您現(xiàn)在的位置：首頁 > 檢測項(xiàng)目 > 其他檢測

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（致突變實(shí)驗(yàn)）檢測

1對(duì)1客服專屬服務(wù)，免費(fèi)制定檢測方案，15分鐘極速響應(yīng)

可選形式：電子報(bào)告紙質(zhì)報(bào)告

可選語言：中文報(bào)告英文報(bào)告

發(fā)布時(shí)間：2025-07-21 19:55:22 更新時(shí)間：2025-07-20 19:55:22

點(diǎn)擊：0

作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（致突變實(shí)驗(yàn)）檢測

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（Ames試驗(yàn)）檢測

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)，通常被稱為Ames試驗(yàn)（Ames Test），是遺傳毒理學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用最為廣泛的短期致突變性篩選試驗(yàn)之一。該試驗(yàn)由Bruce Ames教授及其團(tuán)隊(duì)于20世紀(jì)70年代開發(fā)，其核心原理是利用特定的鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）或大腸桿菌（Escherichia coli）試驗(yàn)菌株，這些菌株因其組氨酸（his）或色氨酸（trp）合成基因發(fā)生突變而成為營養(yǎng)缺陷型（即不能在不含相應(yīng)氨基酸的培養(yǎng)基上生長）。當(dāng)受試物具有致突變性時(shí)，它能誘發(fā)這些缺陷基因發(fā)生回復(fù)突變（回復(fù)到野生型），從而使細(xì)菌恢復(fù)合成該氨基酸的能力，能夠在缺乏相應(yīng)氨基酸的基本培養(yǎng)基上形成肉眼可見的菌落。通過計(jì)數(shù)自發(fā)和誘導(dǎo)產(chǎn)生的回復(fù)突變菌落數(shù)，即可評(píng)估受試物誘發(fā)基因突變（點(diǎn)突變或移碼突變）的潛在能力。該試驗(yàn)因其快速、經(jīng)濟(jì)、靈敏且與哺乳動(dòng)物致癌性有較好的相關(guān)性，被國際公認(rèn)為化學(xué)品、藥品、食品添加劑、農(nóng)藥、化妝品等產(chǎn)品遺傳毒性評(píng)價(jià)的首選篩檢方法，是產(chǎn)品安全評(píng)估和新藥注冊(cè)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

檢測項(xiàng)目

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)的主要檢測項(xiàng)目是評(píng)估受試物能否誘導(dǎo)特定組氨酸/色氨酸缺陷型試驗(yàn)菌株發(fā)生回復(fù)突變。具體包括：

回復(fù)突變菌落計(jì)數(shù)：定量測定在含有受試物（有或無代謝活化系統(tǒng)）的平板上生長的回復(fù)突變子數(shù)量。
劑量-反應(yīng)關(guān)系分析：觀察回復(fù)突變菌落數(shù)是否隨受試物濃度或劑量的增加而增加（通常呈劑量依賴性）。
背景菌落（自發(fā)回復(fù)突變）計(jì)數(shù)：測定不含受試物的基礎(chǔ)培養(yǎng)基上自然形成的回復(fù)突變菌落數(shù)。
菌株特異性檢測：使用不同的標(biāo)準(zhǔn)菌株（如TA97, TA98, TA100, TA102, TA1535, TA1537, WP2 uvrA/pKM101等）以檢測不同類型的突變（如堿基置換、移碼突變、氧化損傷等）。
代謝活化影響評(píng)估：比較在有（+S9 mix）和無（-S9 mix）哺乳動(dòng)物肝微粒體酶代謝活化系統(tǒng)條件下受試物的致突變性，判斷其是否為前致突變物。
菌株背景生長檢查：確保在不含組氨酸/色氨酸的頂層瓊脂中，只有回復(fù)突變子才能生長。

檢測儀器

進(jìn)行細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)需要以下關(guān)鍵儀器設(shè)備：

恒溫培養(yǎng)箱：用于培養(yǎng)試驗(yàn)菌株（通常37°C）以及孵育試驗(yàn)平板（通常37°C，48-72小時(shí)）。
生物安全柜/超凈工作臺(tái)：提供無菌操作環(huán)境，用于菌液制備、加樣、鋪板等步驟，確保實(shí)驗(yàn)過程無菌，保護(hù)操作人員安全。
高壓蒸汽滅菌鍋：用于培養(yǎng)基、試劑、玻璃器皿、移液器吸頭等的滅菌處理。
恒溫水浴鍋：用于融化并保持頂層瓊脂于45°C左右（防止?fàn)C死細(xì)菌）。
冰箱和冷凍保存設(shè)備：用于儲(chǔ)存標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)菌株（如-80°C或液氮）以及培養(yǎng)基、試劑等（4°C或-20°C）。
菌落計(jì)數(shù)器：用于準(zhǔn)確、快速地計(jì)數(shù)培養(yǎng)后平板上形成的回復(fù)突變菌落數(shù)（手動(dòng)或自動(dòng)計(jì)數(shù)儀）。
pH計(jì)：用于精確測量和調(diào)整培養(yǎng)基及溶液的pH值。
電子天平：用于精確稱量化學(xué)試劑和受試物。
渦旋振蕩器：用于混勻菌液、試劑和受試物溶液。
移液器：不同量程的微量移液器用于精確移取菌液、受試物、S9混合液、頂層瓊脂等。
分光光度計(jì)：用于測定菌液濃度（如OD600值），確保加入的活菌數(shù)一致。
培養(yǎng)皿（平皿）：用于制備和培養(yǎng)試驗(yàn)平板。

