C57BL/6J小鼠。

1.實(shí)驗(yàn)小鼠 SPF級(jí)雄性C57小鼠35只，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供〔SCXK（京）2014-0004〕。飼養(yǎng)于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所屏障環(huán)境動(dòng)物房〔SYXK（京）2015-0035〕，實(shí)驗(yàn)方案通過醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理和使用委員會(huì)（IACUC）審批，IACUC號(hào)為：MAM16003。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)經(jīng)過福利倫理審查，符合3R原則。

2. 小鼠分組和給藥 白消安（busulfan）購自于sigma。白消安粉末由DMSO配置為80mg/ml作為母液貯存，使用時(shí)用PBS稀釋為所需濃度。小鼠分為對(duì)照組，低劑量給藥組（20mg/kg）和高劑量給藥組(40mg/kg)，每組5只。腹腔注射，高劑量給藥組分兩天給藥，每天給予20mg/kg。對(duì)照組小鼠給予等體積含5%DMSO的PBS作為對(duì)照。

3. 造血干細(xì)胞和造血祖細(xì)胞比例測定 分離的骨髓細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度到1´ 10⁷/ml，每只小鼠取100ul細(xì)胞用于后續(xù)染色。按體積比1:50加入biotin標(biāo)記的混合一抗抗體CD4，CD8， B220，Ter119，Gr1，CD11b，均購自BD bioscience，4℃條件下孵育30min，PBS洗滌一次，離心條件為1400r/min，5min。離心后棄去上清，保持100ul體積，加入混合抗體Streptavidin（percp標(biāo)記），scal-1（PE標(biāo)記），ckit（APC標(biāo)記），CD34（FITC標(biāo)記），以上抗體均購自BD bioscience。4℃條件下孵育1h。之后PBS洗滌兩次，離心條件如上。BD流式細(xì)胞儀（FACS AriaTMII，BD）檢測造血祖細(xì)胞（Lin-c-kit+ Sca1-or LKS- cells），造血干細(xì)胞（Lin- c-kit+ Sca1+ or LKS+ cells），長期造血干細(xì)胞（CD34-Lin-c-kit+ Sca1+）在骨髓中所占的比例。