您現(xiàn)在的位置：首頁 > 檢測項目 > 其他檢測

游離生物素檢測

1對1客服專屬服務，免費制定檢測方案，15分鐘極速響應

可選形式：電子報告紙質(zhì)報告

可選語言：中文報告英文報告

發(fā)布時間：2025-07-20 10:34:18 更新時間：2025-07-19 10:34:18

點擊：0

作者：中科光析科學技術研究所檢測中心

游離生物素檢測概述

游離生物素（Free Biotin），即維生素B7或維生素H，是一種水溶性的B族維生素，在碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝中扮演著至關重要的輔酶角色。它在維持皮膚、頭發(fā)、指甲健康以及神經(jīng)系統(tǒng)功能中不可或缺。由于人體無法自身合成生物素，必須通過膳食或補充劑攝取，因此準確檢測食品、藥品、保健品及生物樣本中的游離生物素含量，對于確保產(chǎn)品質(zhì)量、評估營養(yǎng)狀況、監(jiān)控生產(chǎn)過程和保障消費者健康具有重大意義。游離生物素檢測主要針對樣品中未與蛋白質(zhì)結(jié)合、處于自由狀態(tài)、可直接被生物體利用的生物素分子進行分析，是相關領域質(zhì)量控制與安全評估的核心項目之一。

檢測項目

游離生物素檢測的核心項目通常包括：

1. 含量測定： 定量測定樣品中游離生物素的絕對含量，通常以微克/克(μg/g)或微克/毫升(μg/mL)表示。這是最基本也是最重要的檢測項目，用于判斷產(chǎn)品是否符合標示值、營養(yǎng)強化水平或研究樣本中的實際濃度。

2. 純度分析： 在原料藥或高純度標準品檢測中，評估游離生物素主成分的純度，檢測并量化相關雜質(zhì)（如降解產(chǎn)物、合成中間體等）的含量。

3. 雜質(zhì)檢測： 識別和定量樣品中可能存在的特定雜質(zhì)，如生物素砜、生物素亞砜等氧化產(chǎn)物或其他結(jié)構(gòu)類似物。

檢測儀器

游離生物素的檢測高度依賴于精密的儀器分析技術，主要使用的儀器包括：

1. 高效液相色譜儀 (HPLC)： 這是目前檢測游離生物素最常用、最成熟的技術平臺。核心部件包括高壓輸液泵、自動進樣器、色譜柱（通常使用C18反相色譜柱）、柱溫箱和檢測器。

2. 紫外-可見光檢測器 (UV-Vis Detector) 或二極管陣列檢測器 (DAD)： 生物素在210nm左右有特征紫外吸收峰，常用于HPLC檢測。

3. 熒光檢測器 (FLD)： 生物素本身熒光較弱，檢測常需使用衍生化試劑（如熒光胺）與之反應生成具有強熒光的衍生物，再通過FLD進行高靈敏度檢測，檢出限更低。

4. 質(zhì)譜儀 (MS)： 常與HPLC聯(lián)用（LC-MS或LC-MS/MS）。特別是串聯(lián)質(zhì)譜（MS/MS），通過母離子和特征子離子的選擇，提供極高的選擇性和靈敏度，能有效排除基質(zhì)干擾，準確鑒定和定量生物素及其相關物質(zhì)。常用于復雜基質(zhì)（如生物體液、全價飼料）或痕量分析。

5. 其他輔助設備： 電子天平（精確稱量）、pH計（調(diào)節(jié)溶液pH）、離心機（樣品前處理）、氮吹儀/真空濃縮儀（濃縮樣品）、超聲波清洗器（輔助溶解、提?。?、恒溫水浴鍋（控制衍生化溫度）等。

