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凝膠色譜法檢測

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發(fā)布時間：2025-08-06 13:29:39 更新時間：2025-08-05 13:29:40

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

凝膠色譜法檢測是一種高效、精確的分離和分析技術(shù)，也稱為尺寸排阻色譜法（Size Exclusion Chromatography, SEC），廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)、高分子材料科學(xué)、制藥和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域。其基本原理基于分子大小差異進行分離：固定相由多孔凝膠顆粒組成，小分子因能進入凝膠孔而被延遲洗脫，大分子則快速通過孔隙直接流出，從而在色譜圖中形成不同的峰。這種方法具有操作簡便、樣品損失少、非破壞性等優(yōu)點，特別適用于分析復(fù)雜混合物中的蛋白質(zhì)、核酸、多糖等高分子物質(zhì)。在藥物研發(fā)中，凝膠色譜法常用于評估生物制品的純度和穩(wěn)定性；在工業(yè)質(zhì)量控制中，它幫助監(jiān)測聚合物分子量分布和雜質(zhì)含量。隨著技術(shù)進步，凝膠色譜法已與高靈敏度檢測器集成，提升了分析的準(zhǔn)確性和效率，成為現(xiàn)代實驗室不可或缺的工具。

檢測項目

凝膠色譜法主要用于檢測高分子物質(zhì)的分子量分布、純度和雜質(zhì)水平。常見的檢測項目包括：蛋白質(zhì)分子量測定（如抗體或酶的大小分析）、聚合物分子量分布（例如塑料或橡膠的材料評估）、核酸片段長度鑒定（在基因工程中應(yīng)用），以及生物樣品中的雜質(zhì)檢測（如細胞培養(yǎng)液中的小分子污染物）。這些項目能幫助評估產(chǎn)品質(zhì)量、優(yōu)化生產(chǎn)工藝，并滿足監(jiān)管要求。

檢測儀器

凝膠色譜法檢測的核心儀器包括高效液相色譜儀（HPLC）系統(tǒng)，配備專門的凝膠色譜柱（如基于葡聚糖或硅膠的固定相），以及檢測器模塊如紫外可見分光光度檢測器（UV-Vis）、折射率檢測器（RI）或光散射檢測器（LS）。流動相泵用于控制緩沖液流速（如磷酸鹽緩沖溶液），自動化進樣器確保樣品精確注入，數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)（如計算機軟件）處理色譜圖并輸出結(jié)果。這些儀器通常要求高精度校準(zhǔn)，以確保重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

檢測方法

凝膠色譜法的標(biāo)準(zhǔn)檢測方法分為幾個步驟：首先，樣品制備，包括溶解或稀釋樣品至合適濃度；其次，選擇并平衡色譜柱（常用緩沖液如0.1M NaCl溶液）；接著，通過進樣器注入樣品（體積通常為10-100μL），并在固定流速下洗脫（流速范圍0.5-1.5 mL/min）；然后，檢測器實時監(jiān)測洗脫峰，生成色譜圖；最后，校準(zhǔn)曲線法分析分子量（使用已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品），并通過軟件計算峰面積或保留時間以評估分子量分布和雜質(zhì)含量。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

凝膠色譜法需遵守國內(nèi)外嚴(yán)格的檢測標(biāo)準(zhǔn)，確保結(jié)果可靠和可比性。主要標(biāo)準(zhǔn)包括：ISO 13885系列（高分子材料的分子量分布測定）、美國藥典USP<621>（生物制品純度分析）、歐洲藥典EP 2.2.46（蛋白質(zhì)分子量測定），以及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)如ASTM D5296（聚合物分子量表征）。這些標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范了儀器校準(zhǔn)、樣品處理、數(shù)據(jù)報告和質(zhì)量控制要求，幫助實驗室通過認證審核。