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人工手表面細(xì)菌菌落總數(shù)檢測

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發(fā)布時(shí)間：2025-07-15 15:13:12 更新時(shí)間：2025-07-14 15:13:12

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作者：中科光析科學(xué)技術(shù)研究所檢測中心

人工手表面細(xì)菌菌落總數(shù)檢測

手部衛(wèi)生是預(yù)防和控制疾病傳播，尤其是在醫(yī)療保健、食品加工、制藥等行業(yè)中至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。人體手部皮膚表面天然存在大量微生物，包括細(xì)菌、真菌等，其中相當(dāng)一部分屬于條件致病菌或暫駐菌群。這些微生物可通過直接接觸傳播，成為交叉感染或產(chǎn)品污染的重要源頭。因此，定期或規(guī)范地對操作人員（尤其是關(guān)鍵崗位人員）的手部表面進(jìn)行細(xì)菌菌落總數(shù)檢測，是評估手部清潔消毒效果、監(jiān)控衛(wèi)生狀況、驗(yàn)證衛(wèi)生程序有效性的核心手段之一。通過科學(xué)的檢測方法獲得的數(shù)據(jù)，為制定和改進(jìn)手衛(wèi)生規(guī)范、提升衛(wèi)生管理水平提供了客觀依據(jù)，對保障公共衛(wèi)生安全和產(chǎn)品質(zhì)量具有不可替代的作用。

檢測項(xiàng)目

本檢測的核心項(xiàng)目為人工手表面細(xì)菌菌落總數(shù)。具體是指附著在人體雙手皮膚表面（通常指經(jīng)特定清潔或消毒程序后，或日常狀態(tài)下）的、在特定培養(yǎng)條件下（通常為營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，于30-35℃需氧培養(yǎng)48±2小時(shí)）生長繁殖形成的肉眼可見的細(xì)菌菌落數(shù)量。結(jié)果通常以每平方厘米手部表面積所含的菌落形成單位（Colony Forming Units, CFU/cm2）表示。該指標(biāo)綜合反映了手部表面需氧或兼性厭氧的嗜中溫細(xì)菌的存活數(shù)量，是評價(jià)手部衛(wèi)生潔凈度的最常用和最關(guān)鍵的微生物學(xué)指標(biāo)。

檢測儀器與材料

進(jìn)行人工手表面細(xì)菌菌落總數(shù)檢測需使用以下主要儀器與材料： 1. 無菌采樣耗材： - 無菌一次性手套： 供采樣人員佩戴，避免自身手部污染樣品。 - 無菌棉拭子或特定設(shè)計(jì)的取樣海綿/布： 用于涂抹法采樣。棉拭子需配備含中和劑（如0.1%蛋白胨、0.85%生理鹽水或D/E中和肉湯等）的無菌洗脫液試管。 - 一次性無菌薄膜接觸皿（RODAC Plate）： 內(nèi)含標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂（Plate Count Agar, PCA）或胰蛋白胨大豆瓊脂（Tryptic Soy Agar, TSA），瓊脂表面凸起，專用于接觸印壓法采樣。 - 無菌鑷子。 2. 培養(yǎng)設(shè)備： - 恒溫培養(yǎng)箱： 溫度設(shè)定在30-35℃，精度±1℃。 3. 稀釋與接種設(shè)備： - 無菌移液管或微量移液器及無菌吸頭。 - 無菌生理鹽水（0.85% NaCl）或磷酸鹽緩沖液（PBS）。 - 無菌平皿（直徑90mm）。 4. 培養(yǎng)基： - 平板計(jì)數(shù)瓊脂（PCA）或胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）： 用于傾注或涂布培養(yǎng)。 5. 計(jì)數(shù)工具： - 菌落計(jì)數(shù)器（手動或自動）。 - 放大鏡。 6. 消毒與防護(hù)用品： - 75%乙醇或其他適宜消毒劑。 - 酒精燈。 - 生物安全柜或潔凈工作臺（推薦使用，尤其是處理樣品時(shí)）。

