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凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌計(jì)數(shù)檢測(cè)

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-19 09:42:01 更新時(shí)間：2025-07-18 09:42:01

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測(cè)中心

凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌計(jì)數(shù)檢測(cè)概述

凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌（Coagulase-Positive Staphylococci, CPS）是一類能產(chǎn)生凝固酶的致病性葡萄球菌，其中最具代表性的是金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。這類細(xì)菌廣泛存在于環(huán)境及人體皮膚黏膜中，其產(chǎn)生的腸毒素可導(dǎo)致食物中毒、創(chuàng)口感染、敗血癥等嚴(yán)重健康風(fēng)險(xiǎn)。在食品安全、醫(yī)療消毒和公共衛(wèi)生領(lǐng)域，對(duì)CPS的定量檢測(cè)至關(guān)重要。通過(guò)精確計(jì)數(shù)，可評(píng)估食品加工環(huán)節(jié)的衛(wèi)生狀況、醫(yī)療器具的滅菌效果以及環(huán)境樣本的生物污染程度，為疾病防控和質(zhì)量管理提供科學(xué)依據(jù)。國(guó)際食品法規(guī)和藥典均將CPS計(jì)數(shù)列為關(guān)鍵微生物指標(biāo)，其檢測(cè)結(jié)果直接關(guān)系到產(chǎn)品安全性和合規(guī)性。

檢測(cè)項(xiàng)目

核心檢測(cè)項(xiàng)目包括：樣本中凝固酶陽(yáng)性葡萄球菌的活菌總數(shù)定量分析，重點(diǎn)識(shí)別金黃色葡萄球菌；同時(shí)驗(yàn)證菌株的凝固酶活性（通過(guò)試管法或玻片法）；部分檢測(cè)要求延伸進(jìn)行腸毒素基因篩查或耐藥性測(cè)試。檢測(cè)樣本覆蓋食品（乳制品、肉類、即食食品）、水樣、醫(yī)療器械表面拭子及臨床分離株等。

檢測(cè)儀器

主要儀器設(shè)備包含：
1. 微生物培養(yǎng)系統(tǒng)：恒溫培養(yǎng)箱（35-37℃）、厭氧培養(yǎng)罐
2. 分離鑒定設(shè)備：生物安全柜、顯微成像系統(tǒng)、自動(dòng)化菌落計(jì)數(shù)儀
3. 生化分析儀：PCR儀（用于nuc基因或mecA基因檢測(cè)）、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF MS）
4. 輔助設(shè)備：均質(zhì)器（食品樣本前處理）、離心機(jī)、pH計(jì)

檢測(cè)方法

標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)流程采用三步法：
第一步：選擇性增菌培養(yǎng)
使用7.5%氯化鈉肉湯或Baird-Parker肉湯，37℃培養(yǎng)24小時(shí)，富集潛在目標(biāo)菌。
第二步：平板分離鑒定
接種Baird-Parker瓊脂平板（含卵黃亞碲酸鉀），典型菌落呈黑色帶光暈?？梢删湫柽M(jìn)行革蘭氏染色（鏡檢為G+球菌）、過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)（陽(yáng)性）及凝固酶確證試驗(yàn)（兔血漿凝固）。
第三步：定量計(jì)數(shù)
采用平板涂布法或MPN法，計(jì)算公式：菌落數(shù)（CFU/g或CFU/mL）= 平板平均菌落數(shù) × 稀釋倍數(shù)。自動(dòng)化系統(tǒng)可結(jié)合顯色培養(yǎng)基（如CHROMagar?）提升效率。

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

國(guó)際主流標(biāo)準(zhǔn)體系包括：
1. ISO 6888系列：ISO 6888-1:2021（水平計(jì)數(shù)法）和ISO 6888-2:2021（MPN法），規(guī)定培養(yǎng)基配方、確認(rèn)程序及結(jié)果報(bào)告規(guī)范
2. FDA BAM Chapter 12：美國(guó)食品藥品管理局細(xì)菌學(xué)分析手冊(cè)，要求BP平板確認(rèn)后需進(jìn)行溶血試驗(yàn)和核酸酶試驗(yàn)
3. GB 4789.10-2016：中國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，明確樣品處理、檢測(cè)限（10 CFU/g）及金黃色葡萄球菌特異性鑒定流程
4. 藥典標(biāo)準(zhǔn)：USP <62>和EP 2.6.12對(duì)非無(wú)菌藥品的CPS限值設(shè)定為≤102 CFU/g

所有標(biāo)準(zhǔn)均強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)控要求，包括陽(yáng)性對(duì)照（ATCC 25923菌株）和陰性對(duì)照，確保結(jié)果準(zhǔn)確性。