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核酸提取及純化檢測

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發(fā)布時間：2025-08-12 09:00:29 更新時間：2025-08-11 09:00:30

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作者：中科光析科學技術研究所檢測中心

核酸提取及純化檢測是分子生物學、臨床診斷和生物醫(yī)學研究中的核心環(huán)節(jié)，旨在從復雜的生物樣本（如細胞、組織或體液）中有效分離出核酸（DNA或RNA），并通過純化去除雜質(zhì)（如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、酶抑制劑或溶劑殘留），從而獲得高純度、高完整性的核酸樣本。這一過程的質(zhì)量直接影響到下游應用的成功率，例如PCR擴增、基因測序、核酸雜交或基因表達分析。任何雜質(zhì)或降解都可能導致假陰性結果、擴增失敗或數(shù)據(jù)偏差，因此在實驗流程中，對提取核酸進行系統(tǒng)檢測至關重要。現(xiàn)代技術如自動化提取系統(tǒng)和商業(yè)化試劑盒的推廣，已顯著提升了效率和可靠性，但檢測環(huán)節(jié)仍需嚴格遵守標準化操作，以確保核酸的濃度、純度和完整性符合要求。當前，該領域正朝著高通量、低樣本量和快速檢測的方向發(fā)展，以滿足日益增長的精準醫(yī)療和診斷需求。

檢測項目

核酸提取及純化后的檢測項目涵蓋多個關鍵參數(shù)，以全面評估核酸樣本的質(zhì)量。主要項目包括核酸濃度（通常以ng/μL或μg/mL表示），這決定了樣本的可用量；純度（通過吸光度比值如A260/A280評估，理想值DNA為1.8，RNA為2.0，指示蛋白質(zhì)或溶劑殘留）；完整性（檢測核酸是否完整降解，通過凝膠電泳觀察片段大小和條帶清晰度）；以及污染物檢測（如殘留蛋白質(zhì)、鹽分、有機溶劑或酶抑制劑）。此外，還涉及片段大小分布的分析（例如，小RNA或大片段DNA的測定）和生物活性測試（如PCR兼容性），確保核酸適合后續(xù)實驗。這些項目的綜合檢測能預防假結果，并為樣本標準化提供依據(jù)。

檢測儀器

用于核酸質(zhì)量檢測的儀器種類豐富，需根據(jù)檢測項目選擇合適的設備。紫外-可見分光光度計（如Nanodrop系列）是基礎儀器，用于快速測量A260、A280和A230值，計算濃度和純度。凝膠成像系統(tǒng)（如Bio-Rad ChemiDoc）配合凝膠電泳裝置，可視化核酸完整性；熒光定量PCR儀（如Applied Biosystems QuantStudio）用于絕對定量或相對表達分析；納米滴度計（如Thermo Scientific NanoDrop One）允許微量樣本的直接測量。高級儀器如Agilent Bioanalyzer或Fragment Analyzer通過微流體芯片技術，自動化分析核酸大小分布和濃度。此外，酶標儀可用于ELISA-based污染物檢測。這些儀器通常集成軟件分析，提供實時數(shù)據(jù)輸出和質(zhì)量控制報告，確保檢測高效準確。

檢測方法

核酸檢測方法多樣化，常見方法包括分光光度法：直接取微量樣本在分光光度計上測量吸光度值，依據(jù)Beer-Lambert定律計算濃度（A260）和純度（A260/A280比值）。凝膠電泳法：將核酸加載到瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠中，進行電泳分離后，用染料（如溴化乙錠或SYBR Safe）染色，并在成像系統(tǒng)下觀察條帶完整性。實時熒光定量PCR：利用TaqMan或SYBR Green探針，定量核酸并檢測特異性序列。微流體芯片法：在生物分析儀中運行，自動化評估片段大小和濃度分布。污染物檢測方法包括酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）或質(zhì)譜分析，以識別殘留物。這些方法通常結合標準曲線和對照樣本，確保可重復性和準確性。

檢測標準

核酸提取及純化檢測需遵守嚴格的國際和行業(yè)標準，以確保數(shù)據(jù)一致性、可靠性和可比性。國際標準如ISO 20395系列（生物樣本核酸提取的質(zhì)量要求）和ISO 17025（實驗室能力認證）規(guī)定基本參數(shù)：A260/A280比值必須在1.8-2.0之間（DNA）或1.9-2.1（RNA）；凝膠電泳顯示清晰主條帶無smear降解；濃度誤差控制在±10%以內(nèi)；污染物水平低于檢測限。行業(yè)指南如QIAGEN和Thermo Fisher Scientific提供具體協(xié)議，強調(diào)質(zhì)量控制措施：包括空白對照（檢測背景干擾）、標準曲線校準（確保定量準確）和儀器驗證。此外，F(xiàn)DA和CLIA等監(jiān)管機構對臨床樣本設定額外要求，如完整性RNA完整性數(shù)（RIN）≥7.0。這些標準通過定期審計和認證體系執(zhí)行，保障實驗結果的科學性和應用價值。