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使用中消毒藥劑微生物污染檢測(cè)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-26 21:16:22 更新時(shí)間：2025-07-25 21:16:22

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

使用中消毒藥劑微生物污染檢測(cè)

消毒藥劑是預(yù)防和控制感染的關(guān)鍵手段，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療機(jī)構(gòu)、公共場(chǎng)所、食品加工、制藥工業(yè)及家庭環(huán)境。其有效性直接關(guān)系到公共衛(wèi)生安全。然而，消毒藥劑在使用過(guò)程中，可能因配制不當(dāng)、儲(chǔ)存條件不佳（如光照、溫度、濕度）、容器污染、頻繁開(kāi)啟或使用時(shí)間過(guò)長(zhǎng)等原因，自身受到微生物污染。被污染的消毒藥劑不僅完全喪失殺菌能力，反而可能成為傳播病原體的"幫兇"，導(dǎo)致嚴(yán)重的交叉感染甚至引發(fā)院內(nèi)感染暴發(fā)。因此，對(duì)"使用中消毒藥劑"（In-Use Disinfectant Solutions）進(jìn)行定期的微生物污染檢測(cè)，是評(píng)估其實(shí)際消毒效能、確保消毒效果可靠性的不可或缺的質(zhì)量控制環(huán)節(jié)。這項(xiàng)檢測(cè)旨在及時(shí)發(fā)現(xiàn)并淘汰不合格的消毒液，杜絕因消毒劑失效帶來(lái)的潛在感染風(fēng)險(xiǎn)。

檢測(cè)項(xiàng)目

使用中消毒藥劑微生物污染檢測(cè)的核心項(xiàng)目是計(jì)數(shù)其中的存活微生物數(shù)量，主要指標(biāo)包括：

1. 需氧菌總數(shù) (Total Aerobic Microbial Count, TAMC)：檢測(cè)能在有氧條件下生長(zhǎng)的細(xì)菌和部分真菌的總量，反映消毒劑的整體污染狀況。

2. 霉菌和酵母菌總數(shù) (Total Combined Molds and Yeasts Count, TYMC)：專門(mén)檢測(cè)消毒劑中可能存在的真菌污染情況。

3. 特定指示菌篩查：在某些特定要求或懷疑污染源的情況下，可能增加對(duì)特定指示菌（如銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌等）的定性檢測(cè)。

檢測(cè)儀器

進(jìn)行微生物污染檢測(cè)需要依賴一系列專業(yè)實(shí)驗(yàn)室儀器，主要包括：

1. 無(wú)菌操作設(shè)備： * 生物安全柜 (Biosafety Cabinet, BSC) 或超凈工作臺(tái) (Laminar Flow Hood)：提供無(wú)菌操作環(huán)境，防止樣品污染環(huán)境和操作人員，也防止環(huán)境微生物污染樣品。

2. 培養(yǎng)設(shè)備： * 恒溫培養(yǎng)箱 (Incubator)：提供微生物生長(zhǎng)所需的恒定溫度（通常細(xì)菌32.5±2.5°C或30-35°C培養(yǎng)2-3天；霉菌/酵母菌22.5±2.5°C或20-25°C培養(yǎng)5-7天）。 * 恒溫恒濕培養(yǎng)箱：對(duì)于有特殊濕度要求的真菌培養(yǎng)更佳。

3. 稀釋與混勻設(shè)備： * 渦旋振蕩器 (Vortex Mixer)：確保樣品或稀釋液充分混勻。 * 移液器 (Pipettes) 及無(wú)菌吸頭：精確量取樣品和稀釋液。

4. 過(guò)濾與培養(yǎng)裝置： * 薄膜過(guò)濾裝置 (Membrane Filtration Apparatus)：包含真空泵、過(guò)濾杯、濾膜底座等，用于樣品過(guò)濾。 * 無(wú)菌濾膜 (Membrane Filters, 孔徑通常0.45μm)：用于截留樣品中的微生物。 * 無(wú)菌培養(yǎng)皿 (Petri Dishes)：用于傾注法接種或放置濾膜。 * 無(wú)菌培養(yǎng)基：如胰酪大豆胨瓊脂（TSA，用于TAMC）、沙氏葡萄糖瓊脂（SDA，用于TYMC）或中和劑添加培養(yǎng)基（如含聚山梨酯80和卵磷脂的TSA/TSB）。

5. 計(jì)數(shù)設(shè)備： * 菌落計(jì)數(shù)器 (Colony Counter)：便于準(zhǔn)確計(jì)數(shù)平板上的菌落形成單位 (CFU)。

6. 滅菌設(shè)備： * 高壓蒸汽滅菌鍋 (Autoclave)：用于培養(yǎng)基、稀釋液、玻璃器皿、濾膜等的滅菌。

檢測(cè)方法

針對(duì)使用中消毒藥劑的特點(diǎn)（可能含有殘余殺菌成分），需采用能有效中和其殺菌活性的方法，常用方法有兩種：

1. 薄膜過(guò)濾法 (Membrane Filtration Method)： * 原理：利用濾膜（孔徑0.45μm）截留樣品中的微生物。 * 步驟：取一定體積（通常10-100mL）的使用中消毒劑樣品。選用含有合適中和劑（如聚山梨酯80和卵磷脂）的緩沖液（如pH7.0磷酸鹽緩沖液）進(jìn)行梯度稀釋（中和殘余殺菌劑）。將稀釋液通過(guò)無(wú)菌濾膜裝置抽濾。過(guò)濾后，用含中和劑的緩沖液沖洗濾膜數(shù)次（去除殘留抑菌物質(zhì)）。將濾膜轉(zhuǎn)移至適宜的瓊脂平板（TSA用于細(xì)菌，SDA用于真菌）上。將平板置于相應(yīng)溫度下培養(yǎng)規(guī)定時(shí)間。計(jì)數(shù)濾膜上的菌落數(shù)，計(jì)算結(jié)果（CFU/mL）。此法尤其適用于水溶性液體消毒劑。

