抗原性蛋白質(zhì)含量免疫學(xué)測(cè)定方法檢測(cè)

抗原性蛋白質(zhì)是指能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答（產(chǎn)生抗體或致敏淋巴細(xì)胞）的蛋白質(zhì)分子。準(zhǔn)確測(cè)定生物樣本（如疫苗、生物治療藥物、診斷試劑、食品過(guò)敏原、環(huán)境污染物等）中抗原性蛋白質(zhì)的含量，對(duì)于評(píng)估其免疫原性、安全性、有效性以及進(jìn)行質(zhì)量控制至關(guān)重要。免疫學(xué)測(cè)定方法是基于抗原與抗體之間高度特異性的結(jié)合反應(yīng)來(lái)定量或定性檢測(cè)目標(biāo)抗原蛋白的核心技術(shù)，因其具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作相對(duì)便捷等顯著優(yōu)勢(shì)，已成為生物醫(yī)藥、食品安全、環(huán)境監(jiān)測(cè)和基礎(chǔ)研究等領(lǐng)域不可或缺的分析手段。這些方法能夠有效識(shí)別具有完整表位結(jié)構(gòu)、保留免疫反應(yīng)活性的目標(biāo)蛋白，而非僅僅檢測(cè)總蛋白含量。

檢測(cè)項(xiàng)目

免疫學(xué)測(cè)定方法的核心檢測(cè)項(xiàng)目是樣本中特定抗原性蛋白質(zhì)（Target Antigenic Protein）的含量或濃度。這通常包括：

• 絕對(duì)定量： 測(cè)定樣本中目標(biāo)抗原蛋白的精確濃度（如 ng/mL, μg/mL, IU/mL）。
• 相對(duì)定量： 比較不同樣本或處理?xiàng)l件下目標(biāo)抗原蛋白含量的相對(duì)變化。
• 活性檢測(cè)： 評(píng)估抗原蛋白結(jié)合其特異性抗體的能力，間接反映其功能性表位的完整性（常通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)法或抑制法實(shí)現(xiàn)）。
• 純度分析： 在復(fù)雜混合物（如重組蛋白產(chǎn)物）中檢測(cè)目標(biāo)抗原蛋白相對(duì)于雜蛋白的比例（常結(jié)合電泳及免疫印跡）。

檢測(cè)儀器

免疫學(xué)測(cè)定方法依賴(lài)于一系列精密的儀器設(shè)備進(jìn)行信號(hào)讀取、數(shù)據(jù)處理和操作自動(dòng)化：

• 酶標(biāo)儀 (Microplate Reader / ELISA Reader)： 這是最常用的儀器，主要用于讀取酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）中微孔板內(nèi)發(fā)生的顏色變化（吸光度值，OD值）?？膳鋫洳煌ㄩL(zhǎng)的濾光片或光柵。
• 化學(xué)發(fā)光檢測(cè)儀 (Chemiluminescence Detector)： 用于檢測(cè)化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）中產(chǎn)生的光信號(hào)，具有極高的靈敏度。
• 熒光檢測(cè)儀 (Fluorescence Detector / Fluorometer)： 用于檢測(cè)熒光免疫分析（FIA）或時(shí)間分辨熒光免疫分析（TRFIA）中發(fā)出的熒光信號(hào)。
• 電化學(xué)發(fā)光免疫分析儀 (Electrochemiluminescence Immunoassay Analyzer, 如 Roche Cobas e系列)： 用于自動(dòng)化、高通量的電化學(xué)發(fā)光免疫分析。
• 免疫印跡系統(tǒng) (Western Blotting System)： 包括電泳儀、轉(zhuǎn)膜儀、成像系統(tǒng)（通常為化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)或熒光成像系統(tǒng)）和配套的分析軟件，用于檢測(cè)經(jīng)凝膠電泳分離后轉(zhuǎn)移到膜上的抗原蛋白。
• 流式細(xì)胞儀 (Flow Cytometer)： 用于基于微球的多重免疫分析（如 Luminex 技術(shù)）或細(xì)胞表面/胞內(nèi)抗原的檢測(cè)。
• 自動(dòng)化液體處理工作站 (Automated Liquid Handler)： 用于高通量實(shí)驗(yàn)中的樣本加樣、稀釋、試劑添加等步驟，提高效率和精度。
• 洗板機(jī) (Microplate Washer)： 用于ELISA等步驟中的洗板操作。
• 恒溫孵育器 (Incubator)： 為抗原抗體反應(yīng)提供恒定的溫度環(huán)境。

