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赭曲霉毒素 A檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-21 05:16:07 更新時(shí)間：2025-07-20 05:16:07

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

赭曲霉毒素A檢測(cè)：保障食品安全的關(guān)鍵防線

赭曲霉毒素A（Ochratoxin A, OTA）是由曲霉屬（如赭曲霉、碳黑曲霉）和青霉屬（如疣孢青霉）等絲狀真菌產(chǎn)生的一種具有強(qiáng)腎毒性、肝毒性、致畸性、致突變性和潛在致癌性的真菌毒素。它廣泛污染谷物（如小麥、玉米、大麥、燕麥）、咖啡豆、葡萄及葡萄酒、葡萄干、香料、堅(jiān)果、動(dòng)物飼料等多種農(nóng)產(chǎn)品及食品原料。由于其穩(wěn)定性強(qiáng)，能在加工和儲(chǔ)存過(guò)程中持續(xù)存在，并通過(guò)食物鏈富集，對(duì)人體健康構(gòu)成嚴(yán)重威脅。因此，建立靈敏、準(zhǔn)確、高效的赭曲霉毒素A檢測(cè)體系，對(duì)于監(jiān)控食品和飼料安全、保護(hù)消費(fèi)者健康、符合國(guó)內(nèi)外法規(guī)要求、促進(jìn)貿(mào)易暢通具有極其重要的意義。

檢測(cè)項(xiàng)目

赭曲霉毒素A（Ochratoxin A）是本檢測(cè)的核心目標(biāo)分析物。檢測(cè)項(xiàng)目具體包括：

定性檢測(cè)： 確認(rèn)樣品中是否存在赭曲霉毒素A。
定量檢測(cè)： 精確測(cè)定樣品中赭曲霉毒素A的含量，通常以微克每千克（μg/kg）或微克每升（μg/L）表示。這是最重要的檢測(cè)目標(biāo)，用于評(píng)估是否超出法規(guī)限量標(biāo)準(zhǔn)。
相關(guān)基質(zhì)檢測(cè)： 根據(jù)需求，可擴(kuò)展到檢測(cè)其他赭曲霉毒素（如赭曲霉毒素B、C），但OTA是主要關(guān)注對(duì)象和最常檢測(cè)的指標(biāo)。

檢測(cè)儀器

赭曲霉毒素A的分析檢測(cè)依賴(lài)于一系列精密的分析儀器，核心設(shè)備包括：

高效液相色譜儀（HPLC）： 這是目前檢測(cè)OTA最經(jīng)典和主流的儀器，尤其與熒光檢測(cè)器（FLD）聯(lián)用。
- 熒光檢測(cè)器（FLD）： OTA本身具有天然熒光特性，HPLC-FLD是因其高靈敏度、選擇性和相對(duì)較低成本而成為常規(guī)檢測(cè)的首選方法。
高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀（HPLC-MS/MS）： 提供更高的靈敏度、選擇性和確認(rèn)能力。尤其適用于復(fù)雜基質(zhì)（如香料、中草藥）、需要同時(shí)檢測(cè)多種真菌毒素或痕量水平（ppb甚至ppt級(jí)）的檢測(cè)，是確證和高端研究的主要工具。
免疫親和柱凈化系統(tǒng)： 用于樣本前處理，基于抗原-抗體特異性結(jié)合原理，選擇性吸附OTA，有效去除樣品中的干擾雜質(zhì)，大幅提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性和靈敏度。
固相萃取裝置（SPE）： 另一種常用的凈化手段，利用不同填料對(duì)目標(biāo)物和雜質(zhì)的吸附/洗脫差異進(jìn)行凈化。
均質(zhì)器/粉碎機(jī)： 用于樣品的粉碎和均質(zhì)化。
離心機(jī)： 用于樣本提取液的分離。
旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀/氮吹儀： 用于溶液濃縮。
酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定儀（ELISA Reader）： 用于基于免疫學(xué)原理的快速篩查法（ELISA試劑盒），適用于大批量樣品的初篩。

