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陽性參考品符合率檢測

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發(fā)布時間：2025-08-10 14:07:40 更新時間：2025-08-09 14:07:40

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作者：中科光析科學技術研究所檢測中心

陽性參考品符合率檢測

在診斷試劑（如免疫分析試劑、核酸檢測試劑等）的研發(fā)、生產和質量控制過程中，陽性參考品符合率檢測是一項至關重要的核心指標評估。它直接反映了該診斷試劑盒識別和準確檢出目標分析物（如特定抗原、抗體、病毒核酸、基因突變等）的能力，是評價試劑盒分析靈敏度和診斷特異性的關鍵環(huán)節(jié)。簡單來說，該檢測旨在驗證：當樣本中確實存在目標物（即“真陽性”）時，使用該試劑盒進行檢測，其結果報告為陽性的比率有多高。

高陽性符合率是診斷試劑有效性的基石。一個優(yōu)秀的試劑盒必須能夠穩(wěn)定、可靠地檢出各種預期濃度或基因型的目標物質，避免漏診（假陰性）。這項檢測貫穿于試劑盒的整個生命周期，從早期研發(fā)階段的性能初篩、臨床前驗證、注冊申報的臨床試驗，到上市后的批次放行檢驗和穩(wěn)定性監(jiān)測，都是必不可少的評價項目。通過嚴格監(jiān)控陽性參考品符合率，可以確保診斷試劑始終如一地為臨床或科研提供準確、可信的結果，保障患者安全和研究數據的可靠性。

檢測項目

陽性參考品符合率檢測的核心項目是使用一系列預先制備好且濃度/基因型已知的、代表目標分析物存在的樣本（即陽性參考品）進行測試。這些參考品通常包括：

不同濃度梯度的陽性樣本：用于評估試劑盒在目標分析物不同含量水平下的檢出能力，特別是接近檢測限（LoD）的低濃度樣本至關重要。
不同基因型/亞型的陽性樣本：對于病毒檢測或遺傳性疾病篩查試劑，需要包含主要流行株、變異株或關鍵突變類型的陽性樣本。
基質匹配的陽性樣本：參考品應盡量模擬真實臨床樣本（如血清、血漿、咽拭子提取液、組織裂解液等）的基質背景。
臨界值附近樣本：濃度略高于試劑盒設定的陽性判定值(Cut-off)的樣本，用于評估試劑盒對弱陽性樣本的識別能力。

檢測目標就是統(tǒng)計這些陽性參考品被試劑盒正確判讀為陽性的百分比或比率。

檢測儀器

進行陽性參考品符合率檢測所使用的儀器取決于具體的檢測原理：

酶標儀(Plate Reader)：用于讀取ELISA、化學發(fā)光免疫分析(CLIA)等基于微孔板的檢測結果。
實時熒光定量PCR儀(qPCR)：用于核酸檢測試劑盒，讀取擴增曲線和Ct值。
化學發(fā)光/熒光免疫分析儀：用于全自動化學發(fā)光、熒光免疫分析系統(tǒng)。
側向層析讀數儀：用于定量或半定量讀取膠體金/熒光免疫層析試紙條的結果。
測序儀：對于基于測序的檢測，用于確認參考品的基因型。
恒溫設備：如孵育箱、水浴鍋，用于樣本和試劑反應。
移液設備：精密移液器或自動化液體處理工作站，保證加樣準確性。

儀器的性能（精度、準確度、穩(wěn)定性）必須經過定期校準和驗證，以確保檢測結果的可靠性。

檢測方法

陽性參考品符合率檢測通常按照以下標準化的實驗流程進行：

參考品準備：嚴格按照標準操作規(guī)程(SOP)復溶、稀釋或處理陽性參考品。記錄批號、濃度/基因型、制備日期等關鍵信息。
檢測運行：將待測試劑盒、陽性參考品、必要的陰性對照和質控品按照試劑盒說明書和驗證方案的要求進行實驗操作。通常需要進行多次重復實驗（如n=3, 5, 10或更多，依據統(tǒng)計學要求確定），且最好由不同的操作員在不同天進行，以評估重復性和重現(xiàn)性。
結果判讀：使用規(guī)定的儀器和方法（如讀取OD值、RLU值、Ct值、條帶/熒光強度等），嚴格依據試劑盒提供的Cut-off值計算公式或判定標準，對每個檢測結果進行定性（陽性/陰性）判讀。
符合率計算：統(tǒng)計所有陽性參考品的檢測次數和其中被正確判為陽性的次數。
計算公式：陽性符合率 = (正確判為陽性的次數 / 陽性參考品總檢測次數) × 100%
數據分析：計算陽性符合率及其置信區(qū)間。分析不同濃度、不同基因型參考品的符合情況，評估是否存在系統(tǒng)性偏差。

檢測標準

陽性參考品符合率檢測需要滿足嚴格的法規(guī)和標準要求，常見的要求包括：

國家藥品監(jiān)督管理局(NMPA)發(fā)布的體外診斷試劑注冊審查指導原則：明確要求對試劑的分析性能進行驗證/確認，陽性符合率（分析靈敏度）是核心指標之一，通常要求達到95%或更高（例如95%置信區(qū)間下限>90%），具體目標值需根據試劑預期用途和風險設定。
ISO 13485:2016《醫(yī)療器械質量管理體系用于法規(guī)的要求》：要求建立全面的質量控制程序，包括使用參考物質進行性能評估。
ISO 15189:2012《醫(yī)學實驗室—質量和能力的要求》：對檢驗程序的驗證和確認提出要求，涵蓋分析靈敏度。
CLSI(臨床和實驗室標準協(xié)會)指南：如CLSI EP05-A3(精密度)、EP12-A2(定性試驗性能評價)、EP17-A2(檢出限)等提供了具體的實驗設計和統(tǒng)計分析方法。
內部質量標準：企業(yè)或實驗室根據產品特性和風險評估制定的更嚴格的內控標準。

關鍵接受標準：陽性符合率（即分析靈敏度）通常要求≥95%，或根據置信區(qū)間評估（例如95%置信區(qū)間的下限≥90%或85%）。對于某些關鍵應用（如血源篩查、傳染病確診試劑），要求可能更高。

總之，陽性參考品符合率檢測是確保診斷試劑盒具備可靠檢出能力的基礎性、強制性評價項目。通過精心選擇代表性的陽性參考品，使用經過驗證的儀器和方法，嚴格遵守法規(guī)和標準進行實驗和數據分析，才能為診斷試劑的準確性和臨床價值提供堅實的科學依據。持續(xù)監(jiān)測并維持高水平的陽性符合率，是診斷試劑質量保證的核心任務。