您現(xiàn)在的位置：首頁(yè) > 檢測(cè)項(xiàng)目 > 其他檢測(cè)

外源性DNA殘留量檢測(cè)

1對(duì)1客服專屬服務(wù)，免費(fèi)制定檢測(cè)方案，15分鐘極速響應(yīng)

可選形式：電子報(bào)告紙質(zhì)報(bào)告

可選語(yǔ)言：中文報(bào)告英文報(bào)告

發(fā)布時(shí)間：2025-08-03 21:17:30 更新時(shí)間：2025-08-02 21:17:30

點(diǎn)擊：0

作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

外源性DNA殘留量檢測(cè)是指在生物制品、藥品、疫苗或其他生物樣品中對(duì)來(lái)自外部來(lái)源（如宿主細(xì)胞、病毒、細(xì)菌或其他污染物）的脫氧核糖核酸（DNA）殘留進(jìn)行定量分析和評(píng)估的關(guān)鍵過(guò)程。這一檢測(cè)在現(xiàn)代生物制藥、基因治療、疫苗開(kāi)發(fā)及食品安全領(lǐng)域中具有極其重要的意義，因?yàn)闅埩舻耐庠葱訢NA可能引發(fā)免疫反應(yīng)、導(dǎo)致基因突變、傳播感染或影響產(chǎn)品穩(wěn)定性。根據(jù)國(guó)際監(jiān)管要求，如ICH（國(guó)際人用藥品注冊(cè)技術(shù)協(xié)調(diào)會(huì)）指南，殘留DNA的量必須嚴(yán)格控制在安全閾值以下（通常每劑次不超過(guò)100 pg），以避免潛在的健康風(fēng)險(xiǎn)。檢測(cè)內(nèi)容不僅包括DNA的定量測(cè)定，還涉及DNA來(lái)源鑒定（如區(qū)分宿主細(xì)胞DNA與病毒DNA）、完整性評(píng)估（檢查DNA是否片段化）以及生物安全性評(píng)價(jià)。這一過(guò)程是藥品GMP（良好生產(chǎn)規(guī)范）和GLP（良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范）的重要組成部分，確保產(chǎn)品從研發(fā)到上市的全生命周期安全可靠。其應(yīng)用范圍廣泛，涵蓋單克隆抗體生產(chǎn)、細(xì)胞治療產(chǎn)品、重組蛋白藥物等，對(duì)預(yù)防生物污染、保障公共衛(wèi)生起到核心作用。

檢測(cè)項(xiàng)目

外源性DNA殘留量檢測(cè)的核心項(xiàng)目包括多個(gè)維度：首先，是總DNA殘留量的定量測(cè)定，通常以皮克（pg）或納克（ng）每毫升（或每劑次）為單位，這是確保殘留量低于安全限值的基礎(chǔ)；其次，是DNA來(lái)源鑒定，涉及區(qū)分不同類型的DNA，如宿主細(xì)胞DNA（如CHO細(xì)胞或HEK293細(xì)胞殘留）、病毒DNA或其他污染物DNA（如細(xì)菌DNA），這一項(xiàng)目通過(guò)序列特異性分析來(lái)確認(rèn)污染源；第三，是DNA完整性評(píng)估，檢查DNA是否發(fā)生降解或片段化，因?yàn)橥暾拈L(zhǎng)鏈DNA可能具有更高的風(fēng)險(xiǎn)，例如更容易整合到宿主基因組中；此外，還包括特定序列檢測(cè)項(xiàng)目，如針對(duì)高風(fēng)險(xiǎn)病毒（如SV40或EBV）的DNA片段定量，以及殘留DNA的生物活性（如致瘤性或免疫原性）評(píng)價(jià)。這些項(xiàng)目共同構(gòu)成了全面的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估框架，確保檢測(cè)結(jié)果能有效指導(dǎo)產(chǎn)品質(zhì)量控制。

