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甲氧芐啶（甲氧芐氨嘧啶）（三甲氧芐胺嘧啶）檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-27 07:59:28 更新時(shí)間：2025-07-26 07:59:29

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

甲氧芐啶（甲氧芐氨嘧啶/三甲氧芐胺嘧啶）檢測(cè)技術(shù)概述

甲氧芐啶（Trimethoprim，TMP），又稱甲氧芐氨嘧啶或三甲氧芐胺嘧啶，是一種人工合成的廣譜抗菌藥，屬于二氫葉酸還原酶抑制劑。它常與磺胺類藥物（如磺胺甲噁唑）聯(lián)用（復(fù)方新諾明），通過(guò)雙重阻斷細(xì)菌葉酸代謝途徑，顯著增強(qiáng)抗菌效果。在畜牧業(yè)和水產(chǎn)養(yǎng)殖中，甲氧芐啶也被廣泛應(yīng)用以防治細(xì)菌性疾病。然而，其不合理使用可能導(dǎo)致在動(dòng)物源性食品（如肉類、蛋類、奶類、水產(chǎn)品）及環(huán)境中殘留，長(zhǎng)期低劑量攝入可能對(duì)人體健康產(chǎn)生潛在風(fēng)險(xiǎn)，如干擾腸道菌群、誘導(dǎo)細(xì)菌耐藥性等。因此，建立靈敏、準(zhǔn)確、高效的甲氧芐啶殘留檢測(cè)方法，對(duì)保障食品安全、維護(hù)消費(fèi)者健康、確保進(jìn)出口貿(mào)易符合法規(guī)要求至關(guān)重要。全球主要國(guó)家和地區(qū)（如中國(guó)、歐盟、美國(guó)、日本）均制定了嚴(yán)格的甲氧芐啶在各類食品中的最大殘留限量（MRLs）。

檢測(cè)項(xiàng)目

甲氧芐啶的檢測(cè)主要聚焦于其在各類基質(zhì)中的殘留量分析，核心項(xiàng)目包括：

1. 動(dòng)物源性食品：肌肉組織（豬、牛、羊、禽等）、肝臟、腎臟、脂肪、蛋類、乳及乳制品（牛奶、奶粉、奶酪等）、水產(chǎn)品（魚、蝦、蟹等）中的甲氧芐啶殘留量測(cè)定。

2. 其他食品：蜂蜜中的甲氧芐啶殘留檢測(cè)（蜜蜂養(yǎng)殖中可能使用）。

3. 飼料：配合飼料、濃縮飼料、預(yù)混合飼料及飼料原料中甲氧芐啶的添加量或殘留量監(jiān)控。

4. 環(huán)境樣品：水體（養(yǎng)殖廢水、地表水）、土壤中甲氧芐啶的污染狀況監(jiān)測(cè)。

檢測(cè)儀器

甲氧芐啶殘留檢測(cè)的核心依賴于高靈敏度和高選擇性的分析儀器：

1. 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀 (LC-MS/MS)：這是當(dāng)前檢測(cè)甲氧芐啶及其他抗菌藥物殘留的金標(biāo)準(zhǔn)儀器。液相色譜（LC）實(shí)現(xiàn)復(fù)雜基質(zhì)中甲氧芐啶的有效分離，串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS）通過(guò)選擇反應(yīng)監(jiān)測(cè)（SRM）或多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式，提供極高的選擇性和靈敏度，能準(zhǔn)確定量和確證目標(biāo)物。

2. 高效液相色譜儀(HPLC) 與紫外/二極管陣列檢測(cè)器(UV/DAD)：作為一種經(jīng)濟(jì)有效的替代方案，HPLC-UV/DAD 也常用于甲氧芐啶的常規(guī)篩選和定量分析，但其靈敏度和抗基質(zhì)干擾能力通常低于LC-MS/MS。

3. 樣品前處理設(shè)備： - 高速冷凍離心機(jī)：用于樣品均質(zhì)、提取液分離。 - 渦旋混合器/振蕩器：用于樣品提取過(guò)程中的充分混勻。 - 固相萃取(SPE)裝置：配備真空泵，用于復(fù)雜樣品中甲氧芐啶的凈化和富集（常用C18、HLB、MCX等填料）。 - 氮吹儀：用于濃縮提取液。 - 分析天平：精確稱量樣品和試劑。 - pH計(jì)：控制提取和凈化過(guò)程中的酸堿度。

