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可樂定和賽庚啶檢測

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發(fā)布時間：2025-07-27 03:55:56 更新時間：2025-07-26 03:55:57

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作者：中科光析科學技術(shù)研究所檢測中心

可樂定和賽庚啶檢測綜述

可樂定（Clonidine）是一種中樞性α₂腎上腺素受體激動劑，主要用于治療高血壓、注意力缺陷多動障礙（ADHD）以及作為鎮(zhèn)痛輔助藥物。賽庚啶（Cyproheptadine）則是一種強效的第一代H₁組胺受體拮抗劑，具有抗過敏、抗膽堿能和抗血清素作用，常用于治療過敏性疾病、過敏性鼻炎、蕁麻疹以及作為食欲刺激劑。對這兩種藥物進行準確檢測具有重要的臨床、法醫(yī)和監(jiān)管意義，涉及治療藥物監(jiān)測（TDM）以確保有效性和安全性、法醫(yī)毒理學分析（如中毒案件調(diào)查或駕駛能力評估）、興奮劑檢測（可樂定在某些運動項目中被禁用）、以及食品安全監(jiān)控（防范非法添加于食品或飼料中）。可靠的檢測方法是保障公眾健康、競技體育公平及司法公正的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

檢測項目

針對可樂定和賽庚啶的檢測項目主要涵蓋以下幾個方面：
? 定性檢測： 確認樣本（如血液、尿液、組織、食品、藥品）中是否存在可樂定或賽庚啶。
? 定量檢測： 精確測定樣本中目標藥物的濃度水平，這對于治療藥物監(jiān)測（評估是否達到治療窗或發(fā)生中毒）和法醫(yī)定量分析至關(guān)重要。
? 代謝物分析： 識別和測定其主要代謝產(chǎn)物，有助于判斷藥物使用時間、評估代謝狀態(tài)或在原藥濃度較低時作為使用標志物。
? 基質(zhì)特異性檢測： 根據(jù)不同來源樣本（生物體液、藥品制劑、食品、環(huán)境樣品）的特點，開發(fā)并應用適宜的檢測方案。

檢測儀器

可樂定和賽庚啶的檢測高度依賴現(xiàn)代分析儀器，主要包括：
? 色譜類儀器：
  - 高效液相色譜儀 (HPLC)： 配備紫外/可見光檢測器 (UV/Vis) 或二極管陣列檢測器 (DAD)，是常用的分離和定量工具，尤其適用于藥物制劑和部分生物樣本。
  - 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀 (LC-MS/MS)： 當前最主流和權(quán)威的檢測平臺。LC實現(xiàn)高效分離，串聯(lián)質(zhì)譜（通常使用三重四極桿）提供極高的選擇性（通過母離子和特征子離子）和靈敏度，能夠準確地在復雜基質(zhì)中進行超痕量定量檢測，是生物樣品（血、尿）、法醫(yī)檢材及食品中痕量藥物分析的金標準。
? 光譜類儀器：
  - 紫外-可見分光光度計 (UV-Vis)： 可用于簡單樣本（如純品或簡單制劑）的初步定量分析，但特異性和抗干擾能力較差。
? 免疫學儀器：
  - 酶聯(lián)免疫吸附測定儀 (ELISA Reader)： 用于基于抗原-抗體反應的快速篩查。ELISA試劑盒可用于大批量樣品的初步篩查，具有操作相對簡便、成本較低的優(yōu)點，但可能存在交叉反應，陽性結(jié)果通常需要色譜/質(zhì)譜法確證。

