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耐膽鹽革蘭氏陰性菌檢測

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發(fā)布時間：2025-08-01 19:42:38 更新時間：2025-07-31 19:42:38

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

耐膽鹽革蘭氏陰性菌檢測概述

耐膽鹽革蘭氏陰性菌是指能夠在含有膽鹽的培養(yǎng)基中生長繁殖的一類革蘭氏陰性細(xì)菌，常見于環(huán)境、食品及藥品中。這類細(xì)菌通常具有較強(qiáng)的環(huán)境適應(yīng)性和潛在致病性，其檢測在食品安全、藥品質(zhì)量控制、臨床診斷和環(huán)境監(jiān)測等領(lǐng)域具有重要意義。通過檢測樣品中耐膽鹽革蘭氏陰性菌的存在及數(shù)量，可評估產(chǎn)品或環(huán)境的衛(wèi)生狀況、潛在的微生物污染風(fēng)險，為采取有效的控制措施提供科學(xué)依據(jù)。常見的目標(biāo)菌包括大腸埃希氏菌、沙門氏菌、志賀氏菌等腸道病原菌或指示菌。

檢測項(xiàng)目

耐膽鹽革蘭氏陰性菌檢測的核心項(xiàng)目主要包括：
- 膽鹽耐受能力確認(rèn)：在含特定濃度膽鹽的培養(yǎng)基中的生長情況。
- 革蘭氏染色反應(yīng)：確認(rèn)為革蘭氏陰性形態(tài)（紅色桿菌）。
- 氧化酶試驗(yàn)：區(qū)分腸桿菌科（氧化酶陰性）與非發(fā)酵菌等。
- 選擇性分離與計數(shù)：在專用平板上分離目標(biāo)菌并計算菌落形成單位數(shù)（CFU/g 或 CFU/mL）。
根據(jù)具體應(yīng)用場景，還可進(jìn)一步進(jìn)行生化鑒定（如API 20E系統(tǒng)）、血清學(xué)分型或分子生物學(xué)鑒定（如特定毒力基因檢測）。

檢測儀器

檢測過程中需使用多種精密儀器以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，主要包括：
- 微生物培養(yǎng)箱：提供恒溫環(huán)境（通常35-37°C）用于樣品培養(yǎng)。
- 生物安全柜：提供無菌操作環(huán)境，保護(hù)操作者和樣品。
- 高壓蒸汽滅菌器：對培養(yǎng)基、器械及廢棄物進(jìn)行滅菌處理。
- 顯微鏡：用于革蘭氏染色結(jié)果的觀察。
- 菌落計數(shù)器/自動菌落分析儀：用于菌落計數(shù)。
- PCR儀及電泳設(shè)備：用于分子生物學(xué)鑒定（如需要）。
- 酶標(biāo)儀/生化鑒定系統(tǒng)：用于自動化生化反應(yīng)測試。

檢測方法

檢測通常遵循標(biāo)準(zhǔn)化流程，主要步驟包括：
1. 樣品前處理：根據(jù)樣品類型（固體、液體）進(jìn)行均質(zhì)、稀釋等。
2. 增菌培養(yǎng)：將樣品接種到含膽鹽的液體增菌培養(yǎng)基（如腸道菌增菌肉湯EE Broth）中，在適宜溫度下培養(yǎng)18-24小時。
3. 分離培養(yǎng)：將增菌液或稀釋液劃線接種到含膽鹽的選擇性/指示性瓊脂平板（如麥康凱瓊脂MacConkey Agar, EMB瓊脂）上，培養(yǎng)24-48小時。
4. 菌落觀察與挑選：觀察平板上是否生長出符合目標(biāo)菌特征的菌落（如在麥康凱瓊脂上呈粉紅色菌落為乳糖發(fā)酵菌）。
5. 純化與鑒定：挑取可疑菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，隨后進(jìn)行革蘭氏染色、氧化酶試驗(yàn)、關(guān)鍵生化試驗(yàn)（如IMViC試驗(yàn)）等。
6. 確認(rèn)與計數(shù)：對符合耐膽鹽革蘭氏陰性菌特性的分離株進(jìn)行確認(rèn)，并根據(jù)平板菌落數(shù)計算原始樣品中的菌量。

關(guān)鍵的“耐膽鹽”特性通常通過其在含膽鹽的選擇性培養(yǎng)基上的生長能力來判定。特定情況下，可進(jìn)行膽鹽濃度梯度實(shí)驗(yàn)，觀察細(xì)菌在不同濃度膽鹽下的生長抑制情況。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

耐膽鹽革蘭氏陰性菌檢測需嚴(yán)格遵循國家或國際公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)方法，以確保結(jié)果的可比性和權(quán)威性。主要參考標(biāo)準(zhǔn)包括：
- 中國國家標(biāo)準(zhǔn) (GB)：
  ? GB 4789.3-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 大腸菌群計數(shù)》 - 涉及膽鹽乳糖發(fā)酵管的應(yīng)用。
  ? GB 4789.4-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 沙門氏菌檢驗(yàn)》 - 使用含膽鹽的選擇性增菌和分離步驟。
  ? 《中華人民共和國藥典》（現(xiàn)行版）通則<1105>、<1106>等非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查中關(guān)于耐膽鹽革蘭陰性菌的控制菌檢查法。
- 國際標(biāo)準(zhǔn) (ISO)：
  ? ISO 21528-1:2017 & 21528-2:2017 《Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection and enumeration of Enterobacteriaceae》 - 詳細(xì)規(guī)定了腸桿菌科（多為耐膽鹽革蘭陰性菌）的檢測計數(shù)方法。
  ? ISO 6579-1:2017 《Microbiology of the food chain - Horizontal method for the detection, enumeration and serotyping of Salmonella》 - 沙門氏菌檢測金標(biāo)準(zhǔn)，包含膽鹽應(yīng)用。
- 美國標(biāo)準(zhǔn) (USP/FDA BAM)：
  ? 《USP》 <62> Microbiological Examination of Nonsterile Products: Tests for Specified Microorganisms - 明確對大腸埃希氏菌、沙門氏菌等耐膽鹽菌的檢測要求。
  ? FDA Bacteriological Analytical Manual (BAM) - 提供詳細(xì)的食品病原菌檢測方法。

這些標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了培養(yǎng)基成分（包括膽鹽種類與濃度，如牛膽鹽或去氧膽酸鈉）、培養(yǎng)條件、操作步驟、結(jié)果判讀和報告要求。實(shí)驗(yàn)室需定期進(jìn)行方法驗(yàn)證和質(zhì)控（如使用標(biāo)準(zhǔn)菌株）以確保符合標(biāo)準(zhǔn)要求。