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過(guò)敏原成分(花生成分)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-15 17:19:29 更新時(shí)間：2025-07-14 17:19:29

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

過(guò)敏原成分(花生成分)檢測(cè)

花生過(guò)敏是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的食物過(guò)敏之一，其反應(yīng)可能從輕微的皮膚瘙癢、紅腫到嚴(yán)重的過(guò)敏性休克，甚至可能危及生命。因此，準(zhǔn)確檢測(cè)食品、化妝品、藥品甚至環(huán)境樣本中的花生成分（特別是花生蛋白）至關(guān)重要。這不僅是為了保護(hù)花生過(guò)敏人群的安全，也是食品生產(chǎn)企業(yè)、監(jiān)管機(jī)構(gòu)履行法規(guī)責(zé)任（如明確標(biāo)注過(guò)敏原信息）的基礎(chǔ)?；ㄉ^(guò)敏原檢測(cè)的核心目標(biāo)是識(shí)別極微量的花生特異性蛋白或其DNA片段，確保產(chǎn)品標(biāo)簽信息的準(zhǔn)確性，防止意外攝入導(dǎo)致的健康風(fēng)險(xiǎn)。

檢測(cè)項(xiàng)目

花生過(guò)敏原成分檢測(cè)的主要對(duì)象是花生中特有的蛋白質(zhì)，它們是引發(fā)過(guò)敏反應(yīng)的關(guān)鍵物質(zhì)。常見(jiàn)的特異性檢測(cè)項(xiàng)目包括：

1. Ara h 1, Ara h 2, Ara h 3, Ara h 6： 這是花生中最主要、致敏性最強(qiáng)的幾種蛋白質(zhì)。它們是檢測(cè)的重點(diǎn)靶標(biāo)，尤其是Ara h 2因其高致敏性和穩(wěn)定性常被作為關(guān)鍵標(biāo)記物。

2. 總花生蛋白： 有時(shí)檢測(cè)項(xiàng)目也會(huì)涵蓋所有花生成分相關(guān)的蛋白總量，以全面評(píng)估污染或摻入的風(fēng)險(xiǎn)。

3. 花生特異性DNA片段： 雖然DNA本身不引起過(guò)敏，但檢測(cè)花生特異性的DNA片段（如ITS, rDNA等）可以作為花生存在的間接證據(jù)，尤其在蛋白質(zhì)可能因加工而變性降解的情況下。

檢測(cè)儀器

進(jìn)行花生過(guò)敏原成分檢測(cè)需要依賴精密的實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備，主要包括：

1. 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定儀： 即ELISA讀數(shù)儀（酶標(biāo)儀），是進(jìn)行免疫學(xué)方法（如ELISA）檢測(cè)的核心設(shè)備，用于讀取反應(yīng)產(chǎn)生的比色或熒光信號(hào)。

2. 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀： 用于基于DNA的分子生物學(xué)檢測(cè)方法（qPCR/PCR），能夠特異性擴(kuò)增并定量花生DNA片段。

3. 高效液相色譜儀： 常與串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS），用于高靈敏度、高特異性的蛋白質(zhì)組學(xué)分析，直接鑒定和定量特定的花生過(guò)敏原蛋白（如Ara h 1, Ara h 2等）。

4. 蛋白質(zhì)印跡系統(tǒng)： 包括電泳儀、轉(zhuǎn)印儀和成像系統(tǒng)，用于Western Blot分析，確認(rèn)特定蛋白條帶的存在。

5. 樣品前處理設(shè)備： 如均質(zhì)器、離心機(jī)、恒溫?fù)u床、微量移液器等，用于樣品的粉碎、提取、純化等步驟。

檢測(cè)方法

檢測(cè)花生成分的方法主要分為三大類，各有優(yōu)缺點(diǎn)和應(yīng)用場(chǎng)景：

1. 免疫學(xué)方法： * 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)： 是目前應(yīng)用最廣泛的快速篩查方法。其原理是利用特異性抗體（抗花生蛋白抗體）與樣品中的花生抗原結(jié)合，再通過(guò)酶促顯色反應(yīng)進(jìn)行定量或半定量檢測(cè)。ELISA法操作相對(duì)簡(jiǎn)便、成本較低、通量高，但對(duì)樣品基質(zhì)效應(yīng)敏感，且不同試劑盒的抗體針對(duì)的蛋白靶標(biāo)和靈敏度可能差異較大。 * 側(cè)向流動(dòng)免疫層析試紙條： 即快速檢測(cè)試紙條（LFD/FIA），常用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩查或生產(chǎn)線上實(shí)時(shí)監(jiān)控，能在幾分鐘內(nèi)給出定性（有/無(wú)）或半定量結(jié)果，靈敏度通常低于ELISA。 * Western Blot： 用于確證特定花生蛋白（如Ara h 2）的存在，特異性高，但操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)，通常作為確證方法。

