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DNMT1心肌特異性基因敲除SD大鼠模型

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-25 08:49:03 更新時(shí)間：2025-11-04 08:54:44

點(diǎn)擊：61

作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

資源中文名稱

DNMT1心肌特異性基因敲除SD大鼠

資源英文名稱

DNMT1 cardiac specific knockout SD rat

疾病概述

心力衰竭，簡(jiǎn)稱心衰，是指由于心臟收縮和（或）舒張功能障礙，無(wú)法將靜脈回心血量充分排出心臟，導(dǎo)致靜脈系統(tǒng)血液淤積，動(dòng)脈系統(tǒng)灌注不足，從而引發(fā)心臟循環(huán)障礙癥候群，心衰并不是一個(gè)獨(dú)立的疾病，而是所有心血管疾病發(fā)展的終末階段。近年來(lái)，隨著我國(guó)社會(huì)老齡化和高血壓，冠心病等心血管疾病發(fā)病率的增加，使得心衰呈現(xiàn)高發(fā)病率，高致殘率和高死亡率的特點(diǎn)，《2018中國(guó)心力衰竭診斷和治療指南》中報(bào)道我國(guó)心衰患病率為0.9%，有1000萬(wàn)左右的心衰患者。幾乎所有的心血管疾病最終都會(huì)導(dǎo)致心衰的發(fā)生，而在基礎(chǔ)性心臟病的基礎(chǔ)上，一些因素亦可誘發(fā)心衰的發(fā)生，常見(jiàn)誘因包括，感染，嚴(yán)重心律失常，心臟負(fù)荷增大，藥物中毒（如洋地黃）等等。心衰在臨床上可分為急性心衰和慢性心衰。臨床表現(xiàn)，包括呼吸困難，運(yùn)動(dòng)耐力下降，心室腔增大，心臟功能下降（LVEF<40-50%），心臟順應(yīng)性降低，心室腔內(nèi)淤血，肺循環(huán)及體循環(huán)淤血。臨床檢查手段，包括超聲影像分析，心電圖，心衰標(biāo)志物（B型利鈉肽（BNP），N末端B型利鈉肽原（NT-proBNP））心肌壞死標(biāo)志物（心肌肌鈣蛋白T（cTnT）及心肌肌鈣蛋白I（cTnI））。臨床治療方法，包括強(qiáng)心（米力農(nóng)，地高辛），利尿（速尿），抗感染，改善心肌重構(gòu)（卡維地洛）及心臟移植。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物背景信息

SD大鼠

模型制作方法

3.1 實(shí)驗(yàn)材料

3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司【SCXK（京）2012-001】。實(shí)驗(yàn)中涉及動(dòng)物的操作程序已獲得中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用與管理委員會(huì)的批準(zhǔn)，批準(zhǔn)號(hào)為ZLF18003.

3.1.2實(shí)驗(yàn)儀器

儀器及耗材	生產(chǎn)廠商
NanoZoomer S60數(shù)字病理切片掃描儀	日本濱松光子學(xué)株式會(huì)社
Vevo770小動(dòng)物超聲影像系統(tǒng)	VisualSonics
激光共聚焦掃描顯微鏡	Leica
透射電子顯微鏡	JEOL
顯微注射儀	Nikon
光學(xué)顯微鏡	Nikon
化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)	BIO-RAD
PCR儀	BIO-RAD
組織脫水機(jī)	Leica
石蠟切片機(jī)	Leica
石蠟包埋機(jī)	Leica
冰凍切片機(jī)	Leica
電泳儀	BIO-RAD
電泳槽	Tanon
數(shù)碼凝膠圖像處理系統(tǒng)	Tanon
組織勻漿機(jī)	POLYTRON
恒溫培養(yǎng)箱溫控振蕩箱	Incucell TAITEC
離心機(jī)	Eppendorf
搖床	SCILOGEX
塑料薄膜封口機(jī)	德清拜杰有限公司
電動(dòng)鼓風(fēng)干燥箱	天津市泰斯特儀器有限公司
電子稱量器（量程0.5g-620g）	奧豪斯儀器（常州）有限公司
電子稱量器（量程0.1mg-220g）	Sartorius
4℃冰箱	海爾集團(tuán)
-80℃冰箱	SANYO
-20℃冰箱	SANYO
渦旋振蕩器	上海滬西分析儀器廠
移液器	Eppendorf

3.1.3實(shí)驗(yàn)試劑

試劑	生產(chǎn)廠商
體外轉(zhuǎn)錄用試劑盒	Ambion
Taq DNA聚合酶	TaKaRa
T7 轉(zhuǎn)錄試劑盒	Invitrogen
T4 DNA裂連接	TaKaRa
膠回收試劑盒	Qiagen
質(zhì)粒提取試劑盒	Axygen
Trizol試劑	Invitrogen
逆轉(zhuǎn)錄試劑盒 DNA提取試劑盒	Invitrogen 北京全式金生物科技有限公司
DNMT1（MA5-16169）抗體	Invitrogen
GADPH	Santa Cruz Biotechnology
NC膜	Millipore
化學(xué)發(fā)光液	Immuno Cruz
蛋白質(zhì)分子量標(biāo)記物	Takara
蛋白酶抑制劑	羅氏
組織裂解液	Thermo
麗春紅	Beyotime
BCA試劑盒	Beyotime
Western blot 洗液（10×）	Beyotime
30%Acr-Bis	Beyotime
SDS-PAGE電泳液	Beyotime
Western blot轉(zhuǎn)膜液（粉劑）	Beyotime
TEMED	Beyotime
過(guò)硫酸銨	Beyotime
1.5 M Tris·HCl（pH=8.8）緩沖液	Beyotime
1 M Tris·HCl（pH=6.8）緩沖液	Beyotime
瓊脂	BD公司
異丙醇	北京化工廠
脫脂奶粉	內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司

3.1.4模型構(gòu)建流程

利用Cre/loxP重組系統(tǒng)的原理，進(jìn)行條件性敲除（Conditional knockout，CKO），制備心肌組織特異性DNMT1敲除大鼠。在DNMT1基因第1外顯子兩端插入兩個(gè)loxP位點(diǎn)來(lái)構(gòu)建DNMT1^flox/+大鼠，使其與αMHC-Cre大鼠進(jìn)行雜交，經(jīng)兩輪雜交最終獲得DNMT1^flox/flox/MHC-Cre大鼠，并使用PCR方法進(jìn)行基因型鑒定，使用Western blot技術(shù)進(jìn)行敲除效率的鑒定。