化學(xué)性肝損傷有輔助保護功能試驗檢測概述
化學(xué)性肝損傷是指由酒精、藥物（如對乙酰氨基酚）、工業(yè)化學(xué)品（如四氯化碳、氯仿）、真菌毒素（如黃曲霉毒素）等外源性化學(xué)物質(zhì)引起的肝臟結(jié)構(gòu)與功能的損害。評估某種物質(zhì)（如保健食品、功能性成分）是否對化學(xué)性肝損傷具有輔助保護功能，需要依據(jù)特定的規(guī)范進行一系列科學(xué)嚴謹?shù)臋z測試驗。這類檢測的核心在于觀察受試物能否減輕或延緩由已知肝毒劑（常用的造模劑包括四氯化碳CCl?、D-半乳糖胺、對乙酰氨基酚APAP、酒精等）誘導(dǎo)的動物（通常為大鼠或小鼠）肝損傷程度。檢測評價體系主要圍繞肝臟功能生化指標、抗氧化能力指標及肝臟組織病理學(xué)變化三大方面展開，要求嚴格按照國家相關(guān)部門（如中國國家市場監(jiān)督管理總局/國家藥品監(jiān)督管理局）頒布的《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》或相應(yīng)標準進行。
主要檢測項目
化學(xué)性肝損傷輔助保護功能試驗通常包括以下關(guān)鍵檢測項目：
1. 血清/血漿肝功能生化指標： 這是評價肝細胞損傷最直接和常用的指標。
- 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (ALT)： 肝細胞損傷時釋放入血，活性升高是肝損傷的敏感標志。
- 天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶 (AST)： 同樣在肝細胞損傷時升高，但也存在于心肌、肌肉等組織中。
- 堿性磷酸酶 (ALP)： 反映膽汁淤積或膽管損傷。
- 總膽紅素 (TBIL) / 直接膽紅素 (DBIL)： 反映肝臟對膽紅素的攝取、結(jié)合和排泄功能，升高提示肝細胞損傷或膽汁排泄障礙。
- 總蛋白 (TP) / 白蛋白 (ALB)： 反映肝臟的合成功能。
2. 肝臟組織抗氧化能力指標： 氧化應(yīng)激是化學(xué)性肝損傷的重要機制，評估抗氧化能力至關(guān)重要。
- 超氧化物歧化酶 (SOD)： 清除超氧陰離子自由基的重要抗氧化酶。
- 谷胱甘肽過氧化物酶 (GSH-Px)： 利用谷胱甘肽還原過氧化物（如H?O?、脂質(zhì)過氧化物）的關(guān)鍵酶。
- 丙二醛 (MDA)： 脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物，反映細胞膜氧化損傷程度。
- 還原型谷胱甘肽 (GSH)： 重要的細胞內(nèi)抗氧化劑，直接參與清除自由基和解毒。
- 總抗氧化能力 (T-AOC)： 綜合反映機體或組織的整體抗氧化水平。
3. 肝臟組織病理學(xué)檢查： 這是判斷肝損傷程度和受試物保護效果的“金標準”之一。
- 光學(xué)顯微鏡檢查 (HE染色)： 觀察肝細胞變性（如氣球樣變、脂肪變性）、壞死、炎性細胞浸潤、肝小葉結(jié)構(gòu)改變、纖維化等病理變化，并進行半定量評分。
- 電子顯微鏡檢查： 觀察線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張、核固縮等亞細胞結(jié)構(gòu)的超微病理變化。
主要檢測儀器
完成上述檢測項目需要用到一系列精密儀器：
- 全自動/半自動生化分析儀： 用于高效、準確地檢測血清/血漿中的ALT、AST、ALP、TBIL、DBIL、TP、ALB等生化指標。
- 紫外/可見分光光度計： 用于比色法測定SOD、GSH-Px、MDA、GSH、T-AOC等抗氧化指標以及部分生化指標。
- 酶標儀： 適用于基于酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）或微孔板比色法的高通量檢測。
- 冷凍離心機： 用于快速分離血清/血漿、制備肝組織勻漿上清液等。
