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模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)殺滅微生物指標(biāo)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-08-11 02:34:15 更新時(shí)間：2025-08-10 02:34:15

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)殺滅微生物指標(biāo)檢測(cè)

模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)殺滅微生物指標(biāo)檢測(cè)

模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)是評(píng)價(jià)消毒產(chǎn)品在實(shí)際應(yīng)用場(chǎng)景中殺滅微生物效果的關(guān)鍵方法。與實(shí)驗(yàn)室懸液定量殺菌試驗(yàn)不同，模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)通過(guò)構(gòu)建接近真實(shí)使用環(huán)境的條件（如特定的表面材質(zhì)、溫度、濕度、有機(jī)物干擾等），對(duì)消毒劑或消毒器械的現(xiàn)場(chǎng)適用性和有效性進(jìn)行更客觀、更準(zhǔn)確的評(píng)估。該方法廣泛應(yīng)用于醫(yī)療消毒、公共場(chǎng)所衛(wèi)生、食品加工設(shè)備消毒、水處理及日化產(chǎn)品（如抗菌洗手液、表面清潔劑）等領(lǐng)域的微生物殺滅效果驗(yàn)證，其結(jié)果對(duì)指導(dǎo)科學(xué)消毒、保障公共衛(wèi)生安全具有重大意義。

核心檢測(cè)項(xiàng)目

模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)的核心檢測(cè)項(xiàng)目聚焦于目標(biāo)微生物在模擬載體上的殺滅率或殺滅對(duì)數(shù)值。主要檢測(cè)指標(biāo)包括：

1. 細(xì)菌殺滅指標(biāo)： 常見目標(biāo)菌如金黃色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus)、大腸埃希氏菌 (Escherichia coli)、銅綠假單胞菌 (Pseudomonas aeruginosa) 等。這些菌種代表了革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌及條件致病菌。

2. 真菌殺滅指標(biāo)： 主要針對(duì)白色念珠菌 (Candida albicans) 和黑曲霉 (Aspergillus niger)，評(píng)估產(chǎn)品對(duì)酵母菌和霉菌的殺滅能力。

3. 病毒滅活指標(biāo) (特定產(chǎn)品)： 對(duì)于宣稱可殺滅病毒的消毒產(chǎn)品，常選用脊髓灰質(zhì)炎病毒I型 (Poliovirus type I) 或腺病毒 (Adenovirus) 等作為指示病毒進(jìn)行載體試驗(yàn)。

4. 殺滅率/殺滅對(duì)數(shù)值： 這是最核心的量化指標(biāo)，通過(guò)比較處理組與對(duì)照組（未處理組）在載體上存活微生物的數(shù)量（通常以菌落形成單位 CFU 或空斑形成單位 PFU 表示），計(jì)算殺滅率（%）或殺滅對(duì)數(shù)值（Log Reduction）。殺滅對(duì)數(shù)值達(dá)到3 lg (99.9%) 或更高通常是有效消毒的標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵檢測(cè)儀器

進(jìn)行模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)需要一系列精密的儀器設(shè)備以保障試驗(yàn)的精確性和可重復(fù)性：

1. 生物安全柜 (Biosafety Cabinet, BSC)： 提供無(wú)菌操作環(huán)境，保護(hù)操作人員和樣品，防止交叉污染。

2. 恒溫恒濕培養(yǎng)箱 (Incubator)： 用于培養(yǎng)細(xì)菌（通常35-37°C）、真菌（通常25-28°C）及保存試驗(yàn)前后的載體樣本。

3. 菌落計(jì)數(shù)器 (Colony Counter)： 手動(dòng)或自動(dòng)計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿上的菌落數(shù)量。

4. 渦旋振蕩器 (Vortex Mixer) 與稀釋震蕩器 (Dilution Shaker)： 用于將處理后的載體進(jìn)行充分振蕩洗脫微生物，并進(jìn)行系列稀釋。

5. 精密移液器 (Micropipettes) 與連續(xù)分液器 (Repeater Pipettes)： 精確移取菌液、稀釋液、中和劑等。

6. 定時(shí)器 (Timer)： 精確控制消毒劑作用時(shí)間。

7. 無(wú)菌操作器械： 鑷子、剪刀、接種環(huán)/棒等。

8. 壓力蒸汽滅菌器 (Autoclave)： 對(duì)所有接觸微生物的器具、培養(yǎng)基、稀釋液等進(jìn)行滅菌。

9. 顯微鏡 (Microscope)： 觀察微生物形態(tài)及污染情況。

10. PCR 儀等分子生物學(xué)設(shè)備 (針對(duì)病毒試驗(yàn))： 用于病毒滴度的測(cè)定（如 TCID50 法）。

11. 環(huán)境控制設(shè)備： 溫濕度計(jì)/記錄儀，用于監(jiān)控試驗(yàn)環(huán)境的溫濕度。

標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法

典型的模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)流程遵循以下標(biāo)準(zhǔn)化步驟：

1. 載體準(zhǔn)備： 選擇與實(shí)際應(yīng)用表面相似的惰性材料（如不銹鋼片、玻璃片、聚丙烯塑料片、織物片、陶瓷片等），嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)清洗、干燥、滅菌備用。