檢測方法

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)的標(biāo)準(zhǔn)方法主要采用平板摻入法（Plate Incorporation Assay），有時(shí)輔以預(yù)培養(yǎng)法（Preincubation Assay）?；玖鞒倘缦拢?/p>

菌株準(zhǔn)備：從冷凍保存狀態(tài)復(fù)蘇標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)菌株（如TA98, TA100等），在營養(yǎng)肉湯中培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期，并通過組氨酸/色氨酸需求試驗(yàn)、深粗糙型突變（rfa）、DNA修復(fù)缺陷（uvrB或uvrA）、抗藥性標(biāo)記（如R因子pKM101）等特征鑒定其基因型正確性。
受試物處理：將一定體積（通常0.1 ml）的菌液、不同濃度的受試物溶液（溶劑對(duì)照、陽性對(duì)照及多個(gè)劑量組）及代謝活化系統(tǒng)（+S9 mix）或緩沖液（-S9 mix），依次加入裝有融化的頂層瓊脂（約45°C）的小試管中。S9混合液通常由嚙齒動(dòng)物（常用大鼠）肝臟勻漿經(jīng)9000g離心后的上清液（S9組分）與輔因子（NADPH生成系統(tǒng)）混合而成。
混勻鋪板：立即將試管內(nèi)容物充分混勻后，迅速傾倒在最低葡萄糖基本培養(yǎng)基平板上，輕輕晃動(dòng)使其均勻分布。
培養(yǎng)：待頂層瓊脂凝固后，將平板倒置放入37°C恒溫培養(yǎng)箱中避光培養(yǎng)48-72小時(shí)。
菌落計(jì)數(shù)：培養(yǎng)結(jié)束后，計(jì)數(shù)每塊平板上生長的回復(fù)突變菌落數(shù)。通常每個(gè)劑量組和對(duì)照均需設(shè)置多個(gè)平行平板（通常3個(gè)）。
數(shù)據(jù)處理與結(jié)果判定：
- 計(jì)算每個(gè)劑量組的平均回復(fù)突變菌落數(shù)。
- 與溶劑對(duì)照組（陰性對(duì)照）的平均自發(fā)回復(fù)突變菌落數(shù)比較。
- 判斷結(jié)果是否為陽性：通常認(rèn)為當(dāng)受試物在至少一個(gè)菌株、有或無S9條件下，誘導(dǎo)的回復(fù)突變菌落數(shù)達(dá)到或超過自發(fā)回復(fù)突變數(shù)的2倍（即突變率MF ≥ 2），并且顯示出劑量-反應(yīng)關(guān)系，或者某劑量點(diǎn)菌落數(shù)顯著高于溶劑對(duì)照（如具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），且該結(jié)果具有可重復(fù)性，則判定為陽性（具有致突變性）。
- 陽性對(duì)照（如疊氮鈉、2-硝基芴、2-氨基蒽等）應(yīng)誘顯著高于自發(fā)回復(fù)突變菌落數(shù)的結(jié)果，陰性對(duì)照（溶劑）應(yīng)在本底范圍內(nèi)。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)的實(shí)施需嚴(yán)格遵循國際或國家認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP）和指南性文件。主要的標(biāo)準(zhǔn)包括：

國際標(biāo)準(zhǔn)：
- OECD Guideline 471: 《細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)方法》（Bacterial Reverse Mutation Test）。這是國際上應(yīng)用最廣泛、最具權(quán)威性的標(biāo)準(zhǔn)，詳細(xì)規(guī)定了試驗(yàn)原理、菌株要求、試驗(yàn)方法（平板摻入法和預(yù)培養(yǎng)法）、結(jié)果評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)與數(shù)據(jù)報(bào)告要求。
中國國家標(biāo)準(zhǔn)：
- GB 15193.4-2014： 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)》（由GB 15193.4-2003修訂而來）。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品及其相關(guān)產(chǎn)品遺傳毒性檢測的Ames試驗(yàn)方法，基本采納了OECD 471的原則。
其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)與指南：
- ICH S2(R1)：人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(huì)議（ICH）的《遺傳毒性試驗(yàn)和數(shù)據(jù)分析指導(dǎo)原則》，強(qiáng)調(diào)細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)是標(biāo)準(zhǔn)遺傳毒性組合試驗(yàn)的核心部分。
- US EPA OPPTS 870.5100：美國環(huán)保署（EPA）的《細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)指南》，適用于農(nóng)藥等化學(xué)品的測試。