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單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-19 20:00:04 更新時(shí)間：2025-07-18 20:00:04

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌檢測(cè)介紹

單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）是一種革蘭氏陽(yáng)性、兼性厭氧的致病菌，廣泛存在于土壤、水體、植物和動(dòng)物中，主要通過(guò)污染的食物鏈傳播，尤其常見于生肉、乳制品、即食食品和加工食品中。該菌能引起嚴(yán)重的食源性疾病——李斯特菌?。╨isteriosis），在易感人群如孕婦、新生兒、老年人和免疫力低下者中可能導(dǎo)致敗血癥、腦膜炎、流產(chǎn)甚至死亡，死亡率高達(dá)20-30%。因此，在食品安全監(jiān)控、公共衛(wèi)生和臨床診斷中，對(duì)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的檢測(cè)至關(guān)重要。隨著全球食品貿(mào)易的增加和食源性疾病頻發(fā)，高效準(zhǔn)確的檢測(cè)技術(shù)已成為預(yù)防和控制李斯特菌病爆發(fā)的核心手段。檢測(cè)工作通常在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下進(jìn)行，涉及食品、環(huán)境樣本（如加工設(shè)備表面）或臨床標(biāo)本的分析，以評(píng)估污染風(fēng)險(xiǎn)和制定干預(yù)措施。本篇文章將聚焦于該菌檢測(cè)的關(guān)鍵方面，包括檢測(cè)項(xiàng)目、檢測(cè)儀器、檢測(cè)方法和檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，為相關(guān)從業(yè)人員提供實(shí)用參考。

檢測(cè)項(xiàng)目

單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的檢測(cè)項(xiàng)目通常圍繞目標(biāo)樣本中菌體的存在、數(shù)量、活性和特征分型展開，旨在評(píng)估污染程度和潛在危害。主要項(xiàng)目包括：定性檢測(cè)，即判斷樣本中是否含有該菌，適用于快速篩查；定量檢測(cè)，測(cè)定單位體積（如克或毫升）樣本中的菌落形成單位（CFU），用于評(píng)估污染水平；活性檢測(cè)，區(qū)分活菌與死菌，以避免假陽(yáng)性結(jié)果，這在熱處理食品或消毒環(huán)境中尤為重要；血清型分型，通過(guò)血清學(xué)方法鑒定菌株的特定亞型（如1/2a、1/2b、4b），幫助追蹤污染源和研究流行病學(xué)特征；此外，還包括毒力基因檢測(cè)（如hlyA基因），以確認(rèn)菌株的致病潛力。這些項(xiàng)目?；贗SO或FDA標(biāo)準(zhǔn)要求，在食品檢驗(yàn)中如乳制品、肉制品和即食食品是常規(guī)檢測(cè)對(duì)象，確保符合微生物安全限值（例如，某些標(biāo)準(zhǔn)要求食品中不得檢出該菌）。

檢測(cè)儀器

在單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌檢測(cè)中，使用多種高精度儀器來(lái)支持樣本處理、培養(yǎng)和分析過(guò)程。核心儀器包括：恒溫培養(yǎng)箱，用于樣本增菌和菌落生長(zhǎng)，溫度通?？刂圃?0-37°C；自動(dòng)化菌落計(jì)數(shù)器或顯微鏡，用于觀察和計(jì)數(shù)平板上的菌落形態(tài)；PCR儀（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀），用于分子生物學(xué)檢測(cè)，快速擴(kuò)增目標(biāo)DNA序列；酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）閱讀器，配合試劑盒實(shí)現(xiàn)基于抗體的快速免疫檢測(cè)；生物傳感器或微流控設(shè)備，用于現(xiàn)場(chǎng)或高通量篩查；此外，輔助儀器如離心機(jī)（用于樣本濃縮）、水浴鍋（用于溫度控制）和生物安全柜（確保操作安全）也必不可少。這些儀器通常集成在實(shí)驗(yàn)室平臺(tái)上，例如PCR儀可配備實(shí)時(shí)熒光系統(tǒng)以提高靈敏度，而全自動(dòng)微生物檢測(cè)系統(tǒng)（如BD BACTEC）能實(shí)現(xiàn)從增菌到結(jié)果報(bào)告的流程化處理。選擇儀器時(shí)需考慮其靈敏度、特異性和通量，以滿足不同檢測(cè)項(xiàng)目的需求。

檢測(cè)方法

檢測(cè)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌的方法多樣，可分為傳統(tǒng)培養(yǎng)法、分子生物學(xué)法和免疫學(xué)法三大類。傳統(tǒng)培養(yǎng)法是基礎(chǔ)方法，包括增菌步驟（如使用Fraser肉湯在30°C培養(yǎng)24-48小時(shí)，促進(jìn)菌體生長(zhǎng)）、平板分離（在選擇性培養(yǎng)基如PALCAM或Oxford瓊脂上培養(yǎng)，形成典型灰綠色菌落）和生化鑒定（通過(guò)API Listeria試劑條測(cè)試糖發(fā)酵特性）。分子生物學(xué)法涉及PCR技術(shù)（如實(shí)時(shí)熒光定量PCR），針對(duì)特異性基因（如prfA或inlA）進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)快速（24小時(shí)內(nèi)出結(jié)果）、高靈敏度（可檢出低至1-10 CFU/g）的分析；此外，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）方法也常用于現(xiàn)場(chǎng)篩查。免疫學(xué)法包括ELISA和免疫磁珠分離法，利用特異性抗體捕獲菌體，結(jié)合酶標(biāo)記進(jìn)行顯色檢測(cè)，適用于批量樣本的快速定性分析。新興方法如宏基因組測(cè)序（metagenomics）正逐漸應(yīng)用，以無(wú)偏性地識(shí)別樣本中的所有微生物。每種方法各有優(yōu)勢(shì)：傳統(tǒng)法準(zhǔn)確性高但耗時(shí)長(zhǎng)（需3-7天），分子和免疫法快速但需專業(yè)設(shè)備，實(shí)際應(yīng)用中常組合使用以提高效率。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

為確保單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌檢測(cè)結(jié)果的可靠性和可比性，需遵循嚴(yán)格的國(guó)際和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。主要標(biāo)準(zhǔn)包括：ISO標(biāo)準(zhǔn)，如ISO 11290-1（針對(duì)食品和環(huán)境樣本的定性檢測(cè)方法）和ISO 11290-2（定量方法），規(guī)定增菌、分離和確認(rèn)步驟的詳細(xì)規(guī)程；美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）的Bacteriological Analytical Manual（BAM）Chapter 10，提供官方檢測(cè)指南，包括PCR和培養(yǎng)法；歐盟委員會(huì)法規(guī)（如EC No 2073/2005），設(shè)定食品中該菌的限量要求（例如，即食食品中不得檢出）；中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)如GB 4789.30-2016，類似ISO方法但適應(yīng)本土需求；AOAC國(guó)際方法（如AOAC 993.12），用于驗(yàn)證商業(yè)檢測(cè)試劑盒的性能。這些標(biāo)準(zhǔn)強(qiáng)調(diào)質(zhì)量控制和驗(yàn)證，例如要求使用陽(yáng)性對(duì)照樣品、重復(fù)性測(cè)試和實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證（如ISO/IEC 17025）。遵循標(biāo)準(zhǔn)能確保檢測(cè)數(shù)據(jù)被全球認(rèn)可，支持食品安全法規(guī)的執(zhí)行和疾病預(yù)防。