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UGPase馬鈴薯內(nèi)源基因檢測

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發(fā)布時間：2025-07-25 08:49:03 更新時間：2025-07-24 22:20:10

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作者：中科光析科學技術(shù)研究所檢測中心

UGPase馬鈴薯內(nèi)源基因檢測的重要性

UGPase（尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶）是馬鈴薯（Solanum tuberosum）中參與淀粉合成和糖代謝的關(guān)鍵酶，其編碼基因的表達水平直接影響塊莖的產(chǎn)量與品質(zhì)。隨著馬鈴薯育種技術(shù)和轉(zhuǎn)基因研究的深入，準確檢測UGPase內(nèi)源基因的存在及表達情況成為品種鑒定、遺傳改良和食品安全評估的重要環(huán)節(jié)。通過檢測UGPase基因，可驗證轉(zhuǎn)基因馬鈴薯中外源基因插入是否影響內(nèi)源基因功能，同時為天然品種的遺傳穩(wěn)定性提供科學依據(jù)。因此，建立標準化、高靈敏的檢測方法對馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展具有重要意義。

檢測項目

UGPase馬鈴薯內(nèi)源基因檢測的核心項目包括：
1. 基因序列特異性分析：確認目標基因的保守序列及引物結(jié)合位點；
2. 基因表達水平定量：通過qRT-PCR測定不同生長階段或處理條件下的mRNA表達量；
3. 拷貝數(shù)變異檢測：評估基因組中UGPase基因的拷貝數(shù)是否異常；
4. 突變與多態(tài)性分析：鑒定自然或人工誘變導致的基因突變位點。

檢測儀器

檢測需依托專業(yè)儀器設備，主要包括：
- 實時熒光定量PCR儀（如Bio-Rad CFX96）：用于基因表達量的高精度定量；
- 核酸電泳系統(tǒng)（如Thermo Fisher MiniAmp）：驗證PCR產(chǎn)物大小與純度；
- 基因測序儀（如Illumina MiSeq）：用于突變分析和序列比對；
- 超微量分光光度計（如NanoDrop One）：快速測定DNA/RNA濃度及純度。

檢測方法

檢測流程基于分子生物學技術(shù)，主要步驟如下：
1. 樣本制備：采集馬鈴薯葉片或塊莖組織，提取高純度基因組DNA及總RNA；
2. 引物設計：根據(jù)UGPase基因保守區(qū)（如GenBank登錄號XM_006351415.2）設計特異性引物；
3. PCR擴增：采用梯度PCR優(yōu)化退火溫度，確保擴增特異性；
4. 定量分析：以β-actin或EF1α為內(nèi)參基因，通過2^-ΔΔCt法計算相對表達量；
5. 數(shù)據(jù)驗證：通過熔解曲線分析和瓊脂糖凝膠電泳排除非特異性擴增。

檢測標準

檢測需遵循國際及行業(yè)標準以確保結(jié)果準確性：
- ISO 21571:2013：食品中核酸提取與純化技術(shù)規(guī)范；
- MIQE指南（Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments）：規(guī)范qPCR實驗設計與數(shù)據(jù)報告；
- GB/T 19495.4-2018：轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品檢測的分子生物學方法；
- 內(nèi)源基因檢測閾值設定：Ct值≤35且擴增效率在90%-110%范圍內(nèi)視為有效數(shù)據(jù)。