- 組織勻漿機： 用于破碎肝臟組織，制備勻漿液以測定抗氧化指標。
- 光學(xué)顯微鏡及圖像采集分析系統(tǒng)： 用于觀察HE染色后的肝組織切片，進行病理學(xué)評估、拍照和圖像分析。
- 石蠟切片機、攤片機、烤片機： 用于制備肝臟組織石蠟切片。
- 電子顯微鏡： 用于肝臟組織的超微結(jié)構(gòu)觀察（透射電鏡）。
- 精密天平、移液器、水浴鍋/恒溫箱等輔助設(shè)備。
主要檢測方法
實驗通常遵循以下核心流程和方法：
1. 動物模型建立：
- 選擇健康成年大鼠或小鼠，隨機分組（通常包括正常對照組、模型對照組、受試物低、中、高劑量組，有時還需陽性對照組）。
- 受試物組按設(shè)定劑量經(jīng)口給予受試樣品一定時間（如30天）。
- 在實驗后期（如最后幾天），除正常對照組外，其余組動物使用選定的肝毒劑（如CCl? 植物油溶液腹腔注射、酒精灌胃、APAP腹腔注射等）建立急性或亞急性肝損傷模型。
2. 樣品采集與處理：
- 末次給予肝毒劑后一定時間（如24小時或48小時），禁食，麻醉動物。
- 采集血液，離心分離血清或血漿。
- 快速摘取肝臟，稱重（計算臟器系數(shù)=肝重/體重*100%）。
- 取部分肝組織固定于福爾馬林（用于石蠟切片HE染色）或戊二醛（用于電鏡）。
- 取部分肝組織用冰冷的生理鹽水或緩沖液制成勻漿，離心取上清液用于測定抗氧化指標。
3. 指標檢測：
- 生化指標： 使用生化分析儀按試劑盒說明書檢測血清ALT、AST等。
- 抗氧化指標： 使用分光光度計或酶標儀，按照SOD、GSH-Px、MDA、GSH、T-AOC等指標的特定比色法（如黃嘌呤氧化酶法測SOD，DTNB法測GSH，硫代巴比妥酸法測MDA）進行檢測。
- 病理學(xué)檢查： 固定組織經(jīng)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、HE染色后，由病理學(xué)專業(yè)人員采用單盲或雙盲法在光鏡下觀察，根據(jù)預(yù)先設(shè)定的標準（如肝細胞變性/壞死程度、炎性細胞浸潤程度等）進行半定量評分。電鏡樣本經(jīng)固定、脫水、包埋、超薄切片、染色后在透射電鏡下觀察亞細胞結(jié)構(gòu)變化。
主要檢測標準
在中國，化學(xué)性肝損傷有輔助保護功能的檢測評價主要依據(jù)以下國家標準和規(guī)范：
- GB 15193.17-2015 《食品安全國家標準 保健食品功能學(xué)評價程序與檢驗方法規(guī)范》： 這是最核心的現(xiàn)行標準。該標準詳細規(guī)定了試驗的基本原則、實驗設(shè)計（動物選擇、分組、受試物給予方式與劑量、模型建立方法）、檢測指標和方法、結(jié)果判定標準等。判定受試物具有輔助保護功能通常需要滿足：模型對照組與正常對照組比較，肝臟病理學(xué)檢查結(jié)果差異有顯著性，且血清ALT、AST活性差異有顯著性；同時，受試物組的肝臟病理學(xué)損傷程度或血清ALT、AST活性顯著低于模型對照組。
- 《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》(2003年版)： 雖然已被GB 15193系列標準逐步替代，但其關(guān)于化學(xué)性肝損傷輔助保護功能檢驗方法（第二十一章）的內(nèi)容在歷史上是重要依據(jù)，其核心原理和方法仍被參考。
- 《保健
CMA認證
檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定證書
證書編號：241520345370
有效期至：2030年4月15日
CNAS認可
實驗室認可證書
證書編號：CNAS L22006
有效期至：2030年12月1日
ISO認證
質(zhì)量管理體系認證證書
證書編號：ISO9001-2024001
有效期至：2027年12月31日
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