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耐熱大腸球菌檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-21 21:11:05 更新時(shí)間：2025-07-20 21:11:05

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

耐熱大腸球菌檢測簡介

耐熱大腸球菌（Thermotolerant coliforms），又稱耐熱大腸菌群，是總大腸菌群的一個(gè)重要子集，主要包括能在44.5°C高溫下生長并產(chǎn)生氣體的細(xì)菌（如大腸桿菌E. coli）。這類細(xì)菌廣泛存在于人類和動(dòng)物糞便中，是評(píng)估水、食品、環(huán)境樣本衛(wèi)生質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。檢測耐熱大腸球菌具有重要的公共衛(wèi)生意義，因?yàn)樗芸焖僦甘舅?、食品加工廠或公共場所的糞便污染風(fēng)險(xiǎn)，從而預(yù)防水源性傳染?。ㄈ绺篂a、痢疾等）。在飲用水安全、食品衛(wèi)生監(jiān)管以及環(huán)境監(jiān)測中，耐熱大腸球菌的檢測被視為基礎(chǔ)工作，全球范圍內(nèi)都有嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)要求。例如，世界衛(wèi)生組織（WHO）建議飲用水中耐熱大腸菌群的濃度應(yīng)為0 CFU/100ml，以確保人類健康安全。隨著微生物技術(shù)的發(fā)展，檢測方法不斷優(yōu)化，幫助提升檢測效率和準(zhǔn)確性。

檢測項(xiàng)目

耐熱大腸球菌的檢測項(xiàng)目主要圍繞其存在性、數(shù)量和類型進(jìn)行。核心項(xiàng)目包括：首先，定性檢測，即確認(rèn)樣品中是否含有耐熱大腸菌群；其次，定量檢測，通過計(jì)數(shù)法評(píng)估菌群的濃度（例如，以菌落形成單位CFU/100ml表示）；最后，分型檢測，區(qū)分耐熱大腸球菌中的特定菌種（如大腸桿菌）。這些項(xiàng)目適用于多種場景：飲用水源檢測關(guān)注濃度是否超標(biāo)（如超過10 CFU/100ml視為污染），食品加工環(huán)節(jié)則強(qiáng)調(diào)防止污染源擴(kuò)散，而環(huán)境監(jiān)測則用于評(píng)估廢水處理效果。此外，還可擴(kuò)展至抗生素敏感性測試，以監(jiān)測耐藥菌株的傳播風(fēng)險(xiǎn)。

檢測儀器

耐熱大腸球菌檢測中常用的儀器設(shè)備包括：恒溫培養(yǎng)箱（用于在44.5°C下孵育樣品，如Memmert或Thermo Scientific品牌），顯微鏡（用于觀察菌落形態(tài)，如Olympus或Leica品牌），膜過濾裝置（用于過濾樣本濃縮細(xì)菌，如Millipore濾膜系統(tǒng)），以及多管發(fā)酵設(shè)備（包括發(fā)酵管、試管架等）。其他輔助儀器有自動(dòng)計(jì)數(shù)儀（如Colilert系統(tǒng)，用于快速定量）、生物安全柜（確保無菌操作）和pH計(jì)（調(diào)整培養(yǎng)基酸堿度）。這些儀器需定期校準(zhǔn)和維護(hù)，以確保檢測結(jié)果的可靠性，例如恒溫箱的溫度誤差需控制在±0.5°C以內(nèi)。

檢測方法

耐熱大腸球菌的檢測方法主要有兩種標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)：多管發(fā)酵法（MPN法）和膜過濾法。多管發(fā)酵法是經(jīng)典方法，步驟如下：首先，將樣品稀釋后接種到乳糖發(fā)酵管中，在44.5°C培養(yǎng)24-48小時(shí)；然后，觀察產(chǎn)氣情況（陽性反應(yīng)表示耐熱菌存在），再通過伊紅美藍(lán)瓊脂平板驗(yàn)證菌落特征。膜過濾法則更適合清澈樣品：樣品經(jīng)濾膜過濾，細(xì)菌被截獲在膜上；膜置于M-Endo培養(yǎng)基上，在44.5°C培養(yǎng)24小時(shí)；最后，計(jì)數(shù)藍(lán)色或金屬光澤菌落（指示耐熱大腸桿菌）。此外，現(xiàn)代方法如酶底物法（如Colilert試劑）可快速（18-24小時(shí)）得出結(jié)果，但需結(jié)合確認(rèn)步驟以避免假陽性。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

耐熱大腸球菌的檢測標(biāo)準(zhǔn)以國際和國家規(guī)范為依據(jù)。國際標(biāo)準(zhǔn)包括ISO 9308-1（水質(zhì)檢測-膜過濾法）和ISO 16649（食品中大腸菌群檢測），這些標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了樣品處理、培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)條件和結(jié)果判讀的統(tǒng)一要求。在中國，GB/T 5750.12（生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法）詳細(xì)定義了耐熱大腸菌群的檢測流程，而GB 4789.3（食品微生物學(xué)檢驗(yàn)）則適用于食品安全領(lǐng)域。美國環(huán)保署（EPA）的方法1603和1604也提供了膜過濾和多管發(fā)酵的指導(dǎo)。關(guān)鍵標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)包括：培養(yǎng)溫度44.5±0.5°C，培養(yǎng)時(shí)間24-48小時(shí)，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為產(chǎn)氣或特定菌落特征。這些標(biāo)準(zhǔn)確保了檢測的可比性和合規(guī)性，需嚴(yán)格遵守以避免偏差。