2. 染菌： 將特定濃度（通常為 10^6 - 10^7 CFU/mL）的微生物懸液定量（如 10 - 100 μL）均勻滴加或涂布于無(wú)菌載體表面，在設(shè)定的溫濕度條件下干燥（模擬污染物自然干燥狀態(tài)）。

3. 消毒劑/器械處理： 按照產(chǎn)品使用說(shuō)明（濃度、作用方式、作用時(shí)間）對(duì)染菌載體進(jìn)行處理。嚴(yán)格控制作用時(shí)間（常用時(shí)間點(diǎn)如 1min, 5min, 10min, 30min）。

4. 中和： 作用時(shí)間結(jié)束后，立即將載體轉(zhuǎn)移至含有足量、經(jīng)有效性驗(yàn)證的中和劑（用于終止消毒劑活性）的洗脫液中。充分振蕩洗脫載體表面殘留的微生物。中和劑的選擇和驗(yàn)證是本步驟成敗的關(guān)鍵。

5. 洗脫液處理與培養(yǎng)： 對(duì)洗脫液進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂專ù_?？捎?jì)數(shù)），取定量稀釋液接種至適宜的固體培養(yǎng)基（細(xì)菌用營(yíng)養(yǎng)瓊脂，真菌用沙保弱瓊脂，病毒用細(xì)胞培養(yǎng)）上。

6. 培養(yǎng)與計(jì)數(shù)： 將平板置于適宜條件下培養(yǎng)規(guī)定時(shí)間（細(xì)菌通常24-48小時(shí)，真菌3-7天），計(jì)數(shù)平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)（CFU）或觀察病毒引起的細(xì)胞病變（CPE）計(jì)算空斑數(shù)（PFU）。

7. 對(duì)照組設(shè)置： 必須同步設(shè)置：
  - 陽(yáng)性對(duì)照組： 染菌載體不經(jīng)消毒處理，直接洗脫、培養(yǎng)，計(jì)算初始染菌量。
  - 中和劑對(duì)照組： 驗(yàn)證中和劑及其產(chǎn)物對(duì)微生物生長(zhǎng)無(wú)影響。
  - 培養(yǎng)基對(duì)照組： 驗(yàn)證培養(yǎng)基無(wú)菌。
  - 稀釋液/洗脫液對(duì)照組： 驗(yàn)證其無(wú)菌性。
  - 載體對(duì)照組 (可選)： 驗(yàn)證載體本身對(duì)微生物無(wú)毒性。

8. 結(jié)果計(jì)算與評(píng)價(jià)：
殺滅率 (%) = [(陽(yáng)性對(duì)照組平均活菌數(shù) - 試驗(yàn)組平均活菌數(shù)) / 陽(yáng)性對(duì)照組平均活菌數(shù)] x 100%
殺滅對(duì)數(shù)值 (Log Reduction) = Log10(陽(yáng)性對(duì)照組平均活菌數(shù)) - Log10(試驗(yàn)組平均活菌數(shù))
根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（如要求 ≥99.9% 殺滅率或 ≥3 lg 殺滅對(duì)數(shù)值）判斷是否合格。

主要檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)的實(shí)施需嚴(yán)格遵循國(guó)家或國(guó)際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法，確保結(jié)果的權(quán)威性和可比性。常用標(biāo)準(zhǔn)包括：

1. 中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)/規(guī)范：
- GB 27951-2021《皮膚消毒劑通用要求》：附錄C中規(guī)定了用于皮膚消毒劑的模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)方法（多以布片為載體）。
- GB 27952-2020《普通物體表面消毒劑通用要求》：規(guī)定了物體表面消毒劑的模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)（常以不銹鋼、玻璃、織物為載體）。
- 《消毒技術(shù)規(guī)范》（衛(wèi)生部, 2002版及后續(xù)更新）：提供了多種消毒因子（化學(xué)、物理）對(duì)各種微生物（細(xì)菌、真菌、病毒）的模擬現(xiàn)場(chǎng)試驗(yàn)詳細(xì)方法。

2. 國(guó)際/區(qū)域標(biāo)準(zhǔn)：
- 歐洲標(biāo)準(zhǔn) (EN)：
EN 13697:2019 Chemical disinfectants and antiseptics - Quantitative non-porous surface test for the evaluation of bactericidal and/or fungicidal activity of chemical disinfectants used in food, industrial, domestic and institutional areas - Test method and requirements without mechanical action (phase 2, step 2). (化學(xué)消毒劑和防腐劑 - 用于食品、工業(yè)、家用和公共機(jī)構(gòu)領(lǐng)域的化學(xué)消毒劑殺菌和/或殺真菌活性評(píng)估的定量無(wú)孔表面測(cè)試 - 無(wú)機(jī)械作用的試驗(yàn)方法和要求 (階段2, 步驟2))。
EN 14476:2013+A2:2019 Chemical disinfectants and antiseptics - Quantitative suspension test for the evaluation of virucidal activity in the medical area - Test method and requirements (Phase 2/Step 1). (針對(duì)病毒，雖為懸液法，但其原理和部分要求是載體法的基礎(chǔ))。
- 美國(guó)AOAC國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)： <