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3.1 實驗材料
3.1.1 實驗動物
C57BL/6購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司 SCXK(京）2016-0006。超排用雌鼠數(shù)量10-15只，年齡3周齡，交配傳代用野生型鼠為成年8-10周齡小鼠。實驗中基因工程小鼠由本實驗室繁殖產(chǎn)生。實驗中涉及動物的操作程序已獲得中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實驗動物研究所實驗動物使用與管理委員會的批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號為ZLF18004.
3.1.2實驗儀器
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儀器及耗材 |
生產(chǎn)廠商 |
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NanoZoomer S60數(shù)字病理切片掃描儀 |
日本濱松光子學(xué)株式會社 |
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激光共聚焦掃描顯微鏡 |
Leica |
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流式細胞儀 |
BD |
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透射電子顯微鏡 |
JEOL |
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顯微注射儀 |
Nikon |
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光學(xué)顯微鏡 |
Nikon |
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化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng) |
BIO-RAD |
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PCR儀 |
BIO-RAD |
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Realtime PCR儀 |
ABI |
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冰凍切片機 |
Leica |
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電泳儀 |
BIO-RAD |
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電泳槽 |
Tanon |
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數(shù)碼凝膠圖像處理系統(tǒng) |
Tanon |
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組織勻漿機 |
POLYTRON |
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恒溫培養(yǎng)箱
溫控振蕩箱 |
Incucell
TAITEC |
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離心機 |
Eppendorf |
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搖床 |
SCILOGEX |
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塑料薄膜封口機 |
德清拜杰有限公司 |
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電動鼓風(fēng)干燥箱 |
天津市泰斯特儀器有限公司 |
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電子稱量器（量程0.5g-620g） |
奧豪斯儀器（常州）有限公司 |
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電子稱量器（量程0.1mg-220g） |
Sartorius |
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4℃冰箱 |
海爾集團 |
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-80℃冰箱 |
SANYO |
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-20℃冰箱 |
SANYO |
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渦旋振蕩器 |
上海滬西分析儀器廠 |
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移液器 |
Eppendorf |
3.1.3實驗試劑
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試劑 |
生產(chǎn)廠商 |
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體外轉(zhuǎn)錄用試劑盒 |
Ambion |
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Taq DNA聚合酶 |
TaKaRa |
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T7 轉(zhuǎn)錄試劑盒 |
Invitrogen |
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T4 DNA裂連接 |
TaKaRa |
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膠回收試劑盒 |
Qiagen |
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質(zhì)粒提取試劑盒 |
Axygen |
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Trizol試劑 |
Invitrogen |
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逆轉(zhuǎn)錄試劑盒
DNA提取試劑盒 |
Invitrogen
北京全式金生物科技有限公司 |
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GADPH |
Santa Cruz Biotechnology |
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NC膜 |
Millipore |
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化學(xué)發(fā)光液 |
Immuno Cruz |
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蛋白質(zhì)分子量標(biāo)記物 |
Takara |
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蛋白酶抑制劑 |
羅氏 |
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組織裂解液 |
Thermo |
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麗春紅 |
Beyotime |
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BCA試劑盒 |
Beyotime |
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Western blot 洗液（10×） |
Beyotime |
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30%Acr-Bis |
Beyotime |
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SDS-PAGE電泳液 |
Beyotime |
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Western blot轉(zhuǎn)膜液（粉劑） |
Beyotime |
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TEMED |
Beyotime |
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過硫酸銨 |
Beyotime |
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1.5 M Tris·HCl（pH=8.8）緩沖液 |
Beyotime |
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1 M Tris·HCl（pH=6.8）緩沖液 |
Beyotime |
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瓊脂 |
BD公司 |
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異丙醇 |
北京化工廠 |
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脫脂奶粉 |
內(nèi)蒙古伊利實業(yè)集團股份有限公司 |
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Anti-Flag |
sc-166384 |
3.1.4模型構(gòu)建流程
利用CRISPR/Cas9技術(shù)制備IFITM6敲除小鼠。選擇敲除第二外顯子，來構(gòu)建IFITM6敲除小鼠 (B6. IFITM6 (tm)-GC/ILAS)。該基因敲除的雜合子小鼠，相互雜交可以獲得該基因敲除的純合子小鼠，使用PCR方法進行基因型鑒定。
3.1.5 IFITM6敲除小鼠的建立
3.1.5.1 IFITM6敲除小鼠模型的建立
（1）設(shè)計方案 |
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