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酶標(biāo)板檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-08-06 18:51:29 更新時(shí)間：2025-08-05 18:51:29

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

酶標(biāo)板檢測(cè)概述

酶標(biāo)板檢測(cè)是一種基于酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）原理的高通量生物分析技術(shù)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷、藥物研發(fā)、食品安全和環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。它使用96孔或384孔的微孔板（microplate）作為反應(yīng)載體，通過酶標(biāo)記的抗體或抗原與目標(biāo)分子特異性結(jié)合，觸發(fā)酶-底物反應(yīng)產(chǎn)生可檢測(cè)信號(hào)（如顏色變化、熒光或發(fā)光）。這種技術(shù)的優(yōu)勢(shì)在于其高靈敏度、特異性和自動(dòng)化能力，能夠同時(shí)處理大量樣本，實(shí)現(xiàn)快速定量或定性分析。自1970年代發(fā)展以來，酶標(biāo)板檢測(cè)已成為臨床實(shí)驗(yàn)室的基石，尤其在傳染病篩查（如HIV、COVID-19）、生物標(biāo)記物檢測(cè)和藥物毒性評(píng)估中發(fā)揮關(guān)鍵作用。其核心流程包括樣品制備、孔板包被、孵育、洗滌、信號(hào)生成和讀取，整個(gè)過程需嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)條件以確保結(jié)果的可靠性和可重復(fù)性。

檢測(cè)項(xiàng)目

酶標(biāo)板檢測(cè)適用于多種生物和化學(xué)分析項(xiàng)目，主要包括臨床診斷、研究和工業(yè)應(yīng)用。常見檢測(cè)項(xiàng)目包括：1）傳染病檢測(cè)，如病毒抗原或抗體（HIV、乙肝病毒、流感病毒）的篩查，利用特異性抗體捕捉病原體；2）蛋白質(zhì)定量與分析，例如通過夾心ELISA測(cè)定細(xì)胞因子（如IL-6、TNF-α）或激素（如胰島素、甲狀腺素）；3）細(xì)胞功能測(cè)試，如MTT或CCK-8法評(píng)估細(xì)胞增殖和毒性；4）食品安全和環(huán)境監(jiān)測(cè)，例如檢測(cè)食品中的毒素（黃曲霉毒素）或水樣中的污染物（農(nóng)藥殘留）；5）藥物研發(fā)中的靶點(diǎn)結(jié)合活性篩選，如受體-配體相互作用分析。這些項(xiàng)目依賴于抗體的高特異性，可檢測(cè)濃度范圍從皮摩爾（pM）到納摩爾（nM），適用于低豐度生物分子的定量。

檢測(cè)儀器

酶標(biāo)板檢測(cè)的核心儀器是酶標(biāo)儀（microplate reader），專為讀取微孔板中的光學(xué)信號(hào)設(shè)計(jì)。主要類型包括：1）光吸收型酶標(biāo)儀，測(cè)量紫外或可見光吸光度（如450nm波長(zhǎng)），適用于基于顏色的ELISA檢測(cè)；2）熒光型酶標(biāo)儀，通過特定激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)檢測(cè)熒光強(qiáng)度，用于高靈敏度應(yīng)用（如熒光偏振免疫測(cè)定）；3）化學(xué)發(fā)光型酶標(biāo)儀，捕獲光信號(hào)而不需外部光源，適合低背景檢測(cè)?，F(xiàn)代酶標(biāo)儀常集成多功能模塊，支持溫度控制、振蕩和自動(dòng)進(jìn)樣，例如BioTek的Synergy系列或Tecan的Infinite系列。儀器關(guān)鍵參數(shù)包括檢測(cè)范圍（OD值0-4）、精度（CV<5%）和通量（96孔板讀取時(shí)間<30秒）。維護(hù)需定期校準(zhǔn)光源和濾光片，并配合軟件（如Gen5）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和質(zhì)量控制。

檢測(cè)方法

酶標(biāo)板檢測(cè)的主要方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA），其變體包括直接、間接和夾心法。標(biāo)準(zhǔn)流程為：1）直接ELISA：抗原固定于孔板，酶標(biāo)記抗體直接結(jié)合，簡(jiǎn)化步驟但靈敏度較低；2）間接ELISA：使用未標(biāo)記一抗結(jié)合抗原，酶標(biāo)記二抗放大信號(hào)，提高靈敏度；3）夾心ELISA：捕獲抗體先包被孔板，捕獲抗原后添加檢測(cè)抗體，適合復(fù)雜樣品。具體步驟包括：孔板預(yù)處理（包被抗體）、樣品加入與孵育（37°C，1-2小時(shí)）、洗滌（去除未結(jié)合物）、添加酶標(biāo)記物（如HRP或AP標(biāo)記的二抗）、二次孵育與洗滌、加入底物（如TMB或AMPPD）生成信號(hào)，最后用酶標(biāo)儀讀取。其他方法包括基于熒光的檢測(cè)（如FITC標(biāo)記）和細(xì)胞基檢測(cè)（如LDH釋放法評(píng)估細(xì)胞損傷）。優(yōu)化時(shí)需控制pH、溫度、孵育時(shí)間，并減少非特異性結(jié)合。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

酶標(biāo)板檢測(cè)必須遵循嚴(yán)格的國(guó)際和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)以保證準(zhǔn)確性和可比性。核心標(biāo)準(zhǔn)包括：1）國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）指南，如ISO 15189（醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力要求）和ISO 17025（檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室通用要求）；2）CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）文件，如EP17-A2（檢測(cè)限評(píng)估）和EP5-A2（精密度驗(yàn)證）；3）FDA和EMA法規(guī)，針對(duì)體外診斷試劑（IVD）的驗(yàn)證要求。具體實(shí)施涉及：建立標(biāo)準(zhǔn)曲線（使用已知濃度校準(zhǔn)品）、內(nèi)部質(zhì)量控制（每日運(yùn)行陽性和陰性對(duì)照）、性能驗(yàn)證（精密度、準(zhǔn)確度、靈敏度測(cè)試）、批間變異控制（CV<15%），以及儀器校準(zhǔn)記錄。實(shí)驗(yàn)室需執(zhí)行定期審計(jì)和人員培訓(xùn)，確保數(shù)據(jù)符合GLP（良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范），減少假陽性或假陰性風(fēng)險(xiǎn)。