您現(xiàn)在的位置：首頁 > 檢測(cè)項(xiàng)目 > 其他檢測(cè)

氨基酸檢測(cè)

1對(duì)1客服專屬服務(wù)，免費(fèi)制定檢測(cè)方案，15分鐘極速響應(yīng)

可選形式：電子報(bào)告紙質(zhì)報(bào)告

可選語言：中文報(bào)告英文報(bào)告

發(fā)布時(shí)間：2025-03-10 09:27:03 更新時(shí)間：2025-03-09 09:29:37

點(diǎn)擊：0

作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

氨基酸檢測(cè)是食品、醫(yī)藥、生物研究等領(lǐng)域的關(guān)鍵分析項(xiàng)目，其精準(zhǔn)測(cè)定對(duì)營養(yǎng)評(píng)估、疾病診斷及工藝優(yōu)化至關(guān)重要。本文系統(tǒng)解析氨基酸檢測(cè)的核心方法、標(biāo)準(zhǔn)流程及前沿技術(shù)，涵蓋樣品前處理、儀器分析及數(shù)據(jù)解讀全流程。

一、核心檢測(cè)方法與技術(shù)對(duì)比

1. 氨基酸分析儀法（離子交換色譜）

參數(shù)	條件設(shè)置	優(yōu)勢(shì)
分離原理	陽離子交換柱（磺酸基團(tuán)） + 梯度洗脫	高特異性，可分離40+種氨基酸
檢測(cè)方式	茚三酮柱后衍生 + 可見光檢測(cè)（570nm）	靈敏度高（0.1-1nmol）
標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)	GB 5009.124-2016（食品）	適用于食品、飼料等復(fù)雜基質(zhì)
設(shè)備型號(hào)	Hitachi L-8900、Sykam S433	分析時(shí)間：60-120min

流程示例（食品樣品）：

水解處理：6M HCl，110℃水解24h（蛋白質(zhì)→游離氨基酸）；
過濾凈化：C18固相萃取柱去雜質(zhì)；
進(jìn)樣分析：梯度洗脫（pH 3.3→10.0），茚三酮顯色定量。

2. 高效液相色譜法（HPLC-UV/FLD）

參數(shù)	條件設(shè)置	應(yīng)用場(chǎng)景
色譜柱	C18反相柱（250×4.6mm，5μm）	游離氨基酸分析（無需水解）
衍生試劑	OPA（鄰苯二甲醛）/FMOC（氯甲酸芴甲酯）	OPA衍生伯胺，F(xiàn)MOC衍生仲胺
檢測(cè)器	熒光檢測(cè)器（Ex 340nm/Em 450nm）	靈敏度達(dá)pmol級(jí)
標(biāo)準(zhǔn)方法	AOAC 994.12（乳制品）	適用于血漿、尿液等生物樣本

關(guān)鍵步驟：

衍生化：OPA與巰基乙醇反應(yīng)生成熒光衍生物（室溫，1min）；
梯度洗脫：乙腈-磷酸鹽緩沖液，流速1.0mL/min；
定量：外標(biāo)法或內(nèi)標(biāo)法（正纈氨酸為常用內(nèi)標(biāo)）。

3. 液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS/MS）

參數(shù)	條件設(shè)置	優(yōu)勢(shì)
離子源	ESI（電噴霧電離）或APCI（大氣壓化學(xué)電離）	高靈敏度（fg級(jí)），免衍生化
質(zhì)譜模式	MRM（多反應(yīng)監(jiān)測(cè)）	抗干擾能力強(qiáng)，適合復(fù)雜基質(zhì)
應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)	ISO 13903:2005（動(dòng)物飼料）	可同時(shí)檢測(cè)D/L型氨基酸

典型條件：

色譜柱：HILIC（親水作用色譜）柱；
流動(dòng)相：乙腈-0.1%甲酸水溶液；
內(nèi)標(biāo)：同位素標(biāo)記氨基酸（如¹³C-亮氨酸）。

二、樣品前處理關(guān)鍵步驟

1. 蛋白質(zhì)水解（總氨基酸檢測(cè)）

步驟	操作要點(diǎn)	注意事項(xiàng)
酸水解	6M HCl，110℃，24h（含1%苯酚防氧化）	色氨酸被破壞，需另用堿水解
堿水解	4M NaOH，110℃，20h（測(cè)色氨酸）	避免半胱氨酸、絲氨酸降解
酶水解	胰蛋白酶/蛋白酶K，37℃，48h	保留氨基酸構(gòu)型，速度慢

2. 游離氨基酸提取

基質(zhì)類型	提取方法	凈化策略
食品/飼料	0.1M HCl超聲提取30min	超濾（10kDa膜）去蛋白質(zhì)
血漿/血清	乙腈沉淀蛋白（1:3，v/v）	離心后取上清液過濾（0.22μm）
植物組織	液氮研磨 + 80%甲醇提取	固相萃取（SCX柱）去色素

三、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與質(zhì)控要點(diǎn)

1. 主要標(biāo)準(zhǔn)方法

標(biāo)準(zhǔn)號(hào)	應(yīng)用領(lǐng)域	核心要求
GB 5009.124-2016	食品中氨基酸測(cè)定（酸水解-氨基酸分析儀）	回收率85-110%，RSD≤5%
AOAC 994.12	乳制品中游離氨基酸（HPLC-OPA衍生）	檢出限≤0.01g/100g
ISO 13903:2005	動(dòng)物飼料氨基酸分析（LC-MS/MS）	定量限≤0.1mg/kg

2. 質(zhì)控措施

內(nèi)標(biāo)校正：使用正纈氨酸（Norvaline）或同位素內(nèi)標(biāo)補(bǔ)償基質(zhì)效應(yīng)；
標(biāo)準(zhǔn)曲線：覆蓋預(yù)期濃度范圍（5-6個(gè)點(diǎn)），R²≥0.995；
加標(biāo)回收：添加已知濃度氨基酸，回收率應(yīng)在80-120%。

四、行業(yè)應(yīng)用案例

1. 嬰幼兒配方奶粉（GB 10765）

檢測(cè)項(xiàng)目：必需氨基酸（賴氨酸、蛋氨酸等）含量；
方法選擇：酸水解 + 氨基酸分析儀法；
驗(yàn)收標(biāo)準(zhǔn)：符合標(biāo)簽標(biāo)示值±20%。

2. 臨床診斷（血漿氨基酸分析）

目標(biāo)物：苯丙氨酸（PKU篩查）、同型半胱氨酸（心血管疾?。?；
方法：HPLC-FLD（OPA衍生）或LC-MS/MS；
判定閾值：苯丙氨酸≥120μmol/L（新生兒陽性）。

五、常見問題與解決方案

問題現(xiàn)象	原因分析	解決方案
色譜峰分不開	梯度洗脫程序不佳或柱效下降	優(yōu)化流動(dòng)相梯度，更換色譜柱
回收率偏低	水解不完全或衍生化效率低	延長(zhǎng)水解時(shí)間，驗(yàn)證衍生條件
基質(zhì)干擾嚴(yán)重	樣品雜質(zhì)過多（如色素、脂類）	加強(qiáng)凈化步驟（SPE/超濾）