2. 中和劑法（傾注法或涂布法）(Neutralization Method - Pour Plate or Spread Plate)： * 原理：在樣品中加入足量的中和劑，滅活消毒劑的殘余殺菌活性，然后進(jìn)行常規(guī)的微生物計(jì)數(shù)。 * 步驟：取一定體積（通常1-10mL）的使用中消毒劑樣品，加入含有足量中和劑（如聚山梨酯80、卵磷脂、硫代硫酸鈉、組氨酸等）的稀釋液中，充分混勻并作用足夠時(shí)間（確保中和完全）。將此混合液進(jìn)行系列梯度稀釋。選擇2-3個(gè)適宜的稀釋度，每個(gè)稀釋度取1mL加入無(wú)菌平皿中（傾注法），或取0.1mL涂布于已凝固的瓊脂平板上（涂布法）。傾注法隨即倒入約15mL冷卻至45°C左右的相應(yīng)培養(yǎng)基（含中和劑），混勻凝固；涂布法直接涂布均勻。將平板置于相應(yīng)溫度下培養(yǎng)規(guī)定時(shí)間。計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，計(jì)算結(jié)果（CFU/mL）。此法操作相對(duì)簡(jiǎn)單，但中和有效性驗(yàn)證至關(guān)重要。

關(guān)鍵環(huán)節(jié)：無(wú)論哪種方法，中和劑有效性驗(yàn)證是必不可少的步驟，必須確保所使用的中和劑-培養(yǎng)基系統(tǒng)能完全中和消毒劑的殺菌活性并對(duì)微生物無(wú)毒性。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

使用中消毒藥劑微生物污染檢測(cè)需遵循相關(guān)的國(guó)家、行業(yè)或國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，主要標(biāo)準(zhǔn)包括：

1. 中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)： * GB 15982-2012《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》：該標(biāo)準(zhǔn)明確規(guī)定了醫(yī)院各類環(huán)境、物品的消毒衛(wèi)生要求，其中對(duì)"使用中消毒液"的染菌量有明確限值（≤100 CFU/mL），并規(guī)定了具體的檢測(cè)方法（常采用傾注法或涂布法，強(qiáng)調(diào)中和劑的使用）。 * GB/T 38502-2020《消毒劑實(shí)驗(yàn)室殺菌效果檢驗(yàn)方法》：雖然主要針對(duì)消毒劑殺菌效果的評(píng)價(jià)，但其附錄或相關(guān)部分可能涉及中和劑選擇和驗(yàn)證方法，對(duì)污染檢測(cè)有參考價(jià)值。 * 《消毒技術(shù)規(guī)范》（衛(wèi)生部）：提供了詳細(xì)的消毒劑有效成分含量測(cè)定、殺菌效果評(píng)價(jià)以及微生物污染檢測(cè)的技術(shù)指南。

2. 國(guó)際/區(qū)域標(biāo)準(zhǔn)： * ISO 11737-1:2018《醫(yī)療保健產(chǎn)品滅菌 - 微生物學(xué)方法 - 第1部分：產(chǎn)品上微生物總數(shù)的測(cè)定》：雖然不是專門(mén)針對(duì)消毒劑，但其微生物計(jì)數(shù)方法（尤其是薄膜過(guò)濾法和中和劑法）的原理和嚴(yán)謹(jǐn)性被廣泛借鑒用于消毒劑污染檢測(cè)。 * EN 13727:2012+A2:2015《化學(xué)消毒劑和防腐劑 - 醫(yī)療器械消毒的殺菌活性評(píng)價(jià)用定量懸浮試驗(yàn) - 試驗(yàn)方法和要求（第2階段，第1步）》及類似標(biāo)準(zhǔn)：同樣主要評(píng)價(jià)殺菌效果，但其詳細(xì)的中和劑選擇和驗(yàn)證程序是污染檢測(cè)方法的重要參考基礎(chǔ)。

3. 判定標(biāo)準(zhǔn)： * 最常用且具強(qiáng)制性的判定標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)GB 15982-2012：使用中皮膚黏膜消毒液染菌量應(yīng) ≤10 CFU/mL；其他使用中消毒液染菌量應(yīng) ≤100 CFU/mL。檢測(cè)到任何致病性微生物（如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、乙型溶血性鏈球菌等）均為不合格。

綜上所述，對(duì)使用中消毒藥劑進(jìn)行嚴(yán)格的微生物污染檢測(cè)，是保障其持續(xù)有效、預(yù)防感染傳播的關(guān)鍵防線。通過(guò)規(guī)范的檢測(cè)項(xiàng)目、精密的儀器設(shè)備、科學(xué)有效的檢測(cè)方法（特別是可靠的中和）以及遵循權(quán)威的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)與限值，才能準(zhǔn)確評(píng)估消毒劑在使用狀態(tài)下的生物安全性，為公共健康筑起堅(jiān)實(shí)的屏障。