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脲酶的定性檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-21 19:30:20 更新時(shí)間：2025-07-20 19:30:20

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

脲酶的定性檢測(cè)概述

脲酶（Urease）是一種重要的水解酶，主要存在于某些細(xì)菌、植物和微生物中，它能催化尿素分解為氨和碳酸，這一過(guò)程在生物體的氮代謝、土壤肥力調(diào)節(jié)以及臨床診斷中具有關(guān)鍵作用。定性檢測(cè)是分析脲酶存在或活性的一種基礎(chǔ)方法，通過(guò)簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)快速判斷樣品中是否含有該酶，常用于微生物鑒定、環(huán)境監(jiān)測(cè)和醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域，如檢測(cè)幽門(mén)螺桿菌感染。這種檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)在于操作簡(jiǎn)便、成本低廉，適合大規(guī)模篩查，但其結(jié)果僅提供“有”或“無(wú)”的二元信息，不能量化酶活性水平，因此常作為初步篩查工具，結(jié)合定量方法進(jìn)行更深入的分析。

檢測(cè)項(xiàng)目

脲酶定性檢測(cè)的核心項(xiàng)目是確認(rèn)樣品中脲酶的存在與否。這通常涉及環(huán)境樣品（如土壤或水樣）、生物樣本（如細(xì)菌培養(yǎng)物或臨床標(biāo)本）或工業(yè)產(chǎn)品中的酶活性評(píng)估。具體檢測(cè)項(xiàng)目包括：脲酶催化的尿素水解反應(yīng)、反應(yīng)產(chǎn)物的生成（如氨或二氧化碳的釋放），以及由此引起的pH變化。這些項(xiàng)目旨在提供快速可靠的結(jié)果，幫助識(shí)別特定微生物（如幽門(mén)螺桿菌）或評(píng)估酶在生態(tài)系統(tǒng)中的分布。

檢測(cè)儀器

脲酶定性檢測(cè)常用的儀器相對(duì)簡(jiǎn)單，適合常規(guī)實(shí)驗(yàn)室操作。主要包括試管、培養(yǎng)皿、移液器和pH計(jì)等基本實(shí)驗(yàn)室設(shè)備。試管用于盛放反應(yīng)混合物；培養(yǎng)皿在微生物檢測(cè)中用于接種樣品；移液器確保試劑的精確添加；pH計(jì)或便攜式pH試紙可監(jiān)測(cè)反應(yīng)中pH值的變化，間接指示脲酶活性。此外，顯微鏡用于觀察細(xì)菌形態(tài)變化（如沉淀形成），而恒溫培養(yǎng)箱用于維持反應(yīng)溫度（通常25-37°C）。這些儀器成本低廉、易于維護(hù)，適用于現(xiàn)場(chǎng)或資源有限的檢測(cè)環(huán)境。

檢測(cè)方法

脲酶定性檢測(cè)主要采用指示劑法，其中最常用的是酚紅尿素法。該方法操作步驟如下：首先，制備含尿素的培養(yǎng)基或緩沖液，并添加酚紅指示劑；然后，將待測(cè)樣品（如細(xì)菌懸液）加入其中；在37°C培養(yǎng)24-48小時(shí)后，觀察顏色變化——如果脲酶存在，尿素水解產(chǎn)生氨，導(dǎo)致pH升高（堿性），酚紅指示劑由黃色變?yōu)榧t色或粉紅色。其他方法包括尿素瓊脂法，通過(guò)瓊脂平板上的菌落顏色變化判斷陽(yáng)性結(jié)果。這些方法的優(yōu)勢(shì)是快速直觀（通常在幾小時(shí)內(nèi)出結(jié)果），但需嚴(yán)格控制溫度和時(shí)間以避免假陽(yáng)性或假陰性。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

脲酶定性檢測(cè)遵循國(guó)際和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以確保結(jié)果的可靠性和可比性。主要標(biāo)準(zhǔn)包括ISO 6579-1:2017（用于沙門(mén)氏菌等微生物檢測(cè)中的脲酶試驗(yàn)）、CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute) M07-A13（臨床微生物學(xué)中的標(biāo)準(zhǔn)程序），以及國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)如GB/T 4789.4-2016（中國(guó)食品安全微生物檢測(cè)）。這些標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范了試劑濃度（如尿素濃度0.5-1%）、反應(yīng)條件（pH 6.8-7.2，溫度37°C）、陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)（如顏色變化閾值），并要求使用質(zhì)量控制菌株（如變形桿菌作為陽(yáng)性對(duì)照）。遵守標(biāo)準(zhǔn)能減少誤差，提高檢測(cè)的可重復(fù)性。