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霉菌及酵母菌檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-26 18:24:15 更新時(shí)間：2025-07-25 18:24:16

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

PCR及酵母菌檢測

本檢測項(xiàng)目采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)，針對臨床樣本（如血液、痰液、腦脊液、組織、分泌物、尿液等）或特定樣本（如食品、環(huán)境拭子）中是否存在酵母菌（Yeast）的DNA進(jìn)行特異性擴(kuò)增和檢測。

檢測目的

主要用于快速、靈敏、特異地診斷酵母菌感染（如念珠菌病、隱球菌病等），或檢測特定樣本中是否含有酵母菌污染。相比傳統(tǒng)培養(yǎng)方法，PCR檢測具有耗時(shí)短、靈敏度高、不受前期抗生素使用影響等優(yōu)點(diǎn)，尤其適用于難以培養(yǎng)或生長緩慢的酵母菌診斷，以及早期或深部感染的輔助診斷。

檢測原理

基于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）原理：

核酸提取： 從樣本中提取總DNA（包含潛在的酵母菌DNA）。
PCR擴(kuò)增： 使用針對酵母菌高度保守的特異性基因片段（如18S rRNA基因、ITS區(qū)域、或特定種屬基因如念珠菌的CaERG11、隱球菌的CNLAC1）設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行擴(kuò)增。該步驟在熱循環(huán)儀中完成，經(jīng)過變性、退火、延伸多個(gè)循環(huán)，將目標(biāo)DNA片段指數(shù)級擴(kuò)增。
檢測與分析： 通過瓊脂糖凝膠電泳結(jié)合溴化乙錠（或其他熒光染料）染色觀察擴(kuò)增產(chǎn)物條帶，或采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）在擴(kuò)增過程中實(shí)時(shí)監(jiān)測熒光信號，判斷目標(biāo)DNA是否存在及其相對含量（qPCR）。部分方法可設(shè)計(jì)種屬特異性的引物或探針進(jìn)行多重PCR或測序分析，以區(qū)分不同的酵母菌種屬（如區(qū)分白色念珠菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、新型隱球菌/格特隱球菌等）。

樣本要求

臨床樣本： 無菌采集的血液（EDTA抗凝管或血培養(yǎng)瓶）、腦脊液（無菌管）、無菌體液、組織（無菌容器）、肺泡灌洗液（無菌容器）、痰液（清潔口腔后深咳，無菌容器）、生殖道分泌物（無菌拭子）、尿液（清潔中段尿，無菌容器）等。具體樣本類型和采集量請遵循醫(yī)囑或?qū)嶒?yàn)室要求。
非臨床樣本： 如食品、環(huán)境拭子等，需按相關(guān)規(guī)范進(jìn)行無菌采集和處理。
運(yùn)輸與保存： 采集后應(yīng)盡快（通常在2-4小時(shí)內(nèi)）送檢。若不能及時(shí)送檢，需按實(shí)驗(yàn)室要求冷藏（2-8°C）或冷凍（-20°C或更低）保存。避免反復(fù)凍融。

報(bào)告解讀

陽性結(jié)果： 表示在樣本中檢測到了目標(biāo)酵母菌的特異性DNA片段。提示存在該酵母菌的感染或定植/污染。陽性結(jié)果需結(jié)合患者的臨床癥狀、體征、其他實(shí)驗(yàn)室檢查（如培養(yǎng)、G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)、影像學(xué)）及流行病學(xué)史進(jìn)行綜合判斷。qPCR結(jié)果可提供半定量信息（如Ct值），但解讀需謹(jǐn)慎，Ct值與真菌載量、感染嚴(yán)重程度的相關(guān)性因方法、樣本類型和病原體而異。
陰性結(jié)果： 表示在本次檢測中未檢測到目標(biāo)酵母菌的特異性DNA片段。但陰性結(jié)果不能完全排除感染，尤其是在樣本中病原體載量過低、樣本采集不當(dāng)、送檢延誤、存在PCR抑制物或引物探針不匹配特定罕見菌株時(shí)。
種屬鑒定結(jié)果： 若檢測包含種屬鑒定，報(bào)告會(huì)明確指明檢出的酵母菌種屬（如“檢出白色念珠菌DNA”、“檢出新型隱球菌DNA”）。這對于指導(dǎo)抗真菌藥物的精準(zhǔn)選擇（如氟康唑?qū)饣钪榫?、克柔念珠菌效果差，隱球菌首選兩性霉素B+5FC）具有重要意義。

注意事項(xiàng)

PCR檢測靈敏度高，但對實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境（防止氣溶膠污染）和操作規(guī)范性（防止樣本間交叉污染）要求嚴(yán)格，假陽性和假陰性均可能發(fā)生。
檢測結(jié)果僅針對引物/探針設(shè)計(jì)所針對的特定酵母菌種屬。未涵蓋的種屬或新出現(xiàn)的菌株可能無法檢出。
陽性結(jié)果需區(qū)分是感染、定植還是污染，特別是來自非無菌部位（如痰液、生殖道）的樣本。
陰性結(jié)果不能排除感染。
本檢測是輔助診斷工具，臨床決策應(yīng)結(jié)合患者的整體情況。