一、結(jié)構(gòu)確證
	- 
	分子量測定 
		- 方法:MALDI-TOF質(zhì)譜、ESI質(zhì)譜
- 意義:驗(yàn)證目標(biāo)多肽的分子量是否與理論值一致,判斷是否存在翻譯后修飾或降解。
- 誤差范圍:通常允許±1 Da誤差(高分辨質(zhì)譜可達(dá)±0.01 Da)。
 
- 
	氨基酸序列分析 
		- Edman降解:N端測序,適用于短肽(<50個氨基酸)。
- 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS):通過肽段碎片離子匹配數(shù)據(jù)庫,解析全長序列。
- 基因測序驗(yàn)證:對于重組多肽,需與表達(dá)載體序列比對。
 
- 
	二硫鍵定位 
		- 還原/非還原電泳:對比SDS-PAGE遷移率差異。
- 質(zhì)譜法:通過酶解后肽段分子量差異判斷二硫鍵連接位點(diǎn)。
 
二、純度與雜質(zhì)分析
	- 
	純度檢測 
		- HPLC:反相色譜法(C18柱)為主,檢測主峰面積占比(通常要求>95%)。
- 毛細(xì)管電泳(CE):適用于帶電荷多肽的純度評估。
- SDS-PAGE:檢測高分子量雜質(zhì)(如聚合體)。
 
- 
	雜質(zhì)鑒定 
		- 工藝相關(guān)雜質(zhì):宿主細(xì)胞蛋白殘留(ELISA法)、內(nèi)毒素(鱟試劑法)。
- 降解產(chǎn)物:氧化(Met、Trp)、脫酰胺(Asn、Gln)、水解片段分析。
- 手性雜質(zhì):手性HPLC檢測D-型氨基酸污染。
 
三、理化性質(zhì)檢測
	- 
	等電點(diǎn)測定 
		- 方法:等電聚焦電泳(IEF)或毛細(xì)管等電聚焦(cIEF)。
- 應(yīng)用:指導(dǎo)純化工藝,預(yù)測多肽在不同pH下的溶解性。
 
- 
	疏水性分析 
		- 反相色譜保留時間:間接反映疏水性強(qiáng)弱。
- 熒光探針法:如ANS結(jié)合實(shí)驗(yàn)測定表面疏水區(qū)域。
 
- 
	溶解性與穩(wěn)定性 
		- 溶解度測試:測定臨界聚集濃度(CAC)。
- 加速穩(wěn)定性試驗(yàn):高溫(40℃)、光照、不同pH條件下考察降解速率。
 
四、生物學(xué)活性檢測
	- 
	體外活性 
		- 受體結(jié)合實(shí)驗(yàn):SPR表面等離子共振技術(shù)測定KD值。
- 酶活性抑制/激活:如ACE抑制肽的IC50測定。
 
- 
	細(xì)胞水平活性 
		- 報告基因法:檢測信號通路激活效率。
- 增殖/凋亡實(shí)驗(yàn):MTT法、流式細(xì)胞術(shù)分析。
 
- 
	體內(nèi)活性 
		- 動物模型驗(yàn)證:如降壓肽的大鼠血壓監(jiān)測。
 
五、含量定量分析
	- 
	絕對定量 
		- 氨基酸分析法:酸水解后HPLC測定各氨基酸摩爾比。
- UV法:利用Trp/Tyr的280 nm吸光值(需校正消光系數(shù))。
 
- 
	相對定量 
		- BCA/Bradford法:快速估測溶液濃度。
- 熒光標(biāo)記定量:如FITC標(biāo)記多肽的熒光分光光度法。
 
六、微生物與安全性檢測
	- 無菌試驗(yàn):膜過濾法培養(yǎng)14天,符合藥典要求。
- 內(nèi)毒素檢測:鱟試劑法(限值通常<0.1 EU/mg)。
- 過敏原篩查:ELISA法檢測常見過敏原交叉污染。
七、穩(wěn)定性研究
	- 強(qiáng)制降解試驗(yàn):酸/堿/氧化/高溫/光照條件下的降解產(chǎn)物分析。
- 長期穩(wěn)定性:實(shí)時監(jiān)測儲存條件(如2-8℃、-20℃)下的效價變化。
- 制劑相容性:考察輔料對多肽穩(wěn)定性的影響。
八、新興檢測技術(shù)
	- 氫氘交換質(zhì)譜(HDX-MS):解析多肽構(gòu)象動態(tài)變化。
- 圓二色譜(CD)與核磁共振(NMR):研究二級/三級結(jié)構(gòu)。
- 單分子成像技術(shù):AFM、冷凍電鏡觀察多肽聚集狀態(tài)。
結(jié)論
多肽類樣品的檢測需構(gòu)建“結(jié)構(gòu)-功能-質(zhì)量”三位一體的評價體系。隨著質(zhì)譜、微流控芯片等技術(shù)的發(fā)展,檢測正向高通量、高靈敏、微型化方向演進(jìn)。嚴(yán)格的質(zhì)量控制是保證多肽藥物療效與安全性的核心,尤其在基因治療肽、抗菌肽等創(chuàng)新領(lǐng)域,精準(zhǔn)分析技術(shù)將發(fā)揮更關(guān)鍵作用。
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                    CMA認(rèn)證
                    檢驗(yàn)檢測機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書
                    
                        
                        證書編號:241520345370
                    
                  
                    
                        
                        有效期至:2030年4月15日
                    
                 
             
            
            
                
                
                    CNAS認(rèn)可
                    實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書
                    
                        
                        證書編號:CNAS L22006
                    
                
                    
                        
                        有效期至:2030年12月1日
                    
                 
             
            
            
                
                
                    ISO認(rèn)證
                    質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書
                    
                        
                        證書編號:ISO9001-2024001
                    
                   
                    
                        
                        有效期至:2027年12月31日