檢測(cè)方法

抗原性蛋白質(zhì)含量的免疫學(xué)測(cè)定方法多種多樣，主要包括：

• 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA)：
  • 直接法ELISA： 抗原直接吸附固相，酶標(biāo)一抗結(jié)合檢測(cè)。
  • 間接法ELISA： 抗原吸附固相，一抗結(jié)合，酶標(biāo)二抗（抗一抗）結(jié)合檢測(cè)。最常用，信號(hào)放大效果佳。
  • 夾心法ELISA (Sandwich ELISA)： 捕獲抗體包被固相，捕獲抗原，酶標(biāo)檢測(cè)抗體結(jié)合。特異性最高，適用于復(fù)雜樣本，需配對(duì)抗體。
  • 競(jìng)爭(zhēng)法ELISA (Competitive ELISA)： 適用于小分子或半抗原，或當(dāng)無(wú)法獲得配對(duì)抗體時(shí)。待測(cè)抗原與標(biāo)記抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合有限量的抗體。
• 免疫印跡法 (Western Blotting, WB)： 樣本經(jīng)SDS-PAGE電泳分離，轉(zhuǎn)印至膜上，用特異性抗體探測(cè)目標(biāo)條帶。主要用于定性或半定量檢測(cè)，以及評(píng)估抗原分子量和特異性。
• 放射免疫分析法 (Radioimmunoassay, RIA)： 使用放射性同位素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行檢測(cè)，靈敏度高，但因放射性危害應(yīng)用逐漸減少。
• 化學(xué)發(fā)光免疫分析法 (Chemiluminescence Immunoassay, CLIA)： 用化學(xué)發(fā)光物質(zhì)（如魯米諾、吖啶酯）標(biāo)記抗原/抗體，通過(guò)發(fā)光強(qiáng)度定量。靈敏度高，動(dòng)態(tài)范圍寬，自動(dòng)化程度高。
• 熒光免疫分析法 (Fluorescence Immunoassay, FIA)： 用熒光物質(zhì)標(biāo)記抗原/抗體進(jìn)行檢測(cè)。
• 時(shí)間分辨熒光免疫分析法 (Time-Resolved Fluorescence Immunoassay, TRFIA)： 使用鑭系元素螯合物（如銪Eu3?）作為熒光標(biāo)記物，利用其長(zhǎng)熒光壽命的特點(diǎn)，延遲測(cè)量時(shí)間以消除背景熒光干擾，靈敏度極高。
• 電化學(xué)發(fā)光免疫分析法 (Electrochemiluminescence Immunoassay, ECLIA)： 在電極表面通過(guò)電化學(xué)反應(yīng)觸發(fā)標(biāo)記物（如三聯(lián)吡啶釕）發(fā)光。結(jié)合了電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光的優(yōu)點(diǎn)，靈敏度高、穩(wěn)定性好，易于自動(dòng)化。
• 免疫比濁法 / 免疫散射比濁法 (Immunoturbidimetry / Nephelometry)： 用于可溶性抗原，抗原抗體復(fù)合物形成導(dǎo)致溶液濁度變化，通過(guò)測(cè)定吸光度（比濁）或散射光強(qiáng)度（散射比濁）進(jìn)行定量。常用于血清蛋白如補(bǔ)體、免疫球蛋白等的快速檢測(cè)。
• 基于微球的多重免疫分析 (Multiplex Bead-Based Immunoassays, 如 Luminex xMAP技術(shù))： 使用不同熒光編碼的微球同時(shí)捕獲多種抗原，結(jié)合熒光報(bào)告分子，利用流式細(xì)胞術(shù)原理進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)單一樣本中多種目標(biāo)蛋白的高通量檢測(cè)。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

為確?？乖缘鞍踪|(zhì)含量免疫學(xué)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性、精密度、可靠性和可比性，必須遵循相關(guān)的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和方法學(xué)驗(yàn)證原則：

• 方法學(xué)驗(yàn)證參數(shù)： 任何定量免疫學(xué)方法在應(yīng)用前或變更后都需要進(jìn)行全面的驗(yàn)證，關(guān)鍵參數(shù)包括：
  • 特異性 (Specificity)： 方法區(qū)分目標(biāo)抗原與樣品中其他成分（尤其是結(jié)構(gòu)類(lèi)似物）的能力。
  • 靈敏度 (Sensitivity)： 通常指最低檢測(cè)限 (Limit of Detection, LOD) 和最低定量限 (Limit of Quantification, LOQ)。LOD是能可靠檢出但尚不能準(zhǔn)確定量的最低濃度；LOQ是在可接受的精密度和準(zhǔn)確度下能定量測(cè)定的最低濃度。
  • 準(zhǔn)確度 (Accuracy)： 測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值（或參考值）接近的程度，常用回收率實(shí)驗(yàn)評(píng)估。
  • 精密度 (Precision)： 包括批內(nèi)精密度（同一次實(shí)驗(yàn)內(nèi)重復(fù)測(cè)定）和批間精密度（不同時(shí)間、不同操作者、不同批次試劑等重復(fù)測(cè)定），以相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (%RSD) 表示。
  • 線(xiàn)性范圍 (Linearity)： 在給定范圍內(nèi)，檢測(cè)信號(hào)與目標(biāo)物濃度呈線(xiàn)性關(guān)系的區(qū)間。
  • 穩(wěn)健性/耐用性 (Robustness/Ruggedness)： 在方法參數(shù)（如孵育時(shí)間、溫度、試劑批次）發(fā)生微小變化時(shí)，測(cè)定結(jié)果保持不受影響的能力。
• 國(guó)際/國(guó)家/行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)：
  • ISO 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)： 如 ISO 5725 (測(cè)量方法與結(jié)果的準(zhǔn)確度)，ISO/IEC 17025 (檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力的通用要求) 中關(guān)于方法驗(yàn)證的要求。

  • 檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)證書(shū)

    

    CMA認(rèn)證

    檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定證書(shū)

    證書(shū)編號(hào)：241520345370

    有效期至：2030年4月15日

    

    CNAS認(rèn)可

    實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書(shū)

    證書(shū)編號(hào)：CNAS L22006

    有效期至：2030年12月1日

    

    ISO認(rèn)證

    質(zhì)量管理體系認(rèn)證證書(shū)

    證書(shū)編號(hào)：ISO9001-2024001

    有效期至：2027年12月31日