4. QuEChERS裝置：快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、高效、耐用、安全的樣品前處理技術(shù)所需的相關(guān)離心管、鹽包、分散固相萃取填料等。

檢測(cè)方法

甲氧芐啶的檢測(cè)流程主要包括樣品前處理和儀器分析兩大步驟：

1. 樣品前處理： - 提取：將代表性樣品均質(zhì)后，通常使用有機(jī)溶劑（如乙腈、酸化乙腈、甲醇）或緩沖溶液進(jìn)行振蕩/超聲提取，以將目標(biāo)物從基質(zhì)中溶解出來(lái)。常加入EDTA、Na₂EDTA等螯合劑結(jié)合金屬離子，提高回收率。 - 凈化：提取液往往含有大量干擾物質(zhì)（脂肪、蛋白、色素等），需要進(jìn)行凈化去除。常用方法包括： * 液液萃取(LLE)：利用目標(biāo)物在不同溶劑中的分配系數(shù)差異進(jìn)行分離。 * 固相萃取(SPE)：利用吸附劑選擇性吸附目標(biāo)物或雜質(zhì)，再選擇性洗脫目標(biāo)物。C18、親水親脂平衡柱（HLB）、混合陽(yáng)離子交換柱（MCX）是常用填料。 * QuEChERS法：特別適用于果蔬、肉類等基質(zhì)，操作快速簡(jiǎn)便。通常先加乙腈（含酸）提取，再通過(guò)加入MgSO₄、NaCl等鹽析除水，最后利用PSA（乙二胺-N-丙基硅烷）、C18、GCB（石墨化碳黑）等分散固相萃取吸附劑凈化。

2. 儀器分析： - LC-MS/MS分析： * 色譜分離：常用反相C18或C8色譜柱，流動(dòng)相多為水（含0.1%甲酸或甲酸銨緩沖液）和甲醇或乙腈梯度洗脫。 * 質(zhì)譜檢測(cè)：采用電噴霧離子源（ESI+），甲氧芐啶易質(zhì)子化形成[M+H]⁺離子（m/z 291）。選擇特征母離子，通過(guò)碰撞誘導(dǎo)解離（CID）產(chǎn)生子離子（如m/z 261，230），在MRM模式下進(jìn)行高靈敏度、高選擇性檢測(cè)。

- HPLC-UV/DAD分析：通常在270-280 nm附近波長(zhǎng)處檢測(cè)甲氧芐啶特征紫外吸收峰。色譜柱和流動(dòng)相選擇與LC類似。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

國(guó)內(nèi)外針對(duì)甲氧芐啶殘留檢測(cè)制定了多項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)方法，為檢測(cè)提供規(guī)范和依據(jù)：

1. 中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB)和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)： - GB 31650-2021 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》：規(guī)定了甲氧芐啶在各類可食動(dòng)物組織中的MRLs。 - GB/T 21330-2022 《動(dòng)物源性食品中甲氧芐啶殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》：規(guī)定了使用LC-MS/MS檢測(cè)動(dòng)物肌肉、內(nèi)臟、水產(chǎn)品等中TMP的標(biāo)準(zhǔn)方法。 - 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第316號(hào) 《動(dòng)物性食品中獸藥最大殘留限量》：包含甲氧芐啶限量標(biāo)準(zhǔn)。 - SN/T 2538-2010 《進(jìn)出口動(dòng)物源性食品中二甲氧芐氨嘧啶、三甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶殘留量的檢測(cè)方法液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》（適用于甲氧芐啶即三甲氧芐氨嘧啶）。

2. 國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)： - 歐盟(EU)：歐盟委員會(huì)法規(guī) (EU) No 37/2010 規(guī)定了食品動(dòng)物源產(chǎn)品中甲氧芐啶的MRLs。推薦方法常參考?xì)W盟決議2002/657/EC關(guān)于質(zhì)譜確證方法性能準(zhǔn)則。 - 美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)：Pesticide Analytical Manual (PAM) 或相關(guān)行業(yè)指南中可能包含相關(guān)方法，并設(shè)定其允許限量。 - 國(guó)際食品法典委員會(huì)(CAC)：CODEX STAN 193-1995 (Rev.) 《食品和飼料中污染物和毒素通用標(biāo)準(zhǔn)》及其附錄中可能涉及相關(guān)限量或方法指南。

3. 藥典方法：如《中華人民共和國(guó)藥典》中對(duì)于甲氧芐啶原料藥及其制劑的質(zhì)量控制方法（通常為HPLC-UV）。

小結(jié)

甲氧芐啶（甲氧芐氨嘧啶/三甲氧芐胺嘧啶）的精準(zhǔn)檢測(cè)是保障食品安全、評(píng)估環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)、確保合規(guī)貿(mào)易的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。以LC-MS/MS為核心的高靈敏度、高特異性分析技術(shù)，結(jié)合高效、可靠的樣品前處理方法（如SPE、QuEChERS），并嚴(yán)格遵循國(guó)內(nèi)外權(quán)威標(biāo)準(zhǔn)（如GB/T 21330、歐盟標(biāo)準(zhǔn)），構(gòu)成了當(dāng)前主流檢測(cè)體系。持續(xù)優(yōu)化檢測(cè)方法的靈敏度、通量、成本效率和環(huán)保性，對(duì)應(yīng)對(duì)日益增長(zhǎng)的監(jiān)管需求和復(fù)雜基質(zhì)挑戰(zhàn)具有重要意義。