檢測(cè)方法

赭曲霉毒素A的檢測(cè)是一個(gè)包含樣本前處理和儀器分析的系統(tǒng)過(guò)程，主要方法如下：

樣本前處理（關(guān)鍵步驟）：
- 提取： 通常使用酸性有機(jī)溶劑混合物（最常用的是乙腈/水/乙酸或甲醇/水）對(duì)粉碎均質(zhì)的樣品進(jìn)行振蕩或均質(zhì)提取，將OTA從基質(zhì)中溶解出來(lái)。
- 凈化： 去除提取液中干擾檢測(cè)的脂類(lèi)、蛋白質(zhì)、色素等雜質(zhì)。主要方法：
  - 免疫親和柱凈化法： 利用OTA特異性抗體鍵合在柱填料上，選擇性吸附OTA，洗去雜質(zhì)后，再用洗脫溶劑將OTA洗脫下來(lái)。該法凈化效果好，回收率高，是目前國(guó)際主流和推薦的方法（尤其與HPLC-FLD或LC-MS/MS聯(lián)用）。
  - 固相萃取法（SPE）： 常使用C18柱、混合型陰離子交換柱等進(jìn)行凈化。
- 濃縮與復(fù)溶： 將凈化后的洗脫液適當(dāng)濃縮、吹干或稀釋?zhuān)瑥?fù)溶到適合儀器進(jìn)樣的溶劑體系中。
儀器分析：
- HPLC-FLD法：
  - 色譜柱：常用反相C18色譜柱。
  - 流動(dòng)相：乙腈/水/乙酸或甲醇/水/乙酸的混合體系。
  - 檢測(cè)：激發(fā)波長(zhǎng)~333 nm，發(fā)射波長(zhǎng)~477 nm (具體波長(zhǎng)需根據(jù)儀器優(yōu)化)。根據(jù)保留時(shí)間和特征熒光峰進(jìn)行定性與定量。
  - 特點(diǎn)：靈敏、穩(wěn)定、成本相對(duì)較低，是官方機(jī)構(gòu)和企業(yè)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用的常規(guī)方法。
- LC-MS/MS法：
  - 色譜分離條件類(lèi)似HPLC。
  - 質(zhì)譜檢測(cè)：在ESI負(fù)離子模式下，監(jiān)測(cè)OTA的母離子（m/z 403.8 → [M-H]?）及其特征子離子碎片（如 m/z 358.8, 239.0）。通過(guò)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式進(jìn)行高選擇性、高靈敏度檢測(cè)。
  - 特點(diǎn)：靈敏度極高（可達(dá)ppt級(jí)），抗干擾能力強(qiáng)，可同時(shí)檢測(cè)多種真菌毒素，是復(fù)雜基質(zhì)檢測(cè)、痕量分析和確證的金標(biāo)準(zhǔn)。
- 酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）：
  - 基于抗原-抗體反應(yīng)原理的快速篩選方法。
  - 通常采用競(jìng)爭(zhēng)法，樣品中的OTA與固定在微孔板上的OTA抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合特定的酶標(biāo)記抗體。
  - 通過(guò)底物顯色，利用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值，間接計(jì)算OTA含量。
  - 特點(diǎn)：操作相對(duì)簡(jiǎn)便、快速、高通量，成本低，適用于現(xiàn)場(chǎng)快速篩查和大批量樣本初篩。但可能存在一定的假陽(yáng)性/假陰性，陽(yáng)性結(jié)果通常需用色譜法進(jìn)行確證。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

為確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可比性，赭曲霉毒素A的檢測(cè)必須遵循國(guó)家或國(guó)際認(rèn)可的標(biāo)準(zhǔn)方法。國(guó)內(nèi)外主要相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)包括：

國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：
- ISO 15141 系列： 《谷物、谷物制品和動(dòng)物飼料中赭曲霉毒素A的測(cè)定免疫親和柱凈化-高效液相色譜法》(ISO 15141-1:1998) 和《... 免疫親和柱凈化-柱后衍生高效液相色譜法》(ISO 15141-2:1998)。
- CEN 系列： 歐洲標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（CEN）也制定了類(lèi)似的標(biāo)準(zhǔn)（如EN...）。
中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB）：
- GB 5009.96-2016： 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中赭曲霉毒素A的測(cè)定》。這是中國(guó)現(xiàn)行最主要的強(qiáng)制性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，詳細(xì)規(guī)定了：
  - 第一法：免疫親和層析凈化高效液相色譜法（核心方法，類(lèi)似ISO 15141-1）。
  - 第二法：免疫親和層析凈化液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（確證方法）。
  - 第三法：同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（高精度確證法）。
- GB 2761-2017： 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了OTA在各種食品（如谷物及其制品、豆類(lèi)及其制品、葡萄酒等）中的最大允許限量（MRLs），是判定檢測(cè)結(jié)果是否合格的根本依據(jù)。
行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)/地方標(biāo)準(zhǔn)： 如SN/T進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫標(biāo)準(zhǔn)、農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)等也可能包含特定產(chǎn)品中OTA的檢測(cè)規(guī)定。