2. 分子生物學(xué)方法： * 實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)： 檢測(cè)花生特有的DNA片段（如基因ITS區(qū)）。該方法特異性好，靈敏度極高（可檢測(cè)pg級(jí)DNA），不受蛋白質(zhì)變性的影響（高溫、高壓加工后DNA仍可能檢出），但不能區(qū)分DNA來(lái)源于生花生還是熟花生，且無(wú)法直接量化蛋白質(zhì)含量（過(guò)敏原的量）。結(jié)果易受樣品中PCR抑制物的干擾。

3. 質(zhì)譜法： * 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜： 通過(guò)檢測(cè)花生過(guò)敏原蛋白的特征性肽段來(lái)定性和定量。LC-MS/MS是當(dāng)前最先進(jìn)、特異性最強(qiáng)的方法，能夠直接鑒定和定量特定的過(guò)敏原蛋白（如區(qū)分Ara h 1和Ara h 6），不受抗體交叉反應(yīng)限制，對(duì)復(fù)雜基質(zhì)適應(yīng)性強(qiáng)，靈敏度高（可達(dá)ppm甚至ppb級(jí)）。但設(shè)備昂貴、操作復(fù)雜、技術(shù)要求高、分析時(shí)間長(zhǎng)、成本高，通常用于確證、研發(fā)或法規(guī)仲裁。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

為了確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可比性和可靠性，國(guó)內(nèi)外制定了一系列相關(guān)的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)，為實(shí)驗(yàn)室提供操作規(guī)范和質(zhì)量控制依據(jù)。常見(jiàn)的標(biāo)準(zhǔn)包括：

1. 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)： * ISO 21468:2020 《食物鏈微生物學(xué) - 過(guò)敏原管理中用于檢測(cè)花生、榛子、杏仁、腰果、開(kāi)心果和山核桃的實(shí)時(shí)熒光PCR方法》。 * AOAC Official Methods： 如AOAC 2014.05（花生過(guò)敏原的LC-MS/MS定量）等。

2. 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)： * 中國(guó)： * GB 5009.259-2016 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中致敏原成分的測(cè)定實(shí)時(shí)熒光PCR法》：規(guī)定了使用qPCR檢測(cè)食品中花生等過(guò)敏原DNA成分的方法。 * GB/T 38164-2019 《常見(jiàn)過(guò)敏蛋白的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》：涵蓋了花生等常見(jiàn)食物過(guò)敏原蛋白的LC-MS/MS檢測(cè)方法。 * 關(guān)于食品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)的要求主要在GB 7718-2011 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 預(yù)包裝食品標(biāo)簽通則》及其問(wèn)答中規(guī)定。 * 歐盟： 歐盟法規(guī)(EU) No 1169/2011規(guī)定了過(guò)敏原標(biāo)簽要求，檢測(cè)方法常參考EN 15634系列標(biāo)準(zhǔn)（食品 - 用分子生物學(xué)方法檢測(cè)食物過(guò)敏原）等。 * 美國(guó)： FDA有相關(guān)的過(guò)敏原管理指南，檢測(cè)方法多參考AOAC標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)驗(yàn)證方法。

3. 行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)/指南： * 許多試劑盒生產(chǎn)商會(huì)提供經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的內(nèi)部方法或符合特定標(biāo)準(zhǔn)（如AOAC-RI）的檢測(cè)方案。 * 國(guó)際生命科學(xué)學(xué)會(huì)等組織也會(huì)發(fā)布過(guò)敏原檢測(cè)和管理的最佳實(shí)踐指南。

在選擇檢測(cè)方法和評(píng)價(jià)結(jié)果時(shí)，應(yīng)充分考慮方法的適用性（樣品類型、加工方式）、檢測(cè)限、特異性、準(zhǔn)確性、精密度以及所依據(jù)的標(biāo)準(zhǔn)，并參考相關(guān)法規(guī)的限量要求或標(biāo)簽標(biāo)識(shí)閾值。