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白細(xì)胞直方圖或散點(diǎn)圖檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-08-02 23:23:57 更新時(shí)間：2025-08-01 23:23:59

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

白細(xì)胞直方圖或散點(diǎn)圖檢測(cè)概述

白細(xì)胞直方圖或散點(diǎn)圖檢測(cè)是現(xiàn)代血液分析儀進(jìn)行全血細(xì)胞計(jì)數(shù)（CBC）尤其是白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)（WBC Differential）的核心分析技術(shù)之一。它并非直接檢測(cè)單一項(xiàng)目，而是通過(guò)對(duì)白細(xì)胞群體物理或化學(xué)特性的綜合分析，生成直觀的圖形化報(bào)告，為白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)和異常細(xì)胞識(shí)別提供依據(jù)。傳統(tǒng)的人工顯微鏡鏡檢費(fèi)時(shí)費(fèi)力且主觀性強(qiáng)，而基于直方圖或散點(diǎn)圖的自動(dòng)化分析則大大提高了檢測(cè)效率和標(biāo)準(zhǔn)化程度。該檢測(cè)通過(guò)對(duì)白細(xì)胞體積（體積法）、細(xì)胞內(nèi)部復(fù)雜度（射頻法）、核酸含量、細(xì)胞膜抗原（熒光染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)）等不同參數(shù)的測(cè)量，將不同類(lèi)別的白細(xì)胞（如中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞）以及可能的異常細(xì)胞（如原始細(xì)胞、異型淋巴細(xì)胞等）在二維或三維空間上進(jìn)行區(qū)分和定位。

檢測(cè)項(xiàng)目

白細(xì)胞直方圖/散點(diǎn)圖本身是儀器分析過(guò)程的圖形化體現(xiàn)，其核心目的是提供以下信息：

1. 白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)： 定量報(bào)告各類(lèi)白細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞）的百分率和絕對(duì)值。
2. 白細(xì)胞形態(tài)學(xué)提示： 識(shí)別和提示可能存在的異常細(xì)胞群體或形態(tài)學(xué)改變，如：
   • 原始細(xì)胞/幼稚細(xì)胞區(qū)（Blast/Immature Granulocyte Area）
   • 異型淋巴細(xì)胞（Atypical Lymphocytes）
   • 巨大血小板或血小板聚集對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)的干擾
   • 有核紅細(xì)胞（Nucleated Red Blood Cells, NRBC）的存在
   • 未溶解的紅細(xì)胞或紅細(xì)胞碎片干擾
   • 嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞增多
   • 單核細(xì)胞增多
3. 報(bào)警信息： 當(dāng)圖形分布異?；虺霈F(xiàn)異常細(xì)胞群時(shí)，儀器會(huì)觸發(fā)相應(yīng)的報(bào)警（Flags），提示檢驗(yàn)人員需要進(jìn)一步進(jìn)行人工鏡檢復(fù)核。

檢測(cè)儀器

生成白細(xì)胞直方圖或散點(diǎn)圖主要依賴(lài)于各種類(lèi)型的自動(dòng)化血液分析儀：

1. 基于電阻抗原理（庫(kù)爾特原理）： 主要生成白細(xì)胞體積分布直方圖（Volume Distribution Histogram）。儀器通過(guò)測(cè)量白細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)引起的電阻變化（與細(xì)胞體積成正比）來(lái)區(qū)分細(xì)胞。通常只能提供三分類(lèi)結(jié)果（淋巴細(xì)胞、中間細(xì)胞/單核細(xì)胞、粒細(xì)胞）。
2. 基于流式細(xì)胞術(shù)結(jié)合細(xì)胞化學(xué)染色/熒光染色： 這是目前主流高端血液分析儀采用的技術(shù)，可生成復(fù)雜的散點(diǎn)圖（Scatter Plots）。儀器利用：
   • 光散射： 前向散射光（Forward Scatter, FSC）反映細(xì)胞大小/體積；側(cè)向散射光（Side Scatter, SSC）反映細(xì)胞內(nèi)部顆粒性/復(fù)雜度/核型。
   • 熒光信號(hào)： 使用特異性熒光染料（如對(duì)核酸染色的熒光染料，或結(jié)合細(xì)胞膜抗原的熒光標(biāo)記抗體）測(cè)量細(xì)胞內(nèi)DNA/RNA含量或特定表面標(biāo)志物。
   通過(guò)組合不同的參數(shù)（如SSC vs FSC, 熒光強(qiáng)度 vs SSC, 多色熒光組合等），可以在二維或三維散點(diǎn)圖上清晰區(qū)分五類(lèi)白細(xì)胞，并能更敏感地識(shí)別異常細(xì)胞。常見(jiàn)的參數(shù)組合包括：
   • 過(guò)氧化物酶通道
   • 嗜堿性粒細(xì)胞通道
   • 核酸熒光通道
   • 淋巴細(xì)胞亞群通道
代表品牌： 希森美康（Sysmex）的XN/XN-L系列、XE/XT系列；貝克曼庫(kù)爾特（Beckman Coulter）的DxH系列；西門(mén)子醫(yī)療（Siemens Healthineers）的Atellica系列、Advia系列；邁瑞（Mindray）的BC系列；雅培（Abbott）的CELL-DYN Sapphire等。

