志賀氏菌檢測

志賀氏菌（Shigella）是引起細(xì)菌性痢疾（菌?。┑闹饕≡w之一，其傳播途徑主要為糞-口傳播，常見于受污染的食物、水源或接觸感染。該菌感染性強(qiáng)，可導(dǎo)致高熱、腹痛、腹瀉（常伴粘液膿血便）及嚴(yán)重脫水等癥狀，對公共衛(wèi)生安全構(gòu)成重大威脅。因此，建立快速、準(zhǔn)確、標(biāo)準(zhǔn)化的志賀氏菌檢測體系，對于食品衛(wèi)生監(jiān)管、水源安全監(jiān)測、臨床診斷及疫情控制至關(guān)重要。檢測工作需覆蓋食品生產(chǎn)鏈、醫(yī)療機(jī)構(gòu)、環(huán)境水體等多個(gè)環(huán)節(jié)，以有效預(yù)防和控制志賀氏菌病的暴發(fā)與流行。

檢測體系的核心在于科學(xué)選擇檢測項(xiàng)目，規(guī)范應(yīng)用精密儀器，嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化的檢測方法，并依據(jù)國內(nèi)外權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行結(jié)果判定。通過對樣本中志賀氏菌的存在與否及數(shù)量進(jìn)行定性或定量分析，可以評估污染程度，追溯污染源，并指導(dǎo)采取有效的干預(yù)措施。一個(gè)完善的檢測流程是保障消費(fèi)者健康和維護(hù)社會(huì)穩(wěn)定的重要防線。

一、主要檢測項(xiàng)目

志賀氏菌檢測的核心在于確認(rèn)目標(biāo)樣本中是否存在該病原菌及其具體種/型。關(guān)鍵檢測項(xiàng)目包括：

1. 定性檢測： 判定樣本中是否含有志賀氏菌屬細(xì)菌。這是最基礎(chǔ)的篩查項(xiàng)目，適用于大部分食品安全、水質(zhì)監(jiān)測場景。
2. 定量檢測： 測定樣本中志賀氏菌的活菌數(shù)量（通常以CFU/g或CFU/mL表示）。常用于評估污染程度或消毒效果評價(jià)。
3. 血清學(xué)分型： 利用特異性抗血清確定志賀氏菌的血清群（A群：痢疾志賀菌；B群：福氏志賀菌；C群：鮑氏志賀菌；D群：宋內(nèi)志賀菌）及血清型。這對流行病學(xué)調(diào)查和溯源至關(guān)重要。
4. 生化鑒定： 通過一系列生化反應(yīng)試驗(yàn)（如糖發(fā)酵、吲哚試驗(yàn)、動(dòng)力試驗(yàn)等）來確認(rèn)分離菌株的種屬和生化特性。
5. 分子生物學(xué)檢測： 檢測志賀氏菌的特異性基因（如ipaH, virF, invE等）或毒力基因，提供快速、高特異性的檢測手段，尤其適用于復(fù)雜樣本和快速篩查。

二、常用檢測儀器

志賀氏菌檢測的準(zhǔn)確性高度依賴于精密的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備：

1. 微生物培養(yǎng)設(shè)備：

• 恒溫培養(yǎng)箱： 提供穩(wěn)定的適宜溫度（通常35-37°C）供細(xì)菌生長。
• 厭氧培養(yǎng)箱/罐： 某些步驟或特定菌株可能需要厭氧環(huán)境。
• 生物安全柜： 用于樣本前處理、增菌和分離等操作，保護(hù)人員和環(huán)境安全。

• 顯微鏡： 用于觀察菌落形態(tài)和革蘭氏染色結(jié)果（志賀氏菌為革蘭氏陰性桿菌）。
• 自動(dòng)微生物鑒定及藥敏分析系統(tǒng)： 如VITEK, Phoenix, MicroScan等，可快速進(jìn)行生化鑒定和藥敏試驗(yàn)。
• PCR儀： 進(jìn)行核酸擴(kuò)增，用于分子生物學(xué)檢測（常規(guī)PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等）。
• 電泳儀及凝膠成像系統(tǒng)： 用于PCR產(chǎn)物的分析與確認(rèn)。

• 均質(zhì)器/拍打式均質(zhì)器： 用于固體或半固體樣品的均質(zhì)化。
• 離心機(jī)： 用于樣本濃縮、分離菌體。
• 移液器： 精確量取液體。