檢測方法

人工手表面細(xì)菌菌落總數(shù)的檢測主要采用以下兩種標(biāo)準(zhǔn)方法： 1. 涂抹法（Swab Method）： - 采樣區(qū)域標(biāo)記： 使用無菌模板或測量尺，在受檢者單手掌心及五指指尖區(qū)域（通常合計(jì)約30 cm2）劃定標(biāo)準(zhǔn)采樣面積。 - 采樣操作： 采樣人員佩戴無菌手套，用無菌鑷子取無菌棉拭子（或海綿/布），蘸取適量含中和劑的無菌洗脫液（確保濕潤但不滴落）。在標(biāo)記區(qū)域內(nèi)，用力且均勻地往返涂抹采樣表面（包括指縫、甲溝等易忽略部位），同時(shí)緩慢轉(zhuǎn)動棉拭子，確保整個(gè)棉頭充分接觸皮膚。涂抹時(shí)間通常為30秒至1分鐘。將采樣后的棉拭子頭部剪斷或直接放入原洗脫液試管中（若使用海綿/布，則放入含洗脫液的無菌袋/瓶中）。 - 洗脫與稀釋： 在試管/袋/瓶內(nèi)充分振蕩（或使用均質(zhì)器）一定時(shí)間（如1-2分鐘），使微生物洗脫至液體中。根據(jù)預(yù)估的菌落數(shù)量，可能需要進(jìn)行系列10倍稀釋。 - 傾注培養(yǎng)： 取適量（通常1mL）洗脫液或稀釋液，加入無菌平皿中，立即傾注約15-20mL冷卻至45-50℃的PCA或TSA培養(yǎng)基，輕輕旋轉(zhuǎn)平皿混勻。待瓊脂凝固后，倒置于30-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48±2小時(shí)。 - 菌落計(jì)數(shù)： 培養(yǎng)結(jié)束后，計(jì)數(shù)平皿上所有肉眼可見的菌落（通常選擇菌落數(shù)在30-300 CFU之間的平板計(jì)數(shù)）。 2. 接觸印壓法（Contact Plate / RODAC Plate Method）： - 準(zhǔn)備接觸皿： 取出無菌的RODAC接觸皿（瓊脂表面凸起且無菌、平整、無冷凝水）。 - 采樣操作： 采樣人員佩戴無菌手套，從包裝中取出接觸皿，將其凸起的瓊脂表面輕輕、均勻地按壓在受檢者單手的整個(gè)掌面（包括手指和指縫），施加穩(wěn)定壓力（通常1公斤左右），確保瓊脂與皮膚充分接觸約5-10秒鐘。避免在瓊脂表面滑動。 - 培養(yǎng)： 將接觸皿蓋好，倒置于30-35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48±2小時(shí)。 - 菌落計(jì)數(shù)： 培養(yǎng)結(jié)束后，直接計(jì)數(shù)瓊脂表面上生長出的所有菌落。接觸皿法通常無需稀釋，結(jié)果直接以每個(gè)接觸皿（代表特定面積，通常是25 cm2）的菌落數(shù)（CFU/plate）表示，可換算為CFU/cm2。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

人工手表面細(xì)菌菌落總數(shù)的檢測和結(jié)果判定需遵循相關(guān)的國家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)規(guī)范或國際指南。主要參考標(biāo)準(zhǔn)包括： 1. 中國國家標(biāo)準(zhǔn)： - GB 15979-2002 《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》： 該標(biāo)準(zhǔn)附錄C規(guī)定了“手（或皮膚）消毒效果鑒定試驗(yàn)”方法（主要采用涂抹法），并對手部消毒后的細(xì)菌菌落總數(shù)限值有明確要求（例如：衛(wèi)生手消毒后≤10 CFU/cm2；外科手消毒后≤5 CFU/cm2）。這是國內(nèi)醫(yī)療、衛(wèi)生用品行業(yè)最常引用的標(biāo)準(zhǔn)之一。 - GB 14934-2016 《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 消毒餐（飲）具》： 雖然主要針對餐具，但其附錄D“手部表面微生物檢測方法”也可作為食品從業(yè)人員手部衛(wèi)生檢測的參考。 2. 國際標(biāo)準(zhǔn)： - ISO 18593:2018 《食物鏈微生物學(xué) - 表面采樣水平方法》： 該國際標(biāo)準(zhǔn)詳細(xì)規(guī)定了包括手部在內(nèi)的各種表面的采樣方法（如棉拭子法、接觸板法），適用于食品加工環(huán)境，是國際上廣泛認(rèn)可的方法標(biāo)準(zhǔn)。 - WHO Guidelines on Hand Hygiene in Health Care： 世界衛(wèi)生組織的醫(yī)療保健手衛(wèi)生指南中，對醫(yī)護(hù)人員手部衛(wèi)生的監(jiān)測方法和標(biāo)準(zhǔn)（如手術(shù)前手消毒后<5 CFU/cm2）提供了權(quán)威建議。 結(jié)果判定依據(jù)： 最終的檢測結(jié)果需要根據(jù)具體的應(yīng)用場景和所遵循的標(biāo)準(zhǔn)來判定是否合格。例如： - 醫(yī)療領(lǐng)域（外科洗手/手消毒后）：常參考GB 15979或WHO標(biāo)準(zhǔn)（≤5 CFU/cm2）。 - 食品加工行業(yè)：不同國家或企業(yè)內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)可能不同，常見的要求是清潔操作前手部<100 CFU/cm2，消毒后<10 CFU/cm2 或更低，具體需依據(jù)HACCP計(jì)劃和相關(guān)法規(guī)要求。

注意事項(xiàng)： 采樣前應(yīng)確保受檢者已完成規(guī)定的洗手/消毒程序并待其干燥；采樣過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，避免環(huán)境或采樣人員造成的污染；實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立有效的質(zhì)量控制體系（如培養(yǎng)基驗(yàn)收、空白對照、環(huán)境監(jiān)測等）以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。