單增李斯特氏菌檢測：保障食品安全的必要防線
單核細胞增生李斯特氏菌（*Listeria monocytogenes*），簡稱單增李斯特氏菌，是一種重要的食源性致病菌。它廣泛存在于自然環(huán)境中，如土壤、水體、腐爛植被及動物腸道中。該菌具有耐低溫（能在4°C冰箱溫度下生長繁殖）、耐高鹽、耐干燥等特性，使其在食品加工和儲存環(huán)節(jié)構(gòu)成嚴重威脅。單增李斯特氏菌感染（李斯特菌?。┲饕绊懺袐D、新生兒、老年人及免疫功能低下者，可能導致敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn)甚至死亡，病死率較高。鑒于其嚴重的公共衛(wèi)生風險，世界各國均將其列為食品（尤其是即食食品、乳制品、肉制品、水產(chǎn)品）中重點監(jiān)測和控制的病原菌。因此，建立快速、準確、可靠的單增李斯特氏菌檢測方法，對保證食品安全、預防疾病暴發(fā)、遵守相關法規(guī)標準至關重要。
及時有效的檢測能夠識別污染源，追蹤污染途徑，評估加工環(huán)境的衛(wèi)生狀況（如環(huán)境監(jiān)控），并確保出廠產(chǎn)品的微生物安全性，是食品生產(chǎn)企業(yè)、監(jiān)管機構(gòu)和檢測實驗室不可或缺的核心任務。
檢測項目
針對單增李斯特氏菌的檢測項目主要包括：
- 定性檢測： 檢測樣品中是否存在單增李斯特氏菌（即“檢出”或“未檢出”）。
- 定量檢測： 測定樣品中單增李斯特氏菌的活菌數(shù)量（通常以CFU/g或CFU/mL表示）。
- 分離與鑒定： 從陽性樣品中分離純化單增李斯特氏菌菌落，并確證其身份。
- 毒力基因檢測（可選）： 檢測與致病性相關的關鍵毒力基因（如*hlyA*, *prfA*, *inlA*, *inlB*等），以評估分離株的潛在致病力。
- 血清分型（可選）： 對分離株進行血清型分型，有助于流行病學調(diào)查和溯源。
- 環(huán)境監(jiān)控： 對食品加工廠的環(huán)境（接觸面、地面、空氣、排水口等）進行李斯特菌屬（*Listeria* spp.）及單增李斯特氏菌的監(jiān)控檢測。
檢測儀器
單增李斯特氏菌檢測過程中涉及的關鍵儀器設備包括：
- 生物安全柜： 保證操作人員安全，防止微生物泄露和樣品交叉污染。
- 恒溫培養(yǎng)箱： 用于樣品增菌培養(yǎng)（通常在30°C 或 37°C）及選擇性培養(yǎng)基上菌落的培養(yǎng)（通常在30°C 或 35°C）。
- 冰箱 (4°C) 和冷凍柜 (-20°C, -70°C): 用于樣品、培養(yǎng)基和試劑的儲存。
- 均質(zhì)器/拍擊式均質(zhì)袋： 用于固體或半固體樣品的無菌均質(zhì)處理。
- 離心機： 用于濃縮樣品或沉淀細菌細胞。
- 天平： 精確稱量樣品。
- pH計： 調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值。
- 高壓蒸汽滅菌鍋： 對培養(yǎng)基、稀釋液、實驗用具進行滅菌。
- 水浴鍋/干式恒溫器： 熔化或保溫培養(yǎng)基。
- 微生物定量接種環(huán)/移液器：
- 菌落計數(shù)器： 用于平板計數(shù)。
- 顯微鏡： 觀察菌落形態(tài)和染色特征（如革蘭氏染色）。
- 生化鑒定系統(tǒng)： 自動化或半自動化的微量生化反應裝置（如API LISTERIA, VITEK）。
- PCR儀： 用于分子生物學方法（PCR, Real-time PCR）的核酸擴增。