檢測(cè)儀器

進(jìn)行外源性DNA殘留量檢測(cè)時(shí)，需依賴一系列高精度儀器：實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（qPCR）是最常用且標(biāo)準(zhǔn)化的設(shè)備，它利用熒光探針技術(shù)對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增和實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，實(shí)現(xiàn)高靈敏度定量；微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)（ddPCR）則提供更高的準(zhǔn)確性和絕對(duì)定量能力，通過(guò)將樣品分區(qū)進(jìn)行獨(dú)立擴(kuò)增，減少背景干擾，特別適用于低豐度DNA檢測(cè)；毛細(xì)管電泳儀用于分析DNA片段大小和完整性，例如通過(guò)凝膠電泳或芯片電泳來(lái)評(píng)估降解程度；高通量測(cè)序平臺(tái)（如Illumina或PacBio系統(tǒng)）則用于深度測(cè)序，以全面鑒定DNA來(lái)源和序列特征；此外，酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定儀（ELISA）可用于基于抗體的間接檢測(cè)方法，而熒光分光光度計(jì)（如用于PicoGreen染料法）則直接測(cè)量DNA雙鏈的熒光強(qiáng)度。這些儀器的選擇取決于檢測(cè)靈敏度（如ddPCR可達(dá)0.1 pg/μL）、通量需求和成本因素，確保高效可靠的數(shù)據(jù)輸出。

檢測(cè)方法

外源性DNA殘留量檢測(cè)的常用方法包括多種技術(shù)路線：定量PCR（qPCR）是主流方法，通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物和探針擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列，利用熒光信號(hào)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)來(lái)定量殘留量，具有快速、高靈敏度（檢測(cè)限可達(dá)1-10 pg/mL）的優(yōu)點(diǎn)；數(shù)字PCR（dPCR）作為進(jìn)階版本，將樣品分成微滴進(jìn)行獨(dú)立擴(kuò)增，提供絕對(duì)定量且抗干擾能力強(qiáng)，適用于復(fù)雜基質(zhì)樣品；雜交法如斑點(diǎn)雜交或Southern blot，用于DNA的定性和半定量分析，尤其適合檢測(cè)特定序列；基于測(cè)序的方法，如下一代測(cè)序（NGS），通過(guò)全基因組或靶向測(cè)序來(lái)鑒定DNA來(lái)源和豐度，提供最全面的信息；比色法如PicoGreen法直接結(jié)合雙鏈DNA產(chǎn)生熒光，實(shí)現(xiàn)快速定量，但靈敏度較低；此外，酶聯(lián)免疫法（ELISA-based assays）利用抗體檢測(cè)DNA-蛋白復(fù)合物。這些方法需結(jié)合樣品前處理（如DNA提取和純化），并優(yōu)化參數(shù)如循環(huán)數(shù)、探針濃度以提高準(zhǔn)確度。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

外源性DNA殘留量檢測(cè)需嚴(yán)格遵循國(guó)際和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，以確保結(jié)果的可比性和合規(guī)性：關(guān)鍵標(biāo)準(zhǔn)包括ICH Q5A（Quality of Biotechnological Products: Viral Safety Evaluation），它規(guī)定了殘留DNA限量（≤100 pg/劑次）和檢測(cè)驗(yàn)證要求；歐洲藥典（Ph. Eur.）章節(jié)如2.6.7專門(mén)針對(duì)DNA殘留檢測(cè)提供方法指南；美國(guó)藥典（USP）在<1130> Nucleic Acid-Based Techniques中詳細(xì)描述qPCR和dPCR方法規(guī)范；中國(guó)藥典（ChP）也在相關(guān)附錄中設(shè)定技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)。此外，ISO標(biāo)準(zhǔn)如ISO 21571（Foodstuffs—Methods of analysis for the detection of genetically modified organisms）可用于食品安全領(lǐng)域。這些標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)驗(yàn)證參數(shù)：特異性（確保僅檢測(cè)目標(biāo)DNA）、靈敏度（檢出限≤10 pg/mL）、準(zhǔn)確度（回收率85-115%）和精密度（RSD≤15%）。實(shí)驗(yàn)室必須符合GMP/GLP要求，并進(jìn)行方法轉(zhuǎn)移和定期復(fù)核，以維護(hù)檢測(cè)可靠性。