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分子吸收分光光度法(紫外和可見光部分)檢測

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發(fā)布時間：2025-07-20 05:49:38 更新時間：2025-07-19 05:49:39

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

分子吸收分光光度法概述

分子吸收分光光度法（Molecular Absorption Spectrophotometry），特指在紫外（UV, 200-400 nm）和可見光（Visible, 400-750 nm）范圍內(nèi)的檢測技術(shù)，是一種基于分子對特定波長光吸收的定量分析方法。該方法的核心原理源于Beer-Lambert定律，即物質(zhì)的吸光度與其濃度成正比，并與光程長度和摩爾吸光系數(shù)相關(guān)。在紫外光區(qū)域，分子如含有不飽和鍵的有機化合物（如芳香族化合物）會吸收能量導(dǎo)致電子躍遷；在可見光區(qū)域，過渡金屬離子或染料分子則因d-d躍遷或π-π*躍遷產(chǎn)生特征吸收。這種方法廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥、環(huán)境監(jiān)測、食品工業(yè)和材料科學(xué)等領(lǐng)域，因其操作簡便、靈敏度高（可達ppm級別）、非破壞性以及低成本等優(yōu)勢，成為實驗室常規(guī)測試手段。此外，隨著現(xiàn)代儀器的發(fā)展，該方法已實現(xiàn)自動化檢測，支持多波長掃描，可針對復(fù)雜樣品矩陣進行快速分析。

檢測項目

分子吸收分光光度法在紫外和可見光部分適用于多種物質(zhì)的定量檢測。常見的檢測項目包括：生物樣本中的蛋白質(zhì)濃度（如通過280 nm波長測量）、核酸含量（如DNA/RNA在260 nm的吸收）、維生素（如維生素C在265 nm）和酶活性；環(huán)境樣品中的重金屬離子（如鐵離子在510 nm、銅離子在600 nm）和有機污染物（如苯酚在270 nm）；食品中的添加劑和色素（如人工色素在可見光區(qū)的特定波長）；以及工業(yè)材料中的純度分析（如聚合物殘留單體）。這些項目通常要求目標(biāo)物質(zhì)具有特征吸收峰，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法實現(xiàn)精準(zhǔn)定量。

檢測儀器

用于紫外和可見光部分的分子吸收分光光度檢測，核心儀器是紫外-可見分光光度計（UV-Vis Spectrophotometer）。該儀器主要由光源（如氘燈用于紫外區(qū)、鹵鎢燈用于可見區(qū)）、單色器（用于分離特定波長光）、樣品室（放置比色皿或流動池）、檢測器（光電倍增管或二極管陣列）以及數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成?，F(xiàn)代設(shè)備如雙光束分光光度計可提供更高的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性，支持自動波長掃描和背景校正。儀器需定期校準(zhǔn)，使用標(biāo)準(zhǔn)濾光片或參考溶液確保精度。常見品牌包括島津（Shimadzu）、珀金埃爾默（PerkinElmer）和安捷倫（Agilent），價格范圍從入門級數(shù)千元到高端數(shù)十萬元不等。

檢測方法

分子吸收分光光度法的檢測方法遵循標(biāo)準(zhǔn)化操作流程。首先，樣品制備是基礎(chǔ)步驟：需將待測物溶解或稀釋于合適溶劑中（如水或緩沖液），并確保樣品清澈無懸浮物以避免散射干擾。接著，設(shè)置儀器參數(shù)：選擇目標(biāo)波長（基于物質(zhì)的最大吸收峰，如蛋白質(zhì)在280 nm）、光程長度（常用1 cm比色皿）并進行空白校正。然后進行測量：將樣品放入樣品室，讀取吸光度值（A），使用Beer-Lambert定律（A = εcl）計算濃度，其中ε為摩爾吸光系數(shù)，c為濃度，l為光程。方法包括單點測定或標(biāo)準(zhǔn)曲線法（繪制濃度-吸光度線性圖）。為提高準(zhǔn)確性，需控制溫度（25°C標(biāo)準(zhǔn)）和pH值，并重復(fù)三次測量取平均值。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

分子吸收分光光度法的檢測必須符合國際和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，以確保結(jié)果可靠和可比性。國際上，ISO 7887:2011 規(guī)定了水質(zhì)中色度測定方法，涉及紫外-可見吸收；ASTM E275-08 詳細描述了紫外和可見分光光度計的校準(zhǔn)與操作標(biāo)準(zhǔn)；在中國，GB/T 5009.7-2016 針對食品中還原糖的測定使用了此方法。行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)如藥典通則（如USP <851> 或中國藥典通則0401）對藥品純度和含量檢測有具體要求。這些標(biāo)準(zhǔn)強調(diào)儀器驗證（如波長準(zhǔn)確性和吸光度線性）、樣品處理規(guī)范和質(zhì)量控制措施（如空白對照和回收率測試）。實施時，需定期審核實驗室SOP（標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程）以符合認證體系如ISO/IEC 17025。