檢測方法

可樂定和賽庚啶的檢測通常遵循以下方法流程：
1. 樣品前處理： 這是保證分析準確性的關(guān)鍵步驟。方法包括：
  - 液液萃取 (LLE)： 利用目標物在不相溶溶劑間的分配差異進行提取和富集，常用有機溶劑如二氯甲烷、乙酸乙酯、叔丁基甲醚等，常需調(diào)節(jié)pH值以提高提取效率。
  - 固相萃取 (SPE)： 利用填充有特定吸附劑（如C18硅膠、混合模式陽離子交換吸附劑MCX等）的小柱對目標物進行選擇性吸附、洗滌和洗脫。SPE具有選擇性好、凈化效率高、易于自動化等優(yōu)勢，尤其適用于復雜生物基質(zhì)的處理。
  - 蛋白沉淀 (PP)： 對于血漿/血清樣品，常用乙腈、甲醇等有機溶劑或酸（如三氯乙酸）沉淀蛋白質(zhì)，離心后取上清液分析。方法簡單快速，但凈化效果相對較弱。
  - 稀釋： 對于濃度較高的樣本（如某些制劑或標準溶液）或與質(zhì)譜兼容的基質(zhì)（如某些尿液樣本），可直接或簡單稀釋后進樣。
2. 儀器分析：
  - HPLC-UV/DAD法： 優(yōu)化色譜柱（通常為C18反相柱）、流動相（常用甲醇/乙腈-水/緩沖鹽系統(tǒng)，可能需要添加離子對試劑或調(diào)節(jié)pH）和檢測波長（可樂定常用~210nm，賽庚啶常用~285nm）以實現(xiàn)良好的分離和檢測。
  - LC-MS/MS法： 這是首選的確證和精確定量方法。
    ? 色譜分離：采用反相色譜柱（如C18），優(yōu)化流動相（乙腈/甲醇 - 水/甲酸銨緩沖液）和梯度洗脫程序。
    ? 質(zhì)譜條件：采用電噴霧離子源（ESI），正離子模式（ESI+）檢測（可樂定和賽庚啶都易質(zhì)子化為[M+H]+離子）。通過優(yōu)化源參數(shù)（溫度、氣體流速、電壓）和碰撞能量（CE），選擇特征性的母離子和子離子對進行多反應監(jiān)測（MRM）。例如：
      可樂定: [M+H]+ 230.1 → 子離子 (如 213.1, 174.1, 144.1)
      賽庚啶: [M+H]+ 288.2 → 子離子 (如 215.1, 191.1, 140.1)
3. 定性與定量： 通過與標準品保留時間和質(zhì)譜特征（或UV光譜）比對進行定性。定量通常采用外標法或內(nèi)標法（同位素標記的內(nèi)標如d4-可樂定、d5-賽庚啶是最佳選擇，可校正前處理和儀器響應的變異）。

檢測標準

可樂定和賽庚啶的檢測需遵循嚴格的標準以確保結(jié)果的準確性、可靠性和可比性。主要參考標準包括：
? 《中華人民共和國藥典》：藥典中對相關(guān)藥物原料、單方及部分復方制劑的含量測定、有關(guān)物質(zhì)檢查等有明確規(guī)定，常采用HPLC-UV法。
? 國際標準（ISO）、國際奧委會（IOC）/世界反興奮劑機構(gòu)（WADA）禁用清單及技術(shù)文件： 可樂定在特定情況下（如賽內(nèi)口服禁用）被WADA列為禁用物質(zhì)。WADA發(fā)布有詳盡的《禁用清單國際標準》和《檢測技術(shù)文件》（TD），對包括可樂定在內(nèi)的禁用物質(zhì)的檢測方法（必須采用LC-MS/MS等確證方法）、最低報告水平（MRL）等有嚴格要求。
? 美國藥典（USP）、歐洲藥典（EP）： 對藥物產(chǎn)品的質(zhì)量標準和檢測方法（如含量測定、雜質(zhì)分析）有詳細規(guī)定。
? 國家食品藥品監(jiān)督管理機構(gòu)發(fā)布的標準： 如針對保健食品、動物源性食品中可能非法添加的化學藥物（包括可樂定、賽庚啶等）的補充檢驗方法和判定標準。
? 國際公認的分析方法指南： 如美國臨床和實驗室標準協(xié)會（CLSI）指南、美國法醫(yī)毒理學協(xié)會（SOFT）/美國分析毒理學協(xié)會（AAFS）的指導方針，對生物樣本中藥物的分析驗證（如特異性、線性、精密度、準確度、回收率、穩(wěn)定性、基質(zhì)效應等）提出規(guī)范要求。
? 食品安全國家標準： 如GB 31658等系列標準，可能涉及對食品（特別是聲稱有減肥等功能的產(chǎn)品）中非法添加可樂定、賽庚啶等化學藥物的檢測要求。