檢測方法

游離生物素的檢測方法主要基于色譜分離技術，最常見的有：

1. 高效液相色譜法 (HPLC)：

HPLC-UV法： 樣品經(jīng)適當提?。ǔＳ盟崴?、酶解或溶劑提取釋放游離生物素）和凈化（如固相萃取SPE去除干擾物）后，直接或衍生化后注入HPLC系統(tǒng)，利用C18柱分離，在210nm左右用UV檢測器檢測。操作相對簡便，成本較低。
HPLC-FLD法： 樣品前處理后，利用熒光胺等試劑與生物素的伯胺基團反應生成強熒光衍生物，經(jīng)HPLC分離后在激發(fā)波長~390nm，發(fā)射波長~475nm處用熒光檢測器檢測。靈敏度遠高于UV法，適用于低含量樣品。

2. 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 (LC-MS/MS)：

這是目前最先進、最可靠的方法，尤其適用于復雜基質(zhì)和痕量分析。樣品經(jīng)提取、凈化后，進行LC分離（常用C18柱）。
質(zhì)譜部分通常采用電噴霧離子源（ESI）在正離子模式下將生物素離子化為[M+H]+離子（質(zhì)荷比m/z 245），選擇該離子作為母離子，再通過碰撞誘導解離（CID）產(chǎn)生特征性子離子（如m/z 227, 123等），在多重反應監(jiān)測（MRM）模式下進行定量。
LC-MS/MS法選擇性極高，抗干擾能力強，靈敏度可達ng/mL甚至pg/mL級別，是國際公認的金標準方法。

3. 微生物法：

利用對生物素具有特異性生長需求的微生物（如植物乳桿菌 Lactobacillus plantarum），其生長量或代謝物產(chǎn)量與樣品中生物素濃度在一定范圍內(nèi)成正比。通過測定濁度或酸度變化來定量生物素。
此方法反映的是生物可利用的生物素總量（包括游離態(tài)和部分結(jié)合態(tài)），對實驗條件要求嚴格，耗時長，重現(xiàn)性相對較差，但在評估生物可利用性方面仍有其價值?，F(xiàn)代實驗室中作為主要定量方法已較少使用。

檢測標準

游離生物素的檢測需遵循相關的國家、行業(yè)或國際標準，以確保結(jié)果的準確性、可靠性和可比性。常見的標準包括：

1. 中國國家標準 (GB) 和藥典：

《中國藥典》：在相關原料藥、維生素類藥品及其制劑的質(zhì)量標準中，通常規(guī)定采用HPLC-UV法或HPLC-FLD法測定生物素含量。方法詳細描述了色譜條件（如色譜柱型號、流動相組成與比例、流速、檢測波長等）、供試品溶液制備、對照品溶液制備和系統(tǒng)適用性要求。
食品安全國家標準 (GB 5009): 如嬰幼兒食品和乳品中生物素的測定，可能參考或規(guī)定微生物法或色譜法（如GB 5413.19）。

2. 國際標準：

AOAC International (AOAC): 提供多種食品、膳食補充劑中生物素測定的官方方法，例如：
- AOAC 992.07：嬰幼兒配方奶粉中維生素的測定 - 微生物法（包括生物素）。
- AOAC 2011.13：多種維生素制劑中維生素的測定 - HPLC-UV法（包含生物素）。
- AOAC 2015.06：強化食品和補充劑中維生素的測定 - LC-MS/MS法（涵蓋生物素）。
United States Pharmacopeia (USP): 美國藥典中收載了原料藥和制劑中生物素的含量測定方法，主要為HPLC-UV法。
European Pharmacopoeia (Ph. Eur.): 歐洲藥典同樣規(guī)定了藥用生物素的HPLC測定方法。

3. 行業(yè)標準/企業(yè)內(nèi)部標準： 特定行業(yè)（如飼料、化妝品）或大型企業(yè)可能制定更嚴格或特定于其產(chǎn)品的檢測標準和方法。

選擇檢測方法時，必須依據(jù)樣品的性質(zhì)（基質(zhì)）、預期檢測的濃度范圍、可用的儀器設備以及需遵循的具體法規(guī)或標準要求來決定。LC-MS/MS方法因其卓越的性能，在高端研究和法規(guī)要求日益嚴格的領域應用越來越廣泛。