檢測(cè)方法

白細(xì)胞直方圖/散點(diǎn)圖的生成過(guò)程如下：

1. 樣本前處理： 全血標(biāo)本與特定的溶血?jiǎng)?、稀釋液?或染色液在儀器內(nèi)部或預(yù)分析模塊中混合。溶血?jiǎng)┻x擇性溶解紅細(xì)胞和血小板（部分儀器有血小板鞘流設(shè)計(jì)避免干擾），并作用于白細(xì)胞膜使其部分通透以便染料進(jìn)入。
2. 細(xì)胞測(cè)量：
• 電阻抗法： 處理后的細(xì)胞懸液流經(jīng)一個(gè)帶小孔的傳感區(qū)。細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí)產(chǎn)生與其體積成正比的電阻脈沖信號(hào)。
• 流式細(xì)胞術(shù)法： 細(xì)胞在鞘液包裹下單行流經(jīng)流動(dòng)池的檢測(cè)點(diǎn)（激光照射區(qū)）。儀器檢測(cè)細(xì)胞產(chǎn)生的散射光信號(hào)（FSC, SSC）和/或熒光信號(hào)。
3. 信號(hào)處理與繪圖： 儀器將檢測(cè)到的每個(gè)細(xì)胞的電信號(hào)或光信號(hào)轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號(hào)。根據(jù)設(shè)定的參數(shù)（如體積大小、散射光強(qiáng)度、熒光強(qiáng)度），將每個(gè)細(xì)胞在二維坐標(biāo)圖（直方圖或散點(diǎn)圖）上進(jìn)行定位。一個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)（或一類(lèi)）細(xì)胞。
4. 數(shù)據(jù)分析與分類(lèi)： 儀器內(nèi)置的復(fù)雜算法（基于大量正常和異常樣本建立的數(shù)據(jù)庫(kù)和分類(lèi)規(guī)則）分析圖形上細(xì)胞的分布特征，識(shí)別不同的細(xì)胞群簇，計(jì)算各類(lèi)細(xì)胞的百分比和絕對(duì)值。
5. 結(jié)果審核與報(bào)警： 儀器根據(jù)預(yù)設(shè)規(guī)則判斷圖形是否正常、是否符合特定模式、是否存在異常細(xì)胞群或干擾因素，并據(jù)此發(fā)出報(bào)警信息，提示檢驗(yàn)人員進(jìn)行復(fù)核。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

白細(xì)胞直方圖/散點(diǎn)圖檢測(cè)的質(zhì)量控制和標(biāo)準(zhǔn)化至關(guān)重要，主要依據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)范：

1. 國(guó)際臨床血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（ICSH）指南： ICSH發(fā)布的指南（如關(guān)于自動(dòng)化血液分析儀的性能評(píng)價(jià)、參考方法等）是行業(yè)的重要參考。
2. 臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)（CLSI）文件： 關(guān)鍵文件包括：
   • H20-A2: Reference Leukocyte (WBC) Differential Count (Proportional) and Evaluation of Instrumental Methods: 提供了評(píng)估自動(dòng)白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)系統(tǒng)準(zhǔn)確性的參考方法和程序。
   • H26-A2: Validation, Verification, and Quality Assurance of Automated Hematology Analyzers: 規(guī)定了自動(dòng)化血液分析儀（包括白細(xì)胞分類(lèi)）的安裝驗(yàn)證、性能驗(yàn)證和持續(xù)質(zhì)量保證的要求。
   • EP系列文件 (如EP05, EP09, EP15)： 關(guān)于精密度、方法學(xué)比對(duì)、用戶(hù)質(zhì)控程序等的標(biāo)準(zhǔn)。
3. 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)（EQA）/能力驗(yàn)證（PT）：
   • 每日使用配套質(zhì)控品進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，監(jiān)控儀器的精密度和穩(wěn)定性，確保直方圖/散點(diǎn)圖模式在控。
   • 定期參加權(quán)威機(jī)構(gòu)組織的EQA/PT計(jì)劃，評(píng)估實(shí)驗(yàn)室白細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性和與其他實(shí)驗(yàn)室的一致性。
4. 儀器制造商說(shuō)明書(shū)和性能規(guī)范： 遵循制造商提供的操作手冊(cè)、維護(hù)程序、性能規(guī)格（精密度、攜帶污染率、線(xiàn)性范圍、可比性、參考區(qū)間等）和報(bào)警規(guī)則設(shè)置建議。
5. 復(fù)檢規(guī)則（Reflex Testing Rules）： 遵循國(guó)際血液學(xué)復(fù)檢專(zhuān)家組共識(shí)（如ISLH共識(shí)）或?qū)嶒?yàn)室根據(jù)自身情況制定的復(fù)檢規(guī)則。這些規(guī)則明確規(guī)定了哪些異常的直方圖/散點(diǎn)圖模式、報(bào)警信息或定量結(jié)果閾值必須觸發(fā)人工顯微鏡鏡檢復(fù)核，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。
6. 標(biāo)準(zhǔn)化操作程序（SOP）： 實(shí)驗(yàn)室必須建立詳細(xì)的SOP，涵蓋標(biāo)本采集、運(yùn)輸、處理、