- 電泳儀/凝膠成像系統(tǒng)： 用于PCR產(chǎn)物的分析和確認。
- 酶標儀/洗板機： 用于基于免疫學原理的檢測方法（如ELISA）。
- 快速檢測設備平臺： 兼容特定品牌快速檢測試劑盒（如PCR儀、熒光檢測儀、側(cè)向流讀條儀）。
- 全自動或半自動微生物檢測系統(tǒng)： 集增菌、檢測、鑒定于一體的高端設備（如VIDAS, BAX System）。
檢測方法
單增李斯特氏菌的檢測方法主要分為三大類：
- 傳統(tǒng)培養(yǎng)法（“金標準”）
- 原理： 基于細菌在選擇性培養(yǎng)基上的生長特性和生化反應進行分離鑒定。
- 流程：
- 前增菌： 將樣品接種到非選擇性或輕度選擇性肉湯（如FB或HLB肉湯）中，使受損細胞復蘇。30°C 培養(yǎng) 4-24小時。
- 選擇性增菌： 將前增菌液轉(zhuǎn)種到選擇性更強的肉湯（如Fraser肉湯，含選擇性抑制劑）中。30°C 或 35°C 培養(yǎng) 24-48小時。Fraser肉湯變黑（因七葉苷水解）提示李斯特菌屬可能生長。
- 選擇性分離： 取增菌液劃線接種于選擇性顯色平板（如科瑪嘉李斯特菌顯色培養(yǎng)基CHROMagar? Listeria, PALCAM瓊脂, Oxford瓊脂）。30°C 或 35°C 培養(yǎng) 24-48小時。單增李斯特氏菌在顯色平板上通常呈現(xiàn)特征性顏色（如藍色菌落帶白色暈圈），并具有典型的形態(tài)（小、灰白色、濕潤、有狹窄β-溶血環(huán)）。
- 純化與初步鑒定： 挑取可疑菌落進行純培養(yǎng)（如TSA-YE平板），進行革蘭氏染色（G+短桿菌）、觸酶試驗（陽性）、動力試驗（25-30°C 有動力，呈傘狀生長；37°C 動力微弱或無）。
- 生化確認： 進行糖發(fā)酵（如鼠李糖、木糖發(fā)酵）、CAMP試驗（與金黃色葡萄球菌/馬紅球菌協(xié)同溶血）、溶血試驗等關鍵生化試驗，或使用商品化生化鑒定條/系統(tǒng)進行鑒定。
- 優(yōu)點： 結(jié)果準確，可分離菌株用于分型、藥敏等后續(xù)研究，成本相對較低。
- 缺點： 耗時長（通常需要4-7天），步驟繁瑣，工作量大。
- 分子生物學方法（快速、高特異性）
- 原理： 通過PCR（聚合酶鏈式反應）或Real-time PCR（實時熒光定量PCR）技術特異性擴增單增李斯特氏菌的靶基因片段（如*hlyA*, *prfA*, *iap*等）。
- 流程：
- 樣品處理與DNA提?。?/strong> 從增菌液或樣品均質(zhì)液中提取細菌DNA。
- PCR擴增： 使用特異性引物和探針進行目標基因的擴增。
- 結(jié)果判讀：
- 常規(guī)PCR：通過瓊脂糖凝膠電泳觀察是否有預期大小的擴增條帶。
- Real-time PCR：通過儀器檢測熒光信號，根據(jù)Ct值或擴增曲線判斷結(jié)果（陽性/陰性），并可實現(xiàn)定量（需標準曲線）。
- 優(yōu)點： 特異性高，靈敏度高，檢測速度快（1-3天，部分試劑盒可在增菌后數(shù)小時內(nèi)出結(jié)果），可自動化。
- 缺點： 設備成本高，對操作人員技術要求高，檢測死菌可能導致假陽性（需結(jié)合培養(yǎng)
CMA認證
檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認證
質(zhì)量管理體系認證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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