陣列檢測(cè)器，將光信號(hào)轉(zhuǎn)化為電信號(hào)）?，F(xiàn)代儀器還集成有微處理器和軟件接口，支持自動(dòng)校準(zhǔn)、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)和多參數(shù)分析。常見的品牌型號(hào)包括Thermo Scientific Nanodrop（用于微量樣品分析）和Agilent Cary系列（用于高精度測(cè)量）。這些儀器設(shè)計(jì)緊湊、操作友好，適用于實(shí)驗(yàn)室和現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，確保檢測(cè)過程高效且誤差小。

檢測(cè)方法

紫外吸收檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法通常遵循標(biāo)準(zhǔn)化步驟，以確保結(jié)果可靠。首先，準(zhǔn)備樣品：將待測(cè)物溶解于適當(dāng)溶劑（如水或緩沖液），并去除雜質(zhì)以避免干擾。第二步，儀器設(shè)置：使用空白樣品（如純?nèi)軇┻M(jìn)行基線校準(zhǔn)，選擇特定波長(zhǎng)（如蛋白質(zhì)用280納米，核酸用260納米），并確保儀器處于穩(wěn)定狀態(tài)。第三步，測(cè)量過程：將樣品注入比色皿中，測(cè)量吸光度值（單位為AU）；重復(fù)測(cè)定以獲取平均值。第四步，數(shù)據(jù)分析：應(yīng)用比爾-朗伯定律公式（A = εcl，其中A為吸光度，ε為摩爾吸光系數(shù)，c為濃度，l為光程長(zhǎng)度）計(jì)算濃度。原理上，物質(zhì)吸收紫外光導(dǎo)致電子躍遷，吸光度與濃度正相關(guān)。為確保精度，需控制樣品體積（一般1-3毫升）、溫度（通常在室溫或25°C）和光程（標(biāo)準(zhǔn)為1厘米）。常見方法包括直接吸收法和衍生法（如對(duì)低吸收物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)修飾），整個(gè)過程耗時(shí)短（僅需幾分鐘），適用于大批量樣品處理。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

紫外吸收檢測(cè)需遵守嚴(yán)格的國(guó)際和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，以保障結(jié)果的互認(rèn)性和可靠性。國(guó)際上，ISO標(biāo)準(zhǔn)是主要參考，如ISO 21571:2005（用于食品中核酸的定量分析）和ISO 22115:2011（涉及水質(zhì)檢測(cè)的紫外吸收方法）。在國(guó)內(nèi)，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T）體系提供詳細(xì)指導(dǎo)，例如GB/T 6682-2008（分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格，包括紫外吸光度測(cè)試）和GB/T 15337-2008（針對(duì)環(huán)境污染物如苯酚的紫外檢測(cè)）。此外，行業(yè)特定標(biāo)準(zhǔn)如藥典（如中國(guó)藥典或美國(guó)藥典USP）針對(duì)藥品純度檢測(cè)規(guī)定了波長(zhǎng)范圍和誤差限值（如吸光度偏差不超過±0.1 AU）。這些標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)儀器校準(zhǔn)（使用標(biāo)準(zhǔn)溶液如NIST認(rèn)證的參考物質(zhì)）、質(zhì)量控制步驟（如重復(fù)性和回收率測(cè)試），以及報(bào)告格式要求（包括不確定度評(píng)估）。遵循這些標(biāo)準(zhǔn)可確保檢測(cè)數(shù)據(jù)在法律和商業(yè)場(chǎng)景中的有效性。