一、檢測目的與適用場景
生物素（Biotin，維生素B7/H）是人體必需的水溶性維生素，檢測其含量用于：
- 臨床診斷：評估生物素缺乏癥（如脫發(fā)、皮炎、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀）。
- 營養(yǎng)補充品質(zhì)量控制：驗證保健品、食品中的生物素含量。
- 實驗室研究：生物素-親和素系統(tǒng)在分子生物學(xué)中的應(yīng)用（如ELISA、Western Blot標記）。
核心依據(jù)標準：
- 中國標準：
- GB 5009.259-2023《食品中生物素的測定》
- WS/T 404-2023《臨床生物化學(xué)檢驗常規(guī)項目分析質(zhì)量指標》
- 國際標準：
- AOAC 2012.13（食品與保健品中生物素的HPLC檢測方法）
- CLSI EP17-A2（臨床實驗室檢測方法驗證指南）
- USP 40-NF 35（美國藥典 生物素檢測方法）
二、核心檢測方法及流程
1. 高效液相色譜法（HPLC）
適用場景：食品、保健品、藥品中生物素的定量分析。 步驟：
- 樣品前處理：
- 食品/藥品：研磨后，用磷酸鹽緩沖液（pH 6.8）提取，離心過濾。
- 血清/血漿：乙腈沉淀蛋白，離心取上清液。
- 色譜條件：
- 色譜柱：C18反相柱（250mm×4.6mm，5μm）。
- 流動相：甲醇-磷酸鹽緩沖液（20:80，v/v），流速1.0mL/min。
- 檢測器：紫外檢測器（波長210nm）。
- 定量分析：外標法或內(nèi)標法（如添加維生素B5作內(nèi)標）。
合格標準：
- 食品/保健品：生物素含量≥標稱值的80%（GB 5009.259）。
- 臨床血清參考值：0.5-5.0 ng/mL（成人正常范圍）。
2. 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）
適用場景：臨床血清/尿液樣本快速檢測。 步驟：
- 樣本稀釋：血清1:10稀釋，尿液直接檢測。
- 操作流程：
- 包被生物素抗體→加樣本→加酶標二抗→顯色（TMB底物）→450nm測吸光度。
- 標準曲線：使用0-50 ng/mL生物素標準品繪制。
注意事項：
- 交叉反應(yīng)：避免樣本中含高濃度鏈霉親和素或抗生素（如鏈霉素）。
- 干擾物質(zhì)：溶血、脂血樣本需預(yù)處理（離心過濾）。
3. 微生物法（AOAC 2012.13）
適用場景：復(fù)雜基質(zhì)（如嬰兒配方奶粉）中生物素的定量。 原理：利用乳酸菌（Lactobacillus plantarum）對生物素的依賴性生長。 步驟：
- 樣品水解：酸水解（0.1N HCl，121℃ 30分鐘）釋放結(jié)合態(tài)生物素。
- 菌株培養(yǎng)：接種菌液至含樣品的培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24小時。
- 比濁法測定：600nm測菌液濁度，與標準曲線對比計算含量。
優(yōu)點：靈敏度高（檢測限0.1 ng/g），適合低含量樣本。
三、檢測設(shè)備與試劑
| 設(shè)備/試劑 |
功能要求 |
示例型號/品牌 |
| HPLC系統(tǒng) |
紫外檢測器，自動進樣器 |
Agilent 1260、Shimadzu LC-20 |
| ELISA試劑盒 |
檢測范圍0.1-50 ng/mL，靈敏度≤0.05 ng/mL |
R&D Systems Biotin ELISA Kit |
| 微生物菌株 |
Lactobacillus plantarum ATCC 8014 |
ATCC標準菌株 |
| 標準品 |
生物素（純度≥98%） |
Sigma-Aldrich B4639 |
四、常見問題與解決方案
| 問題 |
原因分析 |
解決方案 |
| HPLC峰拖尾 |
色譜柱污染或流動相pH不當 |
沖洗色譜柱，調(diào)節(jié)流動相pH至6.8±0.2 |
| ELISA假陽性 |
樣本中內(nèi)源性生物素干擾 |
使用鏈霉親和素預(yù)吸附處理樣本 |
| 微生物法結(jié)果偏低 |
水解不徹底或菌株活性不足 |
延長酸水解時間，驗證菌株活力（OD≥0.8） |
| 臨床樣本穩(wěn)定性差 |
生物素光敏感或反復(fù)凍融 |
避光保存，分裝凍存（-80℃），避免反復(fù)凍融 |
五、臨床與生產(chǎn)建議
- 臨床診斷：
- 生物素缺乏癥：血清生物素＜0.2 ng/mL時需補充（劑量30-100 μg/天）。
- 藥物干擾：長期使用抗癲癇藥（如丙戊酸）可能降低生物素水平。
- 保健品生產(chǎn)：
- 質(zhì)量控制：每批次檢測生物素含量（HPLC法），偏差控制在±10%內(nèi)。
- 配方設(shè)計：生物素與鋅、維生素B5協(xié)同增強吸收（如護發(fā)類產(chǎn)品）。
- 實驗室研究：
- 標記優(yōu)化：生物素化抗體建議摩爾比1:3（抗體:生物素），避免過度標記導(dǎo)致聚集。
通過系統(tǒng)性檢測，生物素的含量與活性可精準評估，滿足臨床診斷、食品監(jiān)管及科研應(yīng)用需求。建議優(yōu)先選擇HPLC法（高精度）或ELISA法（快速篩查），并根據(jù)樣本類型優(yōu)化前處理流程，確保結(jié)果可靠性。
CMA認證
檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認證
質(zhì)量管理體系認證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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