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CHO細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-08-02 21:29:47 更新時(shí)間：2025-08-01 21:29:47

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

CHO細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量檢測(cè)

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（Chinese Hamster Ovary cells, CHO cells）是生物制藥領(lǐng)域中最常用的宿主細(xì)胞之一，廣泛應(yīng)用于重組蛋白藥物的生產(chǎn)，如單克隆抗體、疫苗和酶制劑等。在藥物生產(chǎn)過(guò)程中，殘留的宿主細(xì)胞蛋白（Host Cell Proteins, HCPs）是一個(gè)關(guān)鍵的質(zhì)量控制點(diǎn)。這些殘留蛋白可能來(lái)源于細(xì)胞裂解或純化步驟中的不完全去除，如果含量過(guò)高，可能引發(fā)患者免疫反應(yīng)、過(guò)敏或降低藥物療效，從而危及用藥安全。因此，嚴(yán)格監(jiān)測(cè)CHO細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量對(duì)于確保生物制品的安全性、有效性和合規(guī)性至關(guān)重要。這不僅符合國(guó)際藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)（如FDA、EMA）的嚴(yán)格規(guī)范，如ICH Q6B指南，還涉及GMP（藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范）的要求。檢測(cè)過(guò)程需要在藥物開(kāi)發(fā)的各個(gè)階段實(shí)施，包括上游培養(yǎng)、下游純化和最終產(chǎn)品放行，以避免批次失敗和召回風(fēng)險(xiǎn)。

檢測(cè)項(xiàng)目

CHO細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量檢測(cè)的核心項(xiàng)目是宿主細(xì)胞蛋白（HCPs）的總殘留量測(cè)定。這包括定量分析樣品中殘留的CHO細(xì)胞源性蛋白的總濃度，通常以百萬(wàn)分率（ppm）或納克/毫克（ng/mg）表示。此外，特定檢測(cè)項(xiàng)目可能涉及高豐度或高免疫原性的個(gè)體蛋白殘留，如蛋白酶或細(xì)胞因子，這些在特定藥物中可能更具風(fēng)險(xiǎn)。檢測(cè)還可能包括雜質(zhì)譜分析，以識(shí)別殘留蛋白的類(lèi)型和來(lái)源，確保它們不超過(guò)可接受限值（Acceptable Limit）。項(xiàng)目設(shè)計(jì)需基于藥物類(lèi)型、生產(chǎn)工藝和患者人群的敏感性，例如在單克隆抗體生產(chǎn)中，HCP殘留常被控制在低于100 ppm的水平。

檢測(cè)儀器

用于CHO細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量檢測(cè)的儀器主要包括高靈敏度和特異性的分析設(shè)備。最常用的是酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)儀，它能自動(dòng)化讀取和定量HCP抗體結(jié)合的信號(hào)，靈敏度可達(dá)納克級(jí)別。此外，高效液相色譜儀（HPLC）用于分離和定量蛋白混合物，特別適用于雜質(zhì)譜分析；質(zhì)譜儀（如LC-MS/MS）則提供高分辨率檢測(cè)，能識(shí)別單個(gè)殘留蛋白的序列和豐度。其他輔助儀器包括免疫印跡系統(tǒng)（如Western blot設(shè)備）、微孔板分光光度計(jì)和自動(dòng)化移液工作站，以提高檢測(cè)效率和重現(xiàn)性。這些儀器需定期校準(zhǔn)和維護(hù)，以確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性，并符合GLP（良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范）要求。

檢測(cè)方法

CHO細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量的檢測(cè)方法多樣，其中酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法。ELISA基于抗體-抗原特異性結(jié)合的原理，使用抗-CHO HCP抗體包被微孔板，加入樣品后通過(guò)酶標(biāo)二抗產(chǎn)生顏色反應(yīng)，再以分光光度法量化殘留量。該方法靈敏度高（檢測(cè)限約1-10 ng/mL）、通量大，適用于常規(guī)批次檢測(cè)。另一種常用方法是Western blot，用于定性或半定量分析特異性殘留蛋白。對(duì)于高精度需求，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）方法可提供絕對(duì)定量和蛋白鑒定。所有方法均需優(yōu)化樣品前處理（如緩沖液稀釋、離心去雜質(zhì)）和驗(yàn)證參數(shù)（如線性范圍、精密度和回收率），以確保結(jié)果可靠。新興方法如基于質(zhì)譜的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）正逐步應(yīng)用于復(fù)雜樣品。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

CHO細(xì)胞蛋白質(zhì)殘留量檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格遵循國(guó)際和國(guó)家級(jí)法規(guī)指南。核心標(biāo)準(zhǔn)包括ICH Q6B（生物技術(shù)產(chǎn)品質(zhì)量要求），它規(guī)定殘留量需基于風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估設(shè)定限值，通常HCP總量不超過(guò)100 ppm或更低。美國(guó)藥典（USP）<1132>章節(jié)和歐洲藥典（EP）2.6.34提供了方法驗(yàn)證和接受標(biāo)準(zhǔn)的具體要求，如檢測(cè)的精密度應(yīng)≤20% RSD（相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差）。此外，標(biāo)準(zhǔn)要求使用經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的試劑，如商業(yè)化抗-CHO HCP抗體試劑盒，并執(zhí)行嚴(yán)格的QC（質(zhì)量控制）測(cè)試，包括陰性/陽(yáng)性對(duì)照和標(biāo)準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)。企業(yè)還需建立內(nèi)部SOP（標(biāo)準(zhǔn)操作程序），確保檢測(cè)全過(guò)程可追溯和符合GMP/GLP。持續(xù)監(jiān)測(cè)和趨勢(shì)分析是標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行的關(guān)鍵部分，以應(yīng)對(duì)生產(chǎn)工藝變更帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。