三、標(biāo)準(zhǔn)檢測方法

志賀氏菌的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法主要基于培養(yǎng)法，并結(jié)合生化和血清學(xué)鑒定：

1. 前增菌： 為提高檢出率，尤其對于受損細(xì)胞或含量低的樣品，常將樣品接種于非選擇性增菌液（如營養(yǎng)肉湯）中，在適宜溫度下培養(yǎng)一段時(shí)間（通常4-6小時(shí)）。
2. 選擇性增菌： 將前增菌液或直接取樣品勻液轉(zhuǎn)種至選擇性增菌液（如GN增菌肉湯），培養(yǎng)18-24小時(shí)，抑制雜菌，富集志賀氏菌。
3. 分離培養(yǎng)： 將增菌液劃線接種到選擇性瓊脂平板（最常用的是木糖-賴氨酸-去氧膽酸鹽瓊脂平板）和/或志賀氏菌顯色瓊脂平板上。在35-37°C培養(yǎng)24-48小時(shí)后，觀察典型或可疑菌落（如XLD平板上呈紅色或粉紅色、半透明菌落）。
4. 初步篩選與純化： 挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色（應(yīng)為革蘭氏陰性無芽胞桿菌）和氧化酶試驗(yàn)（志賀氏菌為氧化酶陰性），再接種至營養(yǎng)瓊脂斜面純化。
5. 生化鑒定： 使用純化菌株進(jìn)行系列生化試驗(yàn)（如三糖鐵瓊脂、賴氨酸脫羧酶、動(dòng)力試驗(yàn)、葡萄糖產(chǎn)氣、乳糖發(fā)酵等）或使用自動(dòng)化鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定。
6. 血清學(xué)分型： 對生化鑒定符合志賀氏菌特性的菌株，使用多價(jià)和單價(jià)志賀氏菌診斷血清進(jìn)行玻片凝集試驗(yàn)，確定血清群和血清型。
7. 分子生物學(xué)方法 (參考方法或快速篩查)： 提取樣品DNA或增菌液DNA，利用特異性引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增（如針對ipaH基因），通過凝膠電泳或?qū)崟r(shí)熒光PCR進(jìn)行檢測。此方法快速靈敏，但陽性結(jié)果通常仍需培養(yǎng)法確認(rèn)。

整個(gè)操作過程需嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，并設(shè)置陰陽性對照。

四、主要檢測標(biāo)準(zhǔn)

志賀氏菌檢測必須嚴(yán)格依據(jù)國家、行業(yè)或國際標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，確保結(jié)果的可靠性和可比性：

1. 中國國家標(biāo)準(zhǔn) (GB)：

• GB 4789.5-2012 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 志賀氏菌檢驗(yàn)： 這是國內(nèi)食品中志賀氏菌檢測的核心標(biāo)準(zhǔn)，詳細(xì)規(guī)定了食品樣本的采集處理、增菌、分離、生化鑒定、血清學(xué)分型及報(bào)告方法。

• SN/T 1870-2016 出口食品中食源性致病菌檢測方法 實(shí)時(shí)熒光PCR法： 包含志賀氏菌的分子生物學(xué)檢測方法。
• 其他SN標(biāo)準(zhǔn)可能涉及特定產(chǎn)品（如水產(chǎn)品、肉類）中志賀氏菌的檢測。

• ISO 21567:2004 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection of Shigella spp. 提供了食品和飼料中志賀氏菌檢測的水平方法。

• Chapter 6: Shigella 詳細(xì)描述了食品和環(huán)境樣品中志賀氏菌的檢測流程。

檢測實(shí)驗(yàn)室在開展志賀氏菌檢測時(shí)，必須嚴(yán)格遵循所適用標(biāo)準(zhǔn)的最新有效版本，并定期進(jìn)行方法驗(yàn)證和能力驗(yàn)證，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和權(quán)威性。對于陽性結(jié)果，尤其涉及食品或水源污染時(shí)，需及時(shí)上報(bào)相關(guān)部門，啟動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)控制和

檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書

CMA認(rèn)證

檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書

證書編號：241520345370

有效期至：2030年4月15日

CNAS認(rèn)可

實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書

證書編號：CNAS L22006

有效期至：2030年12月1日

ISO認(rèn)證

質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書

證書編號：ISO9001-2024001

有效